卡那霉素的识别/传感一体化探针及制备方法与检测方法技术

本发明专利技术涉及卡那霉素的识别/传感一体化探针及制备方法与检测方法，属于生物传感技术领域。卡那霉素的识别/传感一体化探针包括金纳米颗粒、适配体链、荧光标记底物链、信号放大反应Trigger链；当待测样品中存在卡那霉素时，适配体链与卡那霉素特异性结合，“激活”被封闭的Trigger链，Trigger链与修饰在纳米金上的底物链杂交，暴露酶切位点；在切刻内切酶的作用下，底物链被切割，标记荧光基团的核酸片段远离纳米金表面，被猝灭的荧光恢复；同时，游离的Trigger链在纳米金表面与其他底物链进行往复的“杂交‑切割”，实现信号放大。最后，通过检测溶液的荧光强度对卡那霉素进行定量。与现有技术相比，本发明专利技术增加了信号放大过程中局部底物浓度，缩短了检测时间。

Identification / sensing integrated probe of kanamycin and its preparation method and detection method

【技术实现步骤摘要】
卡那霉素的识别/传感一体化探针及制备方法与检测方法
本专利技术属于生物传感
，尤其是涉及一种卡那霉素的识别/传感一体化探针及制备方法与检测方法。
技术介绍
卡那霉素作为一种重要的氨基糖苷类抗生素，被广泛用于革兰氏阳性和阴性细菌感染的治疗。但是抗生素的滥用会导致动物源性食品中卡那霉素的残留，通过食品摄入并在体内聚积，引起人体不同程度的损害。因此，实现卡那霉素的快速、灵敏检测尤为重要。目前，基于核酸适配体的抗生素快速检测方法受到广泛关注，这些方法中目标与探针1:1结合比例的局限，使得检测灵敏度受限于适配体和抗生素之间的结合能力，无法满足食品中痕量抗生素残留的检测需求。将核酸适配体识别与核酸恒温扩增技术耦合，通过将抗生素浓度定量地转变为特异性的核酸进行信号放大，能够显著提高抗生素检测灵敏度。但是，在均相核酸恒温扩增反应中，信号的放大过程依赖于底物链浓度，随着反应的进行，底物链浓度逐渐降低，完成信号放大过程往往需要2h或者更长时间，从而导致整个检测过程极为耗时。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种卡那霉素的识别/传感一体化探针，其特征在于，所述卡那霉素的识别/传感一体化探针包括金纳米颗粒、适配体链、荧光标记底物链、信号放大反应Trigger链；/n所述适配体链、荧光标记底物链和信号放大反应Trigger链修饰在金纳米颗粒表面，得到卡那霉素的识别/传感一体化探针，所述卡那霉素的识别/传感一体化探针保存在保存溶液中。/n

【技术特征摘要】
1.一种卡那霉素的识别/传感一体化探针，其特征在于，所述卡那霉素的识别/传感一体化探针包括金纳米颗粒、适配体链、荧光标记底物链、信号放大反应Trigger链；
所述适配体链、荧光标记底物链和信号放大反应Trigger链修饰在金纳米颗粒表面，得到卡那霉素的识别/传感一体化探针，所述卡那霉素的识别/传感一体化探针保存在保存溶液中。


2.根据权利要求1所述卡那霉素的识别/传感一体化探针，其特征在于，所述适配体链、荧光标记底物链和信号放大反应Trigger链序列分别为：
适配体链：5’-TGGGGGTTGAGGCTAAGCCGA-3’；
荧光标记底物链：5’-TTTTTTTTTTGGATCATATAGTAGT-3’；
信号放大反应Trigger链：
5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCGGCTTAGCTACTATATGATCCGAACCCCCA-3’；
所述荧光标记底物链的5’端修饰-SH，所述荧光标记底物链的3’端修饰荧光基团；
所述信号放大反应Trigger链的5’端修饰-SH。


3.根据权利要求2所述卡那霉素的识别/传感一体化探针，其特征在于，所述荧光基团选自以下物质中的一种或几种：Cy系列荧光染料、FAM荧光染料、Rox荧光染料、Alexa系列染料、d6过渡金属配合物或荧光纳米粒子。


4.根据权利要求1所述卡那霉素的识别/传感一体化探针，其特征在于，所述金纳米颗粒、适配体链、信号放大反应Trigger链、荧光标记底物链之间加入的比例关系为：
适配体链与信号放大反应Trigger链的摩尔比为1～4：1，
荧光标记底物链和信号放大反应Trigger链的摩尔比为5～40：1，
核酸链与金纳米颗粒的摩尔比300～1000：1，所述核酸链指适配体链、信号放大反应Trigger链及荧光标记底物链。


5.根据权利要求1所述卡那霉素的识别/传感一体化探针，其特征在于，所述保存溶液中，金纳米颗粒的浓度为0.1-5nM，优选为1nM。


6.权利要求1-5中任一项所述卡那霉素的...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶泰，徐斐，张志伟，袁敏，曹慧，于劲松，
申请(专利权)人：上海理工大学，
类型：发明
国别省市：上海;31