【技术实现步骤摘要】
一种电感受态细胞的制备方法
本专利技术属于细菌分子遗传学
，尤其涉及一种电感受态细胞的制备方法。
技术介绍
使带有遗传信息的DNA分子进入宿主细胞的过程即所谓的“转化”。而用理化方法诱导细胞，使其处于最适摄取和容纳外来DNA的生理状态，即称为“感受态细胞”。在分子生物学领域、遗产工程、基因工程的基本实验中，为了使宿主细胞进行特定的DNA或蛋白质的复制或表达，获得易于转化且高转化效率的感受态细胞成了不可或缺的步骤。非感受态细胞可以通过化学方法或者电穿孔而成为感受态以获取外源基因。例如，大肠杆菌可以在冰浴下通过二价阳离子Ca清洗而成为感受态的。相比之下，电穿孔是向细胞施加电场脉冲以引起细胞膜的结构重组，高电压引起细胞膜瞬时通透，从而允许外源基因进入细胞，转化率最高能达到109-1010转化子/ug闭环DNA。在传统的制备方法中，一般以摇瓶的方法制备感受态细胞，且在OD600较低(0.4左右)的时候收集，通常在一个装液量为200mL的摇瓶，最后仅可以制备成最多1mL的电感受态细胞，制备效率较低；比如传统的大肠杆菌感受...
【技术保护点】
1.一种电感受态细胞的制备方法，其特征在于，包括：/n将菌种活化后，在培养基中进行8~24h培养；/n将所述菌种转接到预备含有所述培养基的发酵罐中，培养至OD值不低于2；/n将所述发酵罐中的菌液进行10~60min低温处理；/n将所述菌液转移到离心杯中，于温度为3~5℃、3000~8000rpm转速下离心，并倾去上清液；/n将沉淀重悬于预冷的溶液中，于温度为3~5℃、3000~8000rpm转速下离心，并倾去上清液，重复3~8次后，即得。/n
【技术特征摘要】
1.一种电感受态细胞的制备方法，其特征在于，包括：
将菌种活化后，在培养基中进行8~24h培养；
将所述菌种转接到预备含有所述培养基的发酵罐中，培养至OD值不低于2；
将所述发酵罐中的菌液进行10~60min低温处理；
将所述菌液转移到离心杯中，于温度为3~5℃、3000~8000rpm转速下离心，并倾去上清液；
将沉淀重悬于预冷的溶液中，于温度为3~5℃、3000~8000rpm转速下离心，并倾去上清液，重复3~8次后，即得。
2.根据权利要求1所述的电感受态细胞的制备方法，其特征在于，所述将菌种活化后，在培养基中进行8~24h培养的步骤，具体包括：
在紫外灭菌20~40min后的超净台内，取出-80℃保存的菌种，并解冻；
用接种环挑取单克隆的菌种到培养基中，于温度为35~39℃下，200~300rpm摇床中培养过夜，培养时间为16~18h。
3.根据权利要求1所述的电感受态细胞的制备方法，其特征在于，所述培养基为LB培养基、TB培养基、2×YT培养基中的一种。
4.根据权利要求3所述的电感受态细胞的制备方法，其特征在于，所述LB培养基的制备方法包括：
将0.08~0.12g胰蛋白胨、0.05~0.07g酵母粉、0.08~0.12g氯化钠溶于8~12mL去离子水中，并装于离心管内，进行117~125℃灭菌15~25min，即得。
5.根据权利要求1所述的电感受态细胞的制备方法，其特征在于，所述预备含有所述培养基的发酵罐，具体为：
将4~6g胰蛋...
【专利技术属性】
技术研发人员：周丽，何晨丹，孙磊，曹雪晨，
申请(专利权)人：宁波酶赛生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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