一种囊胚培养液及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种囊胚培养液及其制备方法。包括水、无机盐、能量物质、氨基酸，维生素、抗氧化剂、抗菌剂、大分子物质、指示剂，缓冲系统，其特征在于，所述的能量物质包括葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠，其中葡萄糖4.1~6.0mmol/L，乳酸钠2.5~4.5mmol/L，丙酮酸0.65~0.95mmol/L。本发明专利技术所述的囊胚培养液具有高葡萄糖，低丙酮酸钠及乳酸钠的特点，匹配卵裂胚至囊胚期间胚胎对能力物质利用特点的，有效促进胚胎的发育。此外，针对性地必需氨基酸的比例，降低非必需氨基酸的比例，为该时期胚胎发育所需的特殊营养物质，满足该时期对营养物质的需求，同时避免加入过多非必需氨基酸造成降解成分对胚胎产生毒性作用。

A kind of blastocyst culture medium and its preparation method

【技术实现步骤摘要】
一种囊胚培养液及其制备方法
本专利技术属于人类辅助生殖领域，具体涉及一种囊胚培养液及其制备方法，其是主要用于卵裂胚至卵囊胚期间胚胎培养，为胚胎体外培养提供发育环境及所需的营养物质。
技术介绍
囊胚培养液是辅助生殖技术中必不可少的试剂产品，应用于卵裂胚至卵囊胚期间胚胎培养，在辅助生殖医学技术中应用为该时期培养体外培养提供必需的环境和营养。囊胚培养液的用途：在辅助生殖中心胚胎实验室的二氧化碳培养箱环境下对人的卵裂胚至卵囊胚期间胚胎培养。目前，国内辅助生殖用液依赖进口，而国内暂无对这类产品进行自主生产，缺乏议价空间，价格高昂从而患者的医疗成本较高，增加了经济负担。进口产品往往需要通过长途运输，长途运输过程中因存储条件无法得到保证，运输时间较长，使得培养液使用效果下降，无法对临床的胚胎培养提高最佳效果，直接影响胚胎的发育，造成不良后果。在国内生产人类辅助生殖医学技术培养液，避免了国外进口产品因长途运输带来的不明因素，减轻患者的经济负担。目前，临床使用的常规囊胚培养液的所提供的能量物质并不能很好地贴合该时期胚胎对物质能量的需求，不能为该时期胚胎的培养提供最佳的能量需求，有效促进胚胎体外生长发育。本专利技术在对该时期物质需求研究基础上，在培养液中提供高浓度的葡萄糖，低浓度的丙酮酸钠及乳酸钠，以便更好地贴合该时期胚胎能量物质的需求，促进该时期胚胎细胞生长发育。此外，常规囊胚培养液通常添加无明显浓度差异水平的非必需氨基酸及必需氨基酸，并没有充分考虑卵裂胚至囊胚期间胚胎对两类氨基酸的需求的差异，会导致培养后期营养物质供给失衡及氨基酸降解的氨对胚胎产生毒性作用，胚胎发育受到抑制。常规囊胚培养液往往存在抗氧化能力不足的现象，抗氧化性低会导致氧化物对胚胎产生毒害作用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种能量物质配比适宜、满足胚胎发育特殊营养需求及抗氧化性强的囊胚培养液，不仅能为卵裂胚至囊胚期间胚胎体外培养提供充足的物质营养需求，提高囊胚率，也为胚胎体外培育提供良好的发育环境，降低培养过程中环境中过自身产生的氧化物对胚胎的毒害作用，为胚胎体外培养提供理想的环境。为实现上述目标，本专利技术所提供的技术方案是：一种囊胚培养液，包括水、无机盐、能量物质、氨基酸，维生素、抗氧化剂、抗菌剂、大分子物质、指示剂，缓冲系统，其特征在于，所述的能量物质包括葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠，其中葡萄糖4.1~6.0mmol/L，乳酸钠2.5~4.5mmol/L，丙酮酸0.65~0.95mmol/L。所述的氨基酸包括丙氨酰谷氨酰胺、非必需氨基酸和必需氨基酸，其中丙氨酰谷氨酰胺1.52~2.14mmol/L，非必需氨基酸0.002~0.011g/L，必需氨基酸0.008~0.165g/L。优选，柠檬酸钠的浓度为1.05~3.40mmol/L、谷胱甘肽的浓度范围为1.05~3.40mmol/L。优选，所述无机盐包括氯化钠85.0~110.0mmol/L、硫酸镁0.10~0.90mmol/L、磷酸二氢钾0.42~0.78mmol/L、氯化钾4.3~8.1mmol/L和氯化钙1.6~4.2mmol/L。优选，所述维生素浓度为0.001~0.003g/L。优选，所述抗菌剂为庆大霉素，浓度为9.5~12.0mg/L；所述大分子物质为人血清白蛋白按9.5~11.0mg/mL的浓度添加至溶液中，或不添加人血清白蛋白，但在临床使用时按9.5~11.0mg/mL的浓度添加人血清白蛋白；还有缓冲物质碳酸氢钠，浓度24.5~28.6mmol/L；所述指示剂为酚红，最佳浓度为0.009mmol/L。