甲型肝炎病毒抗体IgM检测试剂盒及其制备方法技术

甲型肝炎病毒抗体IgM检测试剂盒及其制备方法，属于化学发光体外诊断领域，用于体外检测人血清、血浆中甲型肝炎病毒抗体IgM的含量。该试剂盒包括校准品；质控品；抗人IgM单克隆抗体包被的磁微粒混悬液；化学发光标记物标记的HAV抗体；游离HAV抗原。使用抗人IgM单克隆抗体包被的磁微粒混悬液‑样本中HAV IgM抗体‑游离HAV抗原‑化学发光标记物标记的HAV抗体体系，能特异性识别样本中的HAV IgM抗体，避免非特异性结合造成假阳性结果，操作简单、定量检测准确快速。采用吖啶酯直接发光，降低了本底空白，灵敏度高。以顺磁性微粒为固相载体，比表面积大，灵敏度高。以全自动免疫分析仪为检测工具，成本低。

A kit for IgM detection of hepatitis A virus antibody and its preparation

【技术实现步骤摘要】
甲型肝炎病毒抗体IgM检测试剂盒及其制备方法
本专利技术属于化学发光体外诊断
，具体涉及一种甲型肝炎病毒抗体IgM检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
甲型肝炎是由甲型肝炎病毒(HAV)感染所引起的，通过粪-口途径进行传播，传染的发生主要是由于食用了被污染的食物或居住的卫生条件差。HAV是直径为27nm、单股正链RNA病毒，被归类为小核糖核酸病毒，具有传染性。HAV经由口侵入体内后先在口咽部或唾液腺中增殖，然后在小肠淋巴结内增殖，继而进入血液中，形成病毒血症，再侵犯肝脏，在肝脏内进行增殖，再经由胆汁分泌，最后由粪便排出体外。世界各地分离的HAV毒株均属于同一血清型，与其他肝炎病毒无交叉反应。HAV的潜伏期通常为30天(15～40d)，发病急，可造成暴发或散发流行，一般不转为慢性，无慢性携带者，预后良好。在发病后的2周可出现肝肿大、黄疸、深色尿、易疲劳、肠胃不适等症状。在症状出现的前期，HAV抗体就能够被检测出来。抗-HAVIgM在发病初期的3-6个月能够被检测出来，然而恢复期出现抗HAVIgG可持续多年。由于抗-HAVIgM在血清中短时存在，可以表明是长期还是近期感染，其是诊断急性HAV感染极有价值的血清标记物。由于甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒或丙型肝炎病毒感染所引起的症状并不能用于临床鉴别，所以血清学检测是重要的诊断手段。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种甲型肝炎病毒抗体IgM检测试剂盒及其制备方法，主要用于体外检测人血清、血浆中甲型肝炎病毒抗体IgM的含量。本专利技术为解决技术问题所采用的技术方案如下：本专利技术的甲型肝炎病毒抗体IgM检测试剂盒，主要包括：校准品；质控品；抗人IgM单克隆抗体包被的磁微粒混悬液；化学发光标记物标记的HAV抗体；游离HAV抗原。作为优选的实施方式，所述抗人IgM单克隆抗体包被的磁微粒混悬液中，磁微粒浓度为0.05～0.2％，磁微粒粒径为1～3μm。作为优选的实施方式，所述抗人IgM单克隆抗体包被的磁微粒混悬液中，抗人IgM单克隆抗体与磁微粒包被质量比例为1:500～1:50。作为优选的实施方式，所述化学发光标记物标记的HAV抗体浓度为0.1～2μg/mL。作为优选的实施方式，所述化学发光标记物标记的HAV抗体中，化学发光标记物与HAV抗体的摩尔比为1:1～10:1。作为优选的实施方式，所述化学发光标记物为吖啶酯或吖啶酯衍生物。作为优选的实施方式，所述游离HAV抗原浓度为0.01～0.5μg/mL。本专利技术的甲型肝炎病毒抗体IgM检测试剂盒的制备方法，主要包括以下步骤：步骤一、制备抗人IgM单克隆抗体包被的磁微粒混悬液；步骤二、制备化学发光标记物标记的HAV抗体(R2试剂)；步骤三、制备游离HAV抗原(R3试剂)；步骤四、制备校准品、质控品。作为优选的实施方式，步骤一的具体过程如下：(1)洗涤取浓度为5％的磁颗粒溶液0.3mL，加入0.9mL包被缓冲液稀释磁颗粒浓度至0.5％，混匀后，放置于磁分离器上，直至上清无浑浊，弃上清，留取磁颗粒，在磁颗粒中加入1mL包被缓冲液将磁珠悬起，按上述方法再进行分离并重悬；(2)活化采用20mM、pH6.5的磷酸缓冲液为活化缓冲液，10mg/mLEDC为活化剂，活化温度为25℃，活化时间为60min；(3)包被采用pH7.0的磷酸缓冲液为包被缓冲液，包被温度为25℃，包被时间为12h；(4)封闭采用pH8.0、10％BSA缓冲液为封闭缓冲液，封闭温度为25℃，封闭时间为2h，得到R1试剂。作为优选的实施方式，步骤二的具体过程如下：(1)取0.5mgHAV抗体，用30KDa孔径超滤离心管进行超滤离心，将原材料缓冲液置换为标记缓冲液，9000rpm离心30min；所述原材料缓冲液为20mM、pH7.4的PB和0.01％SDS；所述标记缓冲液为100mmol/LPB和150mmol/LNaCl，pH6.0；(2)按照化学发光标记物与HAV抗体的摩尔比为1:1～10:1的比例加入化学发光标记物原液，混匀，37℃，标记4h；(3)标记反应结束后，加入封闭缓冲液，封闭时间为1h；所述封闭缓冲液为100mmol/LPB、150mmol/LNaCl和10％赖氨酸，pH6.0；(4)封闭后用30KDa孔径超滤离心管进行超滤离心，除去未偶联的分子。超滤结束后，测定蛋白浓度，作为中间品保存，用于试剂配制；(5)取中间品和试剂缓冲液，配制成抗体浓度为0.5μg/mL的R2试剂，所述试剂缓冲液为100mmol/LPB和150mmol/LNaCl，pH6.0。作为优选的实施方式，步骤三的具体过程如下：取0.5mgHAV抗原，用试剂缓冲液稀释成母液，所述试剂缓冲液为100mmol/LPB和150mmol/LNaCl，pH6.0，得到R3试剂。取赋值结果为10.0S/CO的甲型肝炎病毒抗体IgM阳性血清，用校准品基质稀释成2.0S/CO，作为高浓度校准品；取校准品基质赋值结果为0.0S/CO，作为低浓度校准品；取赋值结果为10.0S/CO的甲型肝炎病毒抗体IgM阳性血清，用质控品基质稀释成2.0S/CO，作为高浓度质控品；取质控品基质赋值结果为0.0S/CO，作为低浓度质控品。本专利技术的有益效果是：1、本专利技术使用抗原直接包被磁珠的间接法解决了非特异性抗体吸附的问题，具体使用抗人IgM单克隆抗体包被的磁微粒混悬液-样本中HAVIgM抗体-游离HAV抗原-化学发光标记物标记的HAV抗体体系，可以特异性识别样本中的HAVIgM抗体，避免非特异性结合，造成假阳性结果，操作简单、定量检测准确、快速。2、本专利技术采用吖啶酯直接发光，降低了本底空白，提高了灵敏度。3、本专利技术采用顺磁性的微粒作为固相载体，其比表面积大，提高了检测的灵敏度。4、本专利技术能够以全自动化学发光免疫分析仪为检测工具，完成HAVIgM抗体的检测，无需大型仪器设备配合，检测成本较低，且无放射性污染，可大规模的开展和推广。具体实施方式本专利技术的甲型肝炎病毒抗体IgM检测试剂盒，主要包括：(1)校准品；(2)质控品；(3)抗人IgM单克隆抗体包被的磁微粒混悬液；(4)化学发光标记物标记的HAV抗体；(5)游离HAV抗原。抗人IgM单克隆抗体包被的磁微粒混悬液中，磁微粒浓度优选为0.05～0.2％，磁微粒粒径优选为1～3μm。抗人IgM单克隆抗体包被的磁微粒混悬液中，抗人IgM单克隆抗体与磁微粒包被质量比例优选为1:500～1:50。化学发光标记物标记的HAV抗体浓度优选为0.1～2μg/mL。化学发光标记物标记的HAV抗体中，化学发光标记物与HAV抗体的摩尔比优选为1:1～10:1。化学发光标记物优选为吖啶酯或吖啶酯衍生物，更优选为吖啶酯。游本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.甲型肝炎病毒抗体IgM检测试剂盒，其特征在于，包括：/n校准品；/n质控品；/n抗人IgM单克隆抗体包被的磁微粒混悬液；/n化学发光标记物标记的HAV抗体；/n游离HAV抗原。/n

