PD-L1免疫组化试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及检测人组织特别是人肿瘤组织中PD‑L1蛋白表达的免疫组化试剂和试剂盒及其制备方法和应用。

【技术实现步骤摘要】
技术背景程序性死亡分子1(PD-1)主要表达于活化的T淋巴细胞、B淋巴细胞和巨噬细胞表面。程序性死亡分子1配体-1(PD-L1)，又称B7同源分子1(B7-H1)是PD-1的配体，属于I型跨膜蛋白。PD-L1与PD-1结合后，由PD-1传递抑制性信号，能够抑制淋巴细胞的增殖和活化。近几年发现，一些病人的肿瘤细胞表面高度表达PD-L1，通过与肿瘤浸润淋巴细胞表面的PD-1分子结合，抑制淋巴细胞的功能，从而导致肿瘤发生免疫逃逸。临床实验研究表明，阻断PD-1或PD-L1可以有效地治疗或抑制肿瘤生长。因此，临床上需要简便易行的检测手段筛选出肿瘤组织或细胞高度表达PD-L1的肿瘤患者，为个性化地进行阻断PD-1或PD-L1的治疗提供指导和依据。附图简介图1是用6E8和MS-1215组合对人胎盘组织进行免疫组化染色结果。图2是用6E8和859643组合对人胎盘组织进行免疫组化染色结果。图3是用6E8和ENS004组合对人胎盘组织进行免疫组化染色结果。图4是用6E8和KIT-5010组合对人胎盘组织进行免疫组化染色结果。图5是用RIgG和MS-1215组合对人胎盘组织进行免疫组化染色结果。图6是用6E8和MS-1215组合对人肺鳞癌组织进行免疫组化染色结果。图7是用图6的对人肺鳞癌组织进行免疫组化阴性对照染色结果。专利技术概要本专利技术涉及一种PD-L1免疫组化试剂盒，用于检测人组织中，特别是人肿瘤组织中PD-L1蛋白的表达。免疫组化试剂盒一般至少包括用于特异性结合目的标记蛋白的一抗和结合一抗的带有可以被检测出的标记的二级抗体，这两种抗体的组合配对至关重要，找到一个最佳组合是开发一个优质免疫组化产品的关键。专利技术人针对抗人PD-L1抗体(一抗)和二抗进行了大量的试验，筛选了无数的组合，经过了反复的失败，终于找到了几个最佳组合，进而开发出了特异性强、灵敏度高的PD-L1免疫组化试剂盒。因此，一方面，本专利技术的PD-L1免疫组化试剂盒至少包括(1)抗人PD-L1抗体；和(2)可以和所述抗人PD-L1抗体结合的并带有可以被检测出的标记的二级抗体。其中抗人PD-L1抗体可以是鼠单抗、鼠多抗、兔单抗或兔多抗。已知的可以选用的抗人PD-L1抗体包括AbcamAnti-PD-L1antibody28-8货号ab205921、AbcamAnti-PD-L1antibody货号ab58810、AbcamAnti-PD-L1antibody货号ab153991、AbcamAnti-PD-L1抗体MIH2货号ab109052、ThermoFisherPD-L1/CD274Antibody货号PA5-20343、ThermoFisherPD-L1/CD274Antibody货号PA5-30937、ThermoFisherPD-L1/CD274Antibody货号PA5-28115、AbDSerotecRabbitantiHumanCD274货号AHP1703、AbDSerotecGoatantiHumanCD274(C-Terminal)货号AHP2128、MicroSpin(微旋)Anti-PD-L16E8(货号MS-1028)、SpringbiosciencePD-L1/CD274SP142货号M4420、CellSignalingTechnologyPD-L1RabbitmAb货号13684、CellSignalingTechnologyPD-L1(405.9A11)MousemAb货号29122、Dako28-8以及Dako22C3。