一种高产白原胶的工程菌株及其构建与应用制造技术

本发明专利技术提供了一种高产白原胶的工程菌株及其构建与应用，所述菌株为野油菜黄单胞菌菌株经基因工程方法敲除群体感应退出关键基因rpfB和菌黄素关键合成基因xanK构建得到；所述野油菜黄单胞菌菌株为黄原胶工业生产菌，保藏编号为CGMCC1.1781。本发明专利技术通过敲除其菌群体感应退出系统和菌黄素生物合成合成途径,构建了高产白原胶(没有菌黄素污染的黄原胶)的工程菌株，产品品质大大提高；白原胶中没有菌黄素污染，生产上也无需进一步进行“脱黄”的工序，从而降低了生产成本，具有非常好的应用前景。

Construction and application of an engineering strain with high yield of xanthan gum

【技术实现步骤摘要】
一种高产白原胶的工程菌株及其构建与应用
本专利技术涉及一种高产白原胶的工程菌株及其构建与应用。
技术介绍
黄原胶是由植物病原菌野油菜黄单胞菌产生的一种天然胞外多糖，结构为由重复的碳水化合物单元聚合而成。黄原胶属于水溶性胶体，为非牛顿型流体，具有优良的流变学特性，作为稳定剂和增稠剂等被广泛应用于包括食品、药品、化妆品和石油开采等多个行业。中国为工业发酵生产黄原胶第一大国，年产量约占全球产量的70％，而人民对黄原胶的需求随着经济发展快速提高，因此提高工业发酵生产黄原胶的能力势在必行。目前的专利技术主要通过优化发酵条件来提高发酵生产黄原胶能力，降低发酵成本，对提高黄原胶产量帮助不大。而且由于黄单胞菌还产生黄色菌黄素，是黄原胶生产过程的杂质。生产上为了除去这些菌黄素，专门有一道工序是“脱黄”。现有技术中，专利CN109385391A中公开了一种用于发酵生产耐高温黄原胶的工程菌株，其通过敲除野油菜黄单胞菌中的丙酮酰基转移酶基因gumL，构建的工程菌株在合成的黄原胶时不需要任何发酵后处理就可以耐高温。但该工程菌株黄原胶产量不高，含有本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高产白原胶的工程菌株，其特征在于，所述菌株为野油菜黄单胞菌菌株经基因工程方法敲除rpfB基因和xanK基因构建得到。/n

【技术特征摘要】
1.一种高产白原胶的工程菌株，其特征在于，所述菌株为野油菜黄单胞菌菌株经基因工程方法敲除rpfB基因和xanK基因构建得到。


2.根据权利要求1所述的高产白原胶的工程菌株，其特征在于，所述野油菜黄单胞菌菌株的保藏编号为CGMCC1.1781。


3.一种根据权利要求1所述的高产白原胶的工程菌株的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
A、构建敲除rpfB基因的重组质粒和敲除xanK基因的重组质粒；
B、将步骤A构建的重组质粒转入野油菜黄单胞菌菌株中，培养后筛选得到敲除rpfB基因的突变株ΔrpfB菌株或敲除xanK基因的突变株ΔxanK菌株；
C、将步骤A构建的敲除xanK基因的重组质粒转入突变株ΔrpfB菌株中，或将敲除rpfB基因的重组质粒转入突变株ΔxanK菌株中，筛选得到敲除rpfB和xanK基因的双突变株ΔrpfBΔxanK菌株，即所述的高产白原胶的工程菌株。


4.根据权利要求3所述的高产白原胶的工程菌株的构建方法，其特征在于，所述步骤A中构建敲除rpfB基因的重组质粒的具体方法如下：
A1、以野油菜黄单胞菌菌株基因组DNA为模板，通过PCR获得rpfB基因的上下游DNA片段；
A2、以rpfB基因的上下游DNA片段为模板，通过FUSIONPCR获得融合产物；
A3、将融合产物与载体酶连后转入感受态细胞，即得所述重组质粒。


5.根据权利要求4所述的高产白原胶的工程菌株的构建方法，其特征在于，所述步骤A1中，采用的PCR引物序列如SEQIDNO:1～SEQIDNO:4所示；
步骤A2中，采用的PCR引物序列如SEQIDNO:1和SEQIDNO:...

【专利技术属性】
技术研发人员：何亚文，邱嘉辉，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：上海;31