用于基因分型检测α与β地中海贫血的引物组、芯片及试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种用于检测α与β地中海贫血的引物组，属于分子生物学领域。所述引物组包括α引物组，和β引物组；本发明专利技术还提供了可同时检测α与β地中海贫血的芯片，所述芯片上固定有如SEQ ID NO：1‑31所示序列的探针的芯片；基于所述引物组和芯片，本发明专利技术还提供了可同时检测α与β地中海贫血的试剂盒。本发明专利技术试剂盒具备检测时间短、成本低、操作方便，闭管操作，减少污染，对开展地贫人群筛查，遗传咨询和产前诊断具有重大的意义。

Primers, chips and kits for genotyping alpha and beta thalassemia

The invention provides a primer group for detecting alpha and beta thalassemia, belonging to the field of molecular biology. The primer group includes a primer group and a beta primer group; the invention also provides a chip capable of simultaneously detecting alpha and beta thalassemia, on which a probe chip fixed with a sequence as shown in SEQ ID NO:1 31; and based on the primer group and the chip, the invention also provides a kit capable of simultaneously detecting alpha and beta thalassemia. The kit has the advantages of short detection time, low cost, convenient operation, closed tube operation, reducing pollution, and is of great significance for carrying out screening, genetic counseling and prenatal diagnosis for the poor.

【技术实现步骤摘要】
用于基因分型检测α与β地中海贫血的引物组、芯片及试剂盒
本专利技术属于分子生物学医药领域，涉及一种检测α与β地中海贫血技术，特别是涉及一种直接PCR(DirectPCR)结合杂交技术同时检测7种α地中海贫血突变和19种点突变β地中海贫血的试剂盒。
技术介绍
地中海贫血(thalassemia,简称地贫)，是是由于α或β珠蛋白基因缺失或突变导致珠蛋白链合成障碍，造成α链与β链的比例失去平衡，相对过剩的链呈游离状态，进而导致血红蛋白不稳定，冗余的珠蛋白链沉积在红细胞膜上，容易氧化变性，红细胞膜的通透性和脆性发生改变，导致溶血性贫血，临床上常表现出症状轻重不一的慢性进行性溶血性贫血。并且根据受累的珠蛋白肽链的类型分为α、β、γ、δ和δβ地贫等类型。其中以α、β地贫最为常见，危害也最大。广泛发生于热带和亚热带国家及我国长江以南地区。α-地中海贫血(以下简称α-地贫)是由于α-珠蛋白基因缺失或点突变而致α-珠蛋白链合成障碍的疾病，具高度的遗传异质性。95％以上为缺失型，是由于α珠蛋白基因大片段缺失所致。就人类正常基因组而言，a珠蛋白簇的基因型为ζ2/α22/α12，有4个α珠蛋白基因，一条染色本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于检测α与β地中海贫血的引物组，包括α引物组，和β引物组；所述α引物组包括如下引物对：上下游引物序列分别如SEQ ID NO.37和SEQ ID NO.38所示的APF/APR；上下游引物序列分别如SEQ ID NO.43和SEQ ID NO.44所示的SEAF/SEAR；上下游引物序列分别如SEQ ID NO.45和SEQ ID NO.46所示的THAIF/THAIR；上下游引物序列分别如SEQ ID NO.47和SEQ ID NO.48所示的4.2F/4.2R；上下游引物序列分别如SEQ ID NO.49和SEQ ID NO.50所示的3.7F/3.7R；所述β引物组包括如下引物对：...

【技术特征摘要】
1.用于检测α与β地中海贫血的引物组，包括α引物组，和β引物组；所述α引物组包括如下引物对：上下游引物序列分别如SEQIDNO.37和SEQIDNO.38所示的APF/APR；上下游引物序列分别如SEQIDNO.43和SEQIDNO.44所示的SEAF/SEAR；上下游引物序列分别如SEQIDNO.45和SEQIDNO.46所示的THAIF/THAIR；上下游引物序列分别如SEQIDNO.47和SEQIDNO.48所示的4.2F/4.2R；上下游引物序列分别如SEQIDNO.49和SEQIDNO.50所示的3.7F/3.7R；所述β引物组包括如下引物对：上下游引物序列分别如SEQIDNO.37和SEQIDNO.38所示的APF/APR；上下游引物序列分别如SEQIDNO.39和SEQIDNO.40所示的B1F/B1R；上下游引物序列分别如SEQIDNO.41和SEQIDNO.42所示的B2F/B2R。2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述检测指以人体血液和/或体液和/或人体基因组DNA为模板，用所述引物组进行PCR扩增后，将所得扩增产物进行电泳和/或测序即可获知结果。3.用于基因分型检测α与β地中海贫血的芯片，包括如下特异性探针：用于检测β-地中海贫血基因所对应的正常基因和突变基因位点的特异性寡核苷酸探针，其核苷酸序列如SEQIDNO：1-25；用于检测α-地中海贫血非缺失基因所对应的正常基因和突变基因位点的特异性寡核苷酸探针，其核苷酸序列如SEQIDNO：26-31；用于检测α-地中海贫血缺失基因的特异性寡核苷酸探针，其核苷酸序列如SEQIDNO：33-36。4.根据权利要求3所述的芯片，其特征在于，还包括：显色体系控制探针，其碱基序列如SEQIDNO：32。5.根据权利要求3或4所述的芯片，其特征在于，还包括：用于固定各探针的基底，；对应各核苷酸序列的每条探针被固定在所述基底上，形成所述芯片。6.根据权利要求5所述的芯片，其特征在于，所述基底选自玻璃片、硅胶晶片、尼龙膜、硝酸纤维素膜、聚丙烯膜、微缩磁珠；优选为尼龙膜。7.用于快速检测缺失型α与β地中海贫血基因型的试剂盒，包括权利要求1或2所述的引物组，及权利要求3-6任一所述的芯片。8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述快速检测指，直接以人体体液和/或血液和/或胚胎的遗传物质做为模板，用所述引物组进行PCR扩增后，将所得扩增产物滴加至所述芯片上进行杂交发生显色反应可获知结果。9.根据权利要求7或8任一所述的试剂盒，其特征在于，还包括用于进行PCR和/或电泳的试剂。所述用于进行PCR的试剂包括dNTP、DNA聚合酶、缓冲液、双蒸水、MgCl2；所述用于进行电泳的试剂包括琼脂糖、蒸馏水、核酸染料；所述核酸染料优选溴化乙锭；所述PCR的反应体系为：1～4μl模板、各引物：0.05～1μmol/L、MgCl2浓度为1.5～5mM/L、dNTP的浓度为100～500μM/L、DNA聚合酶的浓度为1～4U/反应；或者，所述β引物组的PCR的反应体系为：1.25U/μLMightyAmpTaq0.1～1μl、2×MightyAmpBuffer10μl、10μmol/LB1F0.1～1μl、10μmol/LB1R0.1～1μl、10μmol/LB2F0.1～1μl、10μmol/LB2...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈治中，卿吉琳，
申请(专利权)人：陈治中，
类型：发明
国别省市：广西,45