一种人TGFBI基因突变检测试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术提供了一种人TGFBI基因突变检测试剂盒及其检测方法；本发明专利技术针对角膜异常症突变基因携带者，在早期进行有效地、针对性地防护，将可以延缓病程的发展甚至避免发病的技术问题，本发明专利技术提供了检测人TGFBI基因124位点和555位点突变引起角膜营养不良的引物、探针，该引物、探针能够检测TGFBI基因124位点和555位点突变，灵敏度高，特异性强；以及提供了一种角膜异常症突变基因检测试剂盒，该试剂盒能够快速、高效、准确检测人TGFBI基因124位点和555位点突变；本发明专利技术还提供了使用上述试剂盒检测人TGFBI基因124位点和555位点突变的检测方法，该方法检测方法操作简便，灵敏度高，特异性高，适用机型广，检测结果真实可靠且易于推广等优点。

A Kit for Detecting Human TGFBI Gene Mutation and Its Detection Method

The invention provides a human TGFBI gene mutation detection kit and a detection method thereof; the invention aims at the carriers of mutant gene of corneal abnormality, effectively and pertinently protects them in the early stage, which will delay the development of the disease course and even avoid the technical problems of the disease. The invention provides primers for detecting corneal malnutrition caused by mutations of 124 and 555 sites of human TGFBI gene. The probe, which can detect 124 and 555 mutations of TGFBI gene, has high sensitivity and specificity, and provides a kit for detecting mutation gene of corneal abnormality. The kit can detect 124 and 555 mutations of human TGFBI gene quickly, efficiently and accurately. The invention also provides a kit for detecting 124 and 555 mutations of human TGFBI gene using the above kit. Point mutation detection method, this method has the advantages of simple operation, high sensitivity, high specificity, wide applicability, reliable detection results and easy promotion.

【技术实现步骤摘要】
一种人TGFBI基因突变检测试剂盒及其检测方法
本专利技术属于基因检测领域，具体涉及到一种人TGFBI基因突变检测试剂盒及其检测方法。
技术介绍
角膜异常症(CornealDystrophies，CD)，也称作角膜营养不良，是对称性、非炎症性角膜疾病的总称。其发病率约为1/2000,男女发病之比为1.7:1.0。大多数患者为散发性，约占6％-10％患者有明确的阳性家族史，其遗传方式包括隐性和显性形式。其发病是由于正常角膜组织中的细胞在基因异常的作用下，使其结构或功能受到进行性损害，导致角膜组织中形成形态各异的沉淀物，因而逐渐降低视力，以及引发糜烂、畏光等并发症；晚期患者的角膜将布满沉积物，丧失视功能，不仅影响患者生活质量、美观，也给社会带来沉重负担。近年来，随着分子遗传学的进展，许多学者从分子水平上探索其发病机制并分析其遗传特点。目前报道与角膜营养不良相关的基因包括：TGFBI、GSN、K12、M1S1、CHST6、COL8A2、SLC4A11等，其中TGFBI基因使第一个发现也是目前报道最为常见的相关基因。TGFBI也被称为Keratoepithelin(角膜上皮蛋白，KE蛋白)，在最初的命名为BIGH3(Beta-inducedGene-h3)。TGFBI蛋白是细胞外基质的重要组成，在角膜、皮肤和其它结缔组织基质中均有表达。TGFBI蛋白分子量68KDa，由683个氨基酸组成。一些氨基酸的变异会导致蛋白三维结构和功能的改变，部分氨基酸的变异更会导致其不能被清理和降解。