一种黄原胶高产菌的构建方法技术

本发明专利技术公开了一种黄原胶高产菌的构建方法，在Xoc GX01中将正向调控黄原胶生物合成的关键基因udgH基因连接在高表达载体pLAFRJ上，并三亲导入到rpoN2基因失活的突变体中，获得高产黄原胶菌株Xoc GM0826。在NB培养基(多聚蛋白胨5.0g，酵母提取粉1.0g，牛肉浸膏3.0g，蔗糖10.0g，pH 7.0)中，野生型菌株Xoc GX01产胶量为6.56±0.27g/L，高产黄原胶菌株Xoc GM0826的产胶为10.43±0.26g/L，是野生型Xoc GX01产胶的1.58倍。为高产黄原胶菌株的构建提供了一种新的思路和方法。

Construction of a xanthan gum producing strain

【技术实现步骤摘要】
一种黄原胶高产菌的构建方法
本专利技术属于生物工程
，涉及一种黄原胶高产菌的构建方法，具体为在ropN2突变的情况下，导入pLAFRJ-udgH，获得高产黄原胶的工程菌。
技术介绍
黄原胶(Xanthangum)是一种非常重要的生物技术产品。目前，国际上生产规模最大、研究最透彻、用途最为广泛的细菌胞外多糖之一，它是由野油菜单胞菌(亦名甘蓝黑腐黄单胞菌)、菜豆黄单胞菌、锦葵黄单胞菌和胡萝卜黄单胞菌、水稻黄单胞菌等黄单胞菌属分泌的一种大分子生物多糖。溶于冷水和热水中后具有高粘度、剪切稀释恢复能力、乳化稳定性能和悬浊液稳定性能等，因此在化工、食品、环保、医药、纺织、采油、印染、农药和化妆品等多个领域中有广泛应用。黄原胶分子是一种重复戊糖单元构成的酸性杂多糖，戊糖单元由两分子D-葡萄糖(Glc)、两分子D-甘露糖(Man)和一分子葡萄糖醛酸(GlcA)构成，分子量在2×106～2×107之间。受菌株和发酵条件的影响，每个戊糖重复单元中连接支链上的甘露糖有可能连接有乙酰基团，在戊糖单体的还原性末端的甘露糖残基可能被丙酮酸化。在侧链和主链之间氢键的作本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种黄原胶高产菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)以Xoc GX01野生型菌株为出发菌株，制备Xoc GX01感受态细胞，通过电转化的方法将EZ::TN<R6Kγori/KAN-2>Tnp转座子导入感受态细胞，稀释涂板获取诱变的水稻细菌性条斑病菌株，平板筛选黄原胶产量提高的的突变菌，并通过质粒拯救确定高产黄原胶突变株的突变位点；/n2)以Xoc GX01的udgH基因为模板，进行PCR扩增，产物以Xba I和Hin dIII双酶切后，酶切产物连接到pLAFRJ的多克隆位点得到重组质粒pLAFRJ-udgH；/n3)将重组质粒pLAFRJ-udgH三亲接合到步骤(1)...

【技术特征摘要】
1.一种黄原胶高产菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)以XocGX01野生型菌株为出发菌株，制备XocGX01感受态细胞，通过电转化的方法将EZ::TN<R6Kγori/KAN-2>Tnp转座子导入感受态细胞，稀释涂板获取诱变的水稻细菌性条斑病菌株，平板筛选黄原胶产量提高的的突变菌，并通过质粒拯救确定高产黄原胶突变株的突变位点；
2)以XocGX01的udgH基因为模板，进行PCR扩增，产物以XbaI和HindIII双酶切后，酶切产物连接到pLAFRJ的多克隆位点得到重组质粒pLAFRJ-udgH；
3)将重组质粒pLAFRJ-udgH三亲接合到步骤(1)得到的高产黄原胶突变株中，经庆大霉素筛选和酶切验证后获得高产黄原胶的工程菌株。


2.根据权利要求1所述的一种黄原胶高产菌的构建方法，其特征在于，所述的XocGX01野生型菌株保藏编号为CCTC...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜伟，唐纪良，蔡文侠，何勇强，姜伯乐，
申请(专利权)人：广西大学，
类型：发明
国别省市：广西;45