可以和所述抗人PD-L1抗体结合的并带有可以被检测出的标记的二级抗体可以选自：深圳欣博盛酶标二抗货号ENS004、福州迈新酶标二抗货号KIT-0015、福州迈新酶标二抗货号KIT-0016、福州迈新酶标二抗货号KIT-5010、福州迈新酶标二抗货号KIT-9921、MicroSpin(微旋)酶标二抗货号MS-1215、LifeTechnologies酶标二抗货号859643、中杉金桥酶标二抗货号ZB-2301、eBioscience酶标二抗货号18-4818、Abcam酶标二抗货号ab20043、ThermoFisher酶标二抗货号A16110、Sigma-Aldrich酶标二抗货号A0168、以及Sigma-Aldrich酶标二抗货号SAB3701066。可选地，试剂盒可以还包含至少一种酶标底物作为显色剂例如显红色的AEC(3-氨基-9-乙基咔唑(3-amino-9-ethyl-carbazole)或显棕黄色的DAB(二氨基联苯氨Diaminobenzidin,DAB)。DAB可以是广州深达DAB货号KS003、博士德DAB货号AR1000、博士德DAB货号AR1026、中杉金桥DAB货号ZLI-9017、中杉金桥DAB货号ZLI-9031、迈新DAB货号DAB-0031、迈新DAB货号DAB-2031、SantaCruzBioDAB货号sc-24982、或者AbcamDAB货号ab103723。试剂盒还可以包含复染剂用于将细胞核染色以彰显细胞轮廓。适用的复染剂可以是苏木素(hematoxylin，染色后呈蓝色)、甲基绿(methylgreen,染色后呈绿色)、或核快红(nuclearfastred，呈红色)。合适的显色剂+复染剂组合可以是下列任一种：DAB+苏木素；DAB+甲基绿；DAB+核快红；AEC+苏木素；或AEC+甲基绿。在一个实施方案中，抗人PD-L1抗体(一抗)是Dako28-8。在一个实施方案中，抗人PD-L1抗体(一抗)是Dako22C3。在一个实施方案中，抗人PD-L1抗体(一抗)是6E8(MS-1028)。在一个实施方案中，二抗是羊抗鼠/兔二抗MS-1215。在一个实施方案中，二抗是羊抗鼠/兔二抗LifeTechnologies货号859643。在一个实施方案中，二抗是Abcam酶标二抗货号ab20043。在一个实施方案中，二抗是ThermoFisher酶标二抗货号A16110。在一个实施方案中，二抗是Sigma-Aldrich酶标二抗货号A0168。在一个实施方案中，一抗选自6E8、28-8、和22C3；二抗选自羊抗鼠/兔二抗MS-1215和羊抗鼠/兔二抗859643；显色剂是DAB；复染剂是苏木素。在应用本专利技术的试剂盒时，使用抗体和目标抗原位点(PD-L1)结合，再与标记过的二抗进行反应，最后通过显色反应呈现组织切片中的目标抗原位点，通过光学显微镜可确定目标抗原位点的分布和含量，其结果不仅能作为临床医生的诊断依据，而且可以为PD-L1抑制剂/抗体药物筛选临床适用人群并提供临床用药指导。实施例对比不同试剂厂家生产的二抗，优选最佳配对方案。免疫组化实验步骤：1)脱蜡：置于60℃烤箱预热30min，然后分别放入二甲苯I&II中各15分钟；2)水化：无水乙醇I&II中各5分钟，95％、85％、75％本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种免疫组化试剂盒包括：(1)抗人PD‑L1抗体，选自MS‑1028(6E8)、ab205921(28‑8)或22C3；(2)可以和所述抗人PD‑L1抗体结合的并带有可以被检测出的标记的二级抗体，选自羊抗鼠/兔二抗MS‑1215和羊抗鼠/兔二抗859643；以及(3)显色剂。

【技术特征摘要】
1.一种免疫组化试剂盒包括：
(1)抗人PD-L1抗体，选自MS-1028(6E8)、ab205921(28-8)或22C3；
(2)可以和所述抗人PD-L1抗体结合的并带有可以被检...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐军，李兴民，严旭霞，
申请(专利权)人：浙江数问生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33