Korvatska等认为氨基酸变化导致TGFBI带电变化是影响其水解的主要原因，也因此导致了角膜中TGFBI的累积；Choi等发现突变的TGFBI会诱导成纤维细胞的凋亡进程，使其缺乏正常的清理功能，因而导致沉积物的不断累积。TGFBI是角膜上皮细胞分泌的重要因子之一，它参与细胞间的黏附和爬行，从而调控和维持角膜上皮细胞的正常增生和分化等形态学发生过程。突变会导致细胞黏附和爬行功能的异常，进而影响细胞的增生和分化，在变性产物的累积下，会导致反复地上皮糜烂。TGFBI在多种组织上均有表达，但研究中并未发现TGFBI在其它组织(如肝、肺、肾等)中的沉积。这可能是由于角膜组织的特殊性导致。角膜为无血管、组织结构排列规则有序的、具有透明性的屈光介质，具有良好的自我修复特性。而该组织的修复正是通过分泌TGFBI蛋白来实现细胞的黏附和爬行。因此，外伤、紫外线等损伤刺激会诱使组织分泌TGFBI蛋白。正常人群会在这种修复机制下迅速痊愈，而角膜异常症患者则反而会产生大量不可降解的蛋白从而诱发和加重角膜异常症的症状。TGFBI基因位于5号染色体(5q31)，主要的致病突变分别为4号外显子和12号外显子上编码第124号氨基酸与第555号氨基酸密码子突变。虽然该病在发病后无法根治，只能在晚期进行针对性手术以该善视力。但对于角膜异常症突变基因携带者，在早期进行有效地、针对性地防护，将可以延缓病程的发展甚至避免发病。
技术实现思路
为了解决对于角膜异常症突变基因携带者，在早期进行有效地、针对性地防护，将可以延缓病程的发展甚至避免发病的技术问题，本专利技术提供了检测人TGFBI基因124位点和555位点突变引起角膜营养不良的引物、探针。该引物、探针能够检测TGFBI基因124位点和555位点突变，灵敏度高，特异性强。本专利技术还提供了一种角膜异常症突变基因检测试剂盒，该试剂盒能够快速、高效、准确检测人TGFBI基因124位点和555位点突变。本专利技术还提供了使用上述试剂盒检测人TGFBI基因124位点和555位点突变的检测方法，该方法检测方法操作简便，灵敏度高，特异性高，适用机型广，检测结果真实可靠且易于推广等优点。本专利技术包括如下内容：一种人TGFBI基因突变检测试剂盒，所述的检测试剂盒包括引物组和探针；所述引物组为选自以下两组中的至少一组：针对TGFBI基因124位点的引物SEQIDNO.1和SEQIDNO.2；针对TGFBI基因555位点的引物SEQIDNO.5和SEQIDNO.6；所述探针为选自以下针对引物相应位点的突变型探针和野生型探针的至少一组：针对TGFBI基因124位点370C>T(R124C)检测的探针SEQIDNO.3和SEQIDNO.4；针对TGFBI基因124位点371G>T(R124L)检测的探针SEQIDNO.4和SEQIDNO.5；针对TGFBI基因124位点371G>A(R124H)检测的探针SEQIDNO.4和SEQIDNO.6；针对TGFBI基因555位点1663C>T(R555W)检测的探针SEQIDNO.9和SEQIDNO.10，针对TGFBI基因555位点1664G>A(R555Q)检测的探针SEQIDNO.10和SEQIDNO.11。优选地，所述的人TGFBI基因突变检测试剂盒的探针SEQIDNO.3、SEQIDNO.6、SEQIDNO.9的5’端标记有荧光基团FAM，3’端标记有淬灭基团BHQ1；所述的探针SEQIDNO.4、SEQIDNO.10的5’端标记有荧光基团HEX，3’端标记有淬灭基团BHQ1；所述的探针SEQIDNO.5、SEQIDNO.11的5’端标记有荧光基团TAMRA，3’端标记有淬灭基团BHQ1。优选地，所述的人TGFBI基因突变检测试剂盒还包括针对内参基因GUSB检测的引物SEQIDNO.12、SEQIDNO.13，以及针对内参基因GUSB检测的探针SEQIDNO.14。优选地，所述的人TGFBI基因突变检测试剂盒探针SEQIDNO.14的5’端标记有荧光基团CY5，3’端标记有淬灭基团BHQ1。优选地，所述的人TGFBI基因突变检测试剂盒包括引物组和探针；所述引物组为：针对TGFBI基因124位点的引物SEQIDNO.1和SEQIDNO.2；针对TGFBI基因555位点的引物SEQIDNO.5和SEQIDNO.6；所述探针为选自以下针对引物相应位点的突变型探针和野生型探针：针对TGFBI基因124位点370C>T(R124C)检测的探针SEQIDNO.3和SEQIDNO.4；针对TGFBI基因124位点371G>T(R124L)检测的探针SEQIDNO.4和SEQIDNO.5；针对TGFBI基因124位点371G>A(R124H)检测的探针SEQIDNO.4和SEQIDNO.6；针对TGFBI基因555位点1663C>T(R555W)检测的探针SEQIDNO.9和SEQIDNO.10，针对TGFBI基因555位点1664G>A(R555Q)检测的探针SEQIDNO.10和SEQIDNO.11。