一种小鼠早期胚胎的体外培养方法技术

本发明专利技术公开了一种小鼠早期胚胎的体外培养方法，特点是包括以下步骤：对小鼠早期胚胎采用2000‑5000勒克斯光源处理0.5‑6小时，小鼠早期胚胎包括2细胞时期、4细胞时期、8细胞时期、桑椹胚时期和囊胚期的胚胎单细胞，优点是有效提高成囊率和囊胚直径。

An in vitro culture method of early mouse embryos

【技术实现步骤摘要】
一种小鼠早期胚胎的体外培养方法
本专利技术涉及一种小鼠早期胚胎的体外培养方法。
技术介绍
辅助生殖技术通常意味着胚胎在检查和转移过程中暴露在可见光下。由于胚胎的体内环境比体外环境暗得多，因此暴露在光下是胚胎体外受精过程中的一个非自然应激因素。在胚胎操作过程中，这种高强度或长时间的光照暴露是对胚胎有害的，因为它们会直接诱导许多应激相关的代谢过程或激活导致胚胎凋亡的反应，如胞质内活性氧的生成等。然而，光照后胚胎整个转录组学发生的变化尚不清楚。因为不同哺乳动物胚胎的植入前进程在许多方面都具有相似性，所以目前研究通常认为小鼠胚胎，作为人类胚胎的替代品，是改进辅助生殖技术一种较好的动物胚胎模型。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种有效提高成囊率、囊胚直径的小鼠早期胚胎的体外培养方法。本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种小鼠早期胚胎的体外培养方法，包括以下步骤：对小鼠早期胚胎采用2000-5000勒克斯光源处理0.5-6小时。所述的小鼠早期胚胎包括2细胞时期、4细胞时期、8细胞时期、桑椹胚时期和囊胚期的胚胎单细胞。与现有技术相比，本专利技术的优点在于：本专利技术公开了一种小鼠早期胚胎的体外培养方法，，我们阐述了不同的光照强度和照射时间对植入前小鼠胚胎的损伤，并通过单细胞转录组测序进一步阐明了高强度和长时间光照下的转录组学变化，该专利技术为选择辅助生殖胚胎光照强度和时间，提高优质胚胎率提供了数据来源和技术基础。附图说明图1为不同光照时间对小鼠胚胎成囊率(percentageblastulation)的影响；图2为不同光照强度对小鼠胚胎成囊率的影响；图3为不同光照强度对小鼠胚胎囊胚形态的影响；图4为不同光照强度对小鼠囊胚直径(Diameter)的影响，Bar＝100μm，*：Pvalue＜0.05；图5为光照对小鼠早期胚胎转录组影响。各阶段主成分分析，包含2细胞时期(2-cell)、4细胞时期(4-cell)、8细胞时期(8-cell)、桑葚配时期(Morula)及囊胚期(Blastocyst)；图6为光照对小鼠早期胚胎转录组影响(各阶段光照组与无光照组差异基因G0信号通路富集分析)；图7为光照对小鼠早期胚胎转录组影响：4细胞时期对2细胞时期高表达基因韦恩图。具体实施方式以下结合附图实施例对本专利技术作进一步详细描述。以下实施例选择五个光照处理时间、三种光照强度处理，选择小鼠早期胚胎作为研究对象，分析处理强度、处理时间对小鼠胚胎成囊率、囊胚形态的影响，确定影响早期胚胎发育的处理时间和光照强度，进而通过单细胞转录组高通量测序，分析光照组和无光照组之间的差异基因，确定光照对于小鼠胚胎各时期发育的影响。实施例11、我们收集了用于不同光照时间处理的2细胞时期小鼠胚胎，具体数量如下：无光照处理(0小时)227个、0.5小时102个、1小时98个、2小时103个、4小时104个以及6小时118个。2、按照不同光照时间处理2细胞时期小鼠胚胎，处理完成后于37摄氏度培养箱继续黑暗培养。3、统计各光照时间处理小鼠囊胚生成比率，我们发现6小时处理组成囊率显著下降，结果如图1所示。实施例21、我们收集了用于不同光照强度处理的2细胞时期小鼠胚胎，具体数量如下：无光照处理(0勒克斯)332个、2000勒克斯131个、3000勒克斯152个、5000勒克斯191个。2、按照不同光照强度处理2细胞时期小鼠胚胎，处理完成后于37摄氏度培养箱继续黑暗培养。3、统计各光照强度处理小鼠囊胚生成比率，我们发现6小时处理组成囊率显著下降，结果如图2所示。4、统计各光照强度处理小鼠囊胚形态，结果如图3所示。5、统计各光照强度处理小鼠囊胚直径，结果如图4所示、实施例31、我们收集了光照组(5000勒克斯光照2细胞时期小鼠胚胎6小时)与无光照组小鼠胚胎各时期细胞，通过Smart-seq2单细胞转录组高通量测序方法，并序列比对、表达量计算获得单细胞转录组表达量数据。4、分别比较光照组与无光照组各时期单细胞转录组主成分，结果发现各时期光照组与无光照组转录组存在较大差异，聚集在不同位置，如图5所示。5、分别比较光照组与无光照组各时期单细胞转录组差异基因，对这些差异基因进行G0信号通路富集分析(图6A-E)，发现在所有胚胎时期差异基因都存在转录调控(DNA模板)信号通路的富集，在4细胞时期到8细胞时期的差异基因高度富集在细胞凋亡过程，在桑葚配到囊胚时期则富集在底物粘附依赖性细胞扩散。6、进一步比较4细胞时期对2细胞时期高表达基因，结果发现光照组特异的高表达基因823个，无光照组特异的高表达基因2853个(图7)。表1为无光照组特异高表达2853个差异基因G0信号通路富集分析由上述表1可知，光照对小鼠早期胚胎转录组存在差异，无光照组高表达差异基因主要富集在氧化磷酸化、代谢通路、RNA转运等方面。上述说明并非对本专利技术的限制，本专利技术也并不限于上述举例。本
的普通技术人员在本专利技术的实质范围内，做出的变化、改型、添加或替换，也应属于本专利技术的保护范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种小鼠早期胚胎的体外培养方法，其特征在于包括以下步骤：对小鼠早期胚胎采用2000-5000勒克斯光源处理0.5-6小时。/n

【技术特征摘要】
1.一种小鼠早期胚胎的体外培养方法，其特征在于包括以下步骤：对小鼠早期胚胎采用2000-5000勒克斯光源处理0.5-6小时。


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【专利技术属性】
技术研发人员：薛志刚，曾桥，
申请(专利权)人：同济大学，
类型：发明
国别省市：上海;31