The invention provides a primer and a method for detecting LYST gene mutation in Chediak_Higashi syndrome based on high throughput sequencing technology. The primer combinations used include primers that specifically amplify the LYST gene and primers that specifically amplify the closely linked polymorphic sites (SNPs) within the upstream and downstream 2Mb of the LYST gene. The method has the advantages of universality, multi-site SNP sequencing, high throughput, low cost, high sensitivity and specificity. It can detect all mutations of Chediak Higashi syndrome gene before embryo transfer, and the detection process is faster and the detection result is more accurate.
【技术实现步骤摘要】
一种人类胚胎Chediak-Higashi综合征LYST基因突变检测的引物组合及方法
本专利技术提供了一种基于高通量测序技术检测Chediak-Higashi综合征基因突变试剂盒。其中，所用的引物组合物包括特异性扩增LYST基因和特异性扩增LYST基因上下游2Mb范围内紧密连锁多态性位点(SNP)的引物。本专利技术的方法具有通用性、多位点SNP测序、高通量、成本低、高灵敏度、特异性强的优点，可以对所有Chediak-Higashi综合征基因突变进行胚胎移植前检测，并且检测过程更加快速，检测结果也更为准确。技术背景Chediak-Higashi综合征(Chediak-Higashisyndrome，CHS，OMIM214500)是一种罕见的常染色体隐性遗传病，临床表现有色素减退、免疫缺陷、轻微出血倾向、进行性神经系统异常等，其发病率约为1/1000000。该病早期病情稳定，以后多在十年内迅速发展，出现弥散性淋巴细胞和组织细胞浸润，病情恶化，患者常因严重感染或出血而死亡，少数患者病情稳定，可存活至成年。近20年来，全世界累计报道临床诊断者不超过500例，我国累计临...
【技术保护点】
1.一种检测人类胚胎Chediak‑Higashi综合征LYST基因突变的引物组合，其特征在于：所述引物组合由SEQ ID NO：1～107所示序列的多重PCR引物组成。
【技术特征摘要】
1.一种检测人类胚胎Chediak-Higashi综合征LYST基因突变的引物组合，其特征在于：所述引物组合由SEQIDNO：1～107所示序列的多重PCR引物组成。2.一种检测人类胚胎Chediak-Higashi综合征LYST基因突变的方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)胚胎细胞全基因组扩增和夫妻双方全血DNA提取：将获自体外培养的囊胚的滋养层细胞经全基因组扩增对细胞中的基因组DNA进行富集，和全血DNA提取，得到DNA后进行浓度测定；(2)目的片段扩增：将DNA与多重PCR引物和PCR扩增试剂混合，经多重PCR反应，得到目的基因DNA片段；(3)引物消除：将步骤(2)得到的DNA片段与引物消除试剂混合反应，降解去除PCR扩增片段中的引物序列，得到去引物的DNA片段；(4)接头连接：将步骤(3)得到的DNA片段与P1接头、特异性接头、连接反应试剂混合进行连接反应，得到加接头的DNA片段；(5)磁珠纯化：将加接头的DNA片段进...
【专利技术属性】
技术研发人员：邓红辉，卢绍月，方雅亮，
申请(专利权)人：广州达瑞生殖技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44
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