优选地，所述的人TGFBI基因突变检测试剂盒探针SEQIDNO.3、SEQIDNO.6、SEQIDNO.9的5’端标记有荧光基团FAM，3’端标记有淬灭基团BHQ1；所述的探针SEQIDNO.4、SEQIDNO.10的5’端标记有荧光基团HEX，3’端标记有淬灭基团BHQ1；所述的探针SEQIDNO.5、SEQIDNO.11的5’端标记有荧光基团TAMRA，3’端标记有淬灭基团本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人TGFBI基因突变检测试剂盒，其特征在于：所述的检测试剂盒包括引物组和探针；所述引物组为选自以下两组中的至少一组：针对TGFBI基因124位点的引物SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2；针对TGFBI基因555位点的引物SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6；所述探针为选自以下针对引物相应位点的突变型探针和野生型探针的至少一组：针对TGFBI基因124位点370C>T(R124C)检测的探针SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4；针对TGFBI基因124位点371G>T(R124L)检测的探针SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5；针对TGFBI基因124位点371G>A(R124H)检测的探针SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.6；针对TGFBI基因555位点1663C>T(R555W)检测的探针SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10，针对TGFBI基因555位点1664G>A(R555Q)检测的探针SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.11。

【技术特征摘要】
1.一种人TGFBI基因突变检测试剂盒，其特征在于：所述的检测试剂盒包括引物组和探针；所述引物组为选自以下两组中的至少一组：针对TGFBI基因124位点的引物SEQIDNO.1和SEQIDNO.2；针对TGFBI基因555位点的引物SEQIDNO.5和SEQIDNO.6；所述探针为选自以下针对引物相应位点的突变型探针和野生型探针的至少一组：针对TGFBI基因124位点370C>T(R124C)检测的探针SEQIDNO.3和SEQIDNO.4；针对TGFBI基因124位点371G>T(R124L)检测的探针SEQIDNO.4和SEQIDNO.5；针对TGFBI基因124位点371G>A(R124H)检测的探针SEQIDNO.4和SEQIDNO.6；针对TGFBI基因555位点1663C>T(R555W)检测的探针SEQIDNO.9和SEQIDNO.10，针对TGFBI基因555位点1664G>A(R555Q)检测的探针SEQIDNO.10和SEQIDNO.11。2.根据权利要求1所述的人TGFBI基因突变检测试剂盒，其特征在于：所述的探针SEQIDNO.3、SEQIDNO.6、SEQIDNO.9的5’端标记有荧光基团FAM，3’端标记有淬灭基团BHQ1；所述的探针SEQIDNO.4、SEQIDNO.10的5’端标记有荧光基团HEX，3’端标记有淬灭基团BHQ1；所述的探针SEQIDNO.5、SEQIDNO.11的5’端标记有荧光基团TAMRA，3’端标记有淬灭基团BHQ1。3.根据权利要求1所述的人TGFBI基因突变检测试剂盒，其特征在于：所述的检测试剂盒还包括针对内参基因GUSB检测的引物SEQIDNO.12、SEQIDNO.13，以及针对内参基因GUSB检测的探针SEQIDNO.14。4.根据权利要求3所述的人TGFBI基因突变检测试剂盒，其特征在于：所述的探针SEQIDNO.14的5’端标记有荧光基团CY5，3’端标记有淬灭基团BHQ1。5.根据权利要求1所述的人TGFBI基因突变检测试剂盒，其特征在于：所述的检测试剂盒包括引物组和探针；所述引物组为：针对TGFBI基因124位点的引物SEQIDNO.1和SEQIDNO.2；针对TGFBI基因555位点的引物SEQIDNO.5和SEQIDNO.6；所述探针为选自以下针对引物相应位点的突变型探针和野生型探针：针对TGFBI基因124位点370C>T(R124C)检测的探针SEQIDNO.3和SEQIDNO.4；针对TGFBI基因124位点371G>T(R124L)检测的探针SEQIDNO.4和SEQIDNO.5；针对TGFBI基因124位点371G>A(R124H)检测的探针SEQIDNO.4和SEQIDNO.6；针对TGFBI基因555位点1663C>T(R555W)检测的探针SEQIDNO.9和SEQIDNO.10，针对TGFBI基因555位点1664G&...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨欢欢，李兴民，
申请(专利权)人：浙江数问生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33