优选，所述的囊胚培养液包括碳酸氢钠27.3mmol/L、氯化钙2.3mmol/L、氯化钾6.1mmol/L、氯化钠98.5mmol/L、硫酸镁0.38mmol/L、磷酸二氢钾0.61mmol/L、酚红0.009mmol/L、丙氨酰谷氨酰胺1.82mmol/L、葡萄糖5.4mmol/L、丙酮酸钠为0.72mmol/L、乳酸钠为3.13mmol/L、庆大霉素10mg/L、非必需氨基酸0.0051g/L、必需氨基酸0.1118g/L、维生素0.0026g/L（MEM维生素溶液·(100×)SIGMA:M6895，实施例也是用这个维生素溶液）、柠檬酸钠1.87mmol/L、谷胱甘肽2.31mmol/L和人血清白蛋白10.8mg/mL，溶剂为水。本专利技术的第二个目的是提供一种囊胚培养液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将各成分混合均匀形成囊胚培养液，所述的能量物质包括葡萄糖、乳酸钠、丙酮酸钠，其中葡萄糖4.1~6.0mmol/L，乳酸钠2.5~4.5mmol/L，丙酮酸0.65~0.95mmol/L。优选，配方：所述的囊胚培养液包括碳酸氢钠27.3mmol/L、氯化钙2.3mmol/L、氯化钾6.1mmol/L、氯化钠98.5mmol/L、硫酸镁0.38mmol/L、磷酸二氢钾0.61mmol/L、酚红0.009mmol/L、丙氨酰谷氨酰胺1.82mmol/L、葡萄糖5.4mmol/L、丙酮酸钠为0.72mmol/L、乳酸钠为3.13mmol/L、庆大霉素10mg/L、非必需氨基酸0.0051g/L、必需氨基酸0.1118g/L、维生素0.0026g/L、柠檬酸钠1.87mmol/L、谷胱甘肽2.31mmol/L和人血清白蛋白10.8mg/mL，溶剂为水；将氯化钙、氯化钾、氯化钠、硫酸镁、磷酸二氢钾、乳酸钠、丙酮酸钠、葡萄糖、碳酸氢钠按先固体后液体的顺序溶入注射用水中；然后将丙氨酰谷氨酰胺、非必需氨基酸和必需氨基酸，柠檬酸钠、谷胱甘肽、庆大霉素、维生素、酚红加入，持续搅拌使其充分溶解，并通入5%~6%的CO2气体，然后将人血清白蛋白按比例添加或在临床使用时添加人血清白蛋白，过滤除菌，由此得到囊胚培养液。（2）检测步骤（1）所得溶液的渗透压和pH值，记录最终渗透压和pH值；所述渗透压保持在260~290mOsm/Kg，所述pH值维持在7.1~7.5；（3）将步骤（2）检验合格后的溶液经0.1μm过滤器过滤到无菌密封罐中，由此得到囊胚培养液；（4）将步骤（3）无菌密封罐转移至百级层流系统中进行无菌灌装，贴标，包装，并至于2~8℃下贮存；（5）随机抽取包装好的囊胚培养液成品进行检测，检测项目及其参数：pH值：7.1~7.5渗透压：260~290mosm/Kg内毒素：＜0.05EU/mL无菌检查：合格鼠胚试验：1-细胞鼠胚试验96小时内扩张囊胚率≥80%也可以等步骤（2）所得溶液渗透压和pH值，并记录最终数据后，按照所配制溶液的量，将人血清白蛋白添加至溶液中。或步骤（2）完成后不添加人血清白蛋白，但在临床使用时添加人血清白蛋白。有益效果本专利技术所述的囊胚培养液具有高葡萄糖，低丙酮酸钠及乳酸钠的特点，匹配卵裂胚至囊胚期间胚胎对能力物质利用特点的，有效促进胚胎的发育。此外，针对性地必需氨基酸的比例，降低非必需氨基酸的比例，为该时期胚胎发育本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种囊胚培养液，其特征在于，所述的囊胚培养液包括碳酸氢钠27.3mmol/L、氯化钙2.3mmol/L、氯化钾6.1mmol/L、氯化钠98.5mmol/L、硫酸镁0.38mmol/L、磷酸二氢钾0.61mmol/L、酚红0.009mmol/L、丙氨酰谷氨酰胺1.82mmol/L、葡萄糖5.4mmol/L、丙酮酸钠为0.72mmol/L、乳酸钠为3.13mmol/L、庆大霉素10mg/L、非必需氨基酸 0.0051g/L、必需氨基酸0.1118g/L、维生素0.0026g/L、柠檬酸钠1.87mmol/L、谷胱甘肽2.31mmol/L和人血清白蛋白10.8mg/mL，溶剂为水。/n

【技术特征摘要】
1.一种囊胚培养液，其特征在于，所述的囊胚培养液包括碳酸氢钠27.3mmol/L、氯化钙2.3mmol/L、氯化钾6.1mmol/L、氯化钠98.5mmol/L、硫酸镁0.38mmol/L、磷酸二氢钾0.61mmol/L、酚红0.009mmol/L、丙氨酰谷氨酰胺1.82mmol/L、葡萄糖5.4mmol/L、丙酮酸钠为0.72mmol/L、乳酸钠为3.13mmol/L、庆大霉素10mg/L、非必需氨基酸0.0051g/L、必需氨基酸0.1118g/L、维生素0.0026g/L、柠檬酸钠1.87mmol/L、谷胱甘肽2.31mmol/L和人血清白蛋白10.8mg/mL，溶剂为水。


2.一种权利要求1所述的囊胚培养液的制备方法，其特征在于，
配方：
所述的囊胚培养液包括碳酸氢钠27.3mmol/L、氯化钙2.3mmol/L、氯化钾6.1mm...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜俊均，刘雪梅，方雅亮，
申请(专利权)人：广州达瑞生殖技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44