【技术特征摘要】
1.甲型肝炎病毒抗体IgM检测试剂盒，其特征在于，包括：
校准品；
质控品；
抗人IgM单克隆抗体包被的磁微粒混悬液；
化学发光标记物标记的HAV抗体；
游离HAV抗原。


2.根据权利要求1所述的甲型肝炎病毒抗体IgM检测试剂盒，其特征在于，所述抗人IgM单克隆抗体包被的磁微粒混悬液中，磁微粒浓度为0.05～0.2％，磁微粒粒径为1～3μm。


3.根据权利要求1所述的甲型肝炎病毒抗体IgM检测试剂盒，其特征在于，所述抗人IgM单克隆抗体包被的磁微粒混悬液中，抗人IgM单克隆抗体与磁微粒包被质量比例为1:500～1:50。


4.根据权利要求1所述的甲型肝炎病毒抗体IgM检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物标记的HAV抗体浓度为0.1～2μg/mL。


5.根据权利要求1所述的甲型肝炎病毒抗体IgM检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物标记的HAV抗体中，化学发光标记物与HAV抗体的摩尔比为1:1～10:1。


6.根据权利要求1所述的甲型肝炎病毒抗体IgM检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物为吖啶酯或吖啶酯衍生物。


7.根据权利要求1所述的甲型肝炎病毒抗体IgM检测试剂盒，其特征在于，所述游离HAV抗原浓度为0.01～0.5μg/mL。


8.制备权利要求1至7中任意一项所述的甲型肝炎病毒抗体IgM检测试剂盒的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、制备抗人IgM单克隆抗体包被的磁微粒混悬液；
步骤二、制备化学发光标记物标记的HAV抗体；
步骤三、制备游离HAV抗原；
步骤四、制备校准品、质控品。


9.根据权利要求8所述的制备方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡雪凇，
申请(专利权)人：迪瑞医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林;22