【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/Kexin9型(PCSK9)相关的病症的组合物和方法相关申请本申请要求于2017年2月22日提交的美国临时申请号62/461,852和于2017年6月29日提交的美国临时申请号62/526,646的优先权和权益，其各自的内容在此以其整体并入。序列表本申请与电子格式的序列表一起提交。名为“CRIS-017_001WO_SequenceListing_ST25.txt”的序列表文件于2018年2月8日创建，且大小为16.9MB。序列表的电子格式的信息通过引用以其整体并入本文。领域本专利技术涉及基因编辑的领域，且特别是涉及前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/Kexin9型(PCSK9)基因的改变。背景基因组工程指的是用于活生物体的遗传信息(基因组)的靶向特异性修饰的策略和技术。因为宽范围的可能的应用，特别是在人健康领域中，基因组工程是一个非常活跃的研究领域。例如，基因组工程可用于改变(例如，校正或敲除)携带有害突变的基因，或探究基因的功能。为将转基因插入活细胞中而开发的早期...
【技术保护点】
1.用于通过基因组编辑在细胞中编辑前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/Kexin 9型(PCSK9)基因的方法，其包括以下步骤：将一种或多种脱氧核糖核酸(DNA)内切核酸酶引入细胞以实现PCSK9基因或PCSK9调节元件之内或附近的一个或多个单链断裂(SSB)或双链断裂(DSB)，其导致PCSK9基因之内或附近的至少一个核苷酸的一个或多个永久性插入、缺失或突变，由此减少或消除PCSK9基因产物的表达或功能。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170222 US 62/461852;20170629 US 62/5266461.用于通过基因组编辑在细胞中编辑前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/Kexin9型(PCSK9)基因的方法，其包括以下步骤：将一种或多种脱氧核糖核酸(DNA)内切核酸酶引入细胞以实现PCSK9基因或PCSK9调节元件之内或附近的一个或多个单链断裂(SSB)或双链断裂(DSB)，其导致PCSK9基因之内或附近的至少一个核苷酸的一个或多个永久性插入、缺失或突变，由此减少或消除PCSK9基因产物的表达或功能。
2.用于治疗具有PCSK9相关的病况或病症的患者的离体方法，其包括以下步骤：
（a）从患者分离肝细胞；
（b）在肝细胞的前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/Kexin9型(PCSK9)基因或编码PCSK9基因的调节元件的其它DNA序列之内或附近进行编辑；和
（c）将所述基因组编辑的肝细胞植入患者。
3.权利要求2的方法，其中所述编辑步骤包括将一种或多种脱氧核糖核酸(DNA)内切核酸酶引入肝细胞以实现PCSK9基因或PCSK9调节元件之内或附近的一个或多个单链断裂(SSB)或双链断裂(DSB)，其导致PCSK9基因之内或附近的至少一个核苷酸的一个或多个永久性插入、缺失或突变，由此减少或消除PCSK9基因产物的表达或功能。
4.用于治疗具有PCSK9相关的病况或病症的患者的离体方法，其包括以下步骤：
（a）产生患者特异性的诱导的多能干细胞(iPSC)；
（b）在iPSC的前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/Kexin9型(PCSK9)基因或编码PCSK9基因的调节元件的其它DNA序列之内或附近进行编辑；
（c）将经基因组编辑的iPSC分化为肝细胞；和
（d）将所述肝细胞植入患者。
5.权利要求4的方法，其中所述编辑步骤包括将一种或多种脱氧核糖核酸(DNA)内切核酸酶引入iPSC以实现PCSK9基因或PCSK9调节元件之内或附近的一个或多个单链断裂(SSB)或双链断裂(DSB)，其导致PCSK9基因之内或附近的至少一个核苷酸的一个或多个永久性插入、缺失或突变，由此减少或消除PCSK9基因产物的表达或功能。
6.用于治疗具有PCSK9相关的病况或病症的患者的离体方法，其包括以下步骤：
（a）从所述患者分离间充质干细胞；
（b）在间充质干细胞的前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/Kexin9型(PCSK9)基因或编码PCSK9基因的调节元件的其它DNA序列之内或附近进行编辑；
（c）将经基因组编辑的间充质干细胞分化为肝细胞；和
（d）将肝细胞植入患者。
7.权利要求6的方法，其中所述编辑步骤包括将一种或多种脱氧核糖核酸(DNA)内切核酸酶引入间充质干细胞以实现PCSK9基因或PCSK9调节元件之内或附近的一个或多个单链断裂(SSB)或双链断裂(DSB)，其导致PCSK9基因之内或附近的至少一个核苷酸的一个或多个永久性插入、缺失或突变，由此减少或消除PCSK9基因产物的表达或功能。
8.用于治疗具有PCSK9相关的病症的患者的体内方法，其包括以下步骤：编辑患者的细胞中的前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/Kexin9型(PCSK9)基因。
9.权利要求8的方法，其中所述编辑步骤包括将一种或多种脱氧核糖核酸(DNA)内切核酸酶引入细胞以实现PCSK9基因或PCSK9调节元件之内或附近的一个或多个单链断裂(SSB)或双链断裂(DSB)，其导致PCSK9基因之内或附近的至少一个核苷酸的一个或多个永久性插入、缺失或突变，由此减少或消除PCSK9基因产物的表达或功能。
10.权利要求8-9中任一项的方法，其中所述细胞是肝细胞。
11.权利要求10的方法，其中通过局部注射、全身输注或其组合将一种或多种脱氧核糖核酸(DNA)内切核酸酶递送至肝细胞。
12.改变细胞中的PCSK9基因的连续基因组序列的方法，其包括使所述细胞与一种或多种脱氧核糖核酸(DNA)内切核酸酶接触以实现一个或多个单链断裂(SSB)或双链断裂(DSB)。
13.权利要求12的方法，其中连续基因组序列的改变发生在PCSK9基因的一个或多个外显子中。
14.权利要求1-13中任一项的方法，其中一种或多种脱氧核糖核酸(DNA)内切核酸酶选自SEQIDNO:1-620中所列的那些中的任一种，和与SEQIDNO:1-620中所列的那些中的任一种具有至少70%同源性的变体。
15.权利要求14的方法，其中所述一种或多种脱氧核糖核酸(DNA)内切核酸酶是一种或多种蛋白或多肽。
16.权利要求14的方...
【专利技术属性】
技术研发人员：AS伦德伯格，S库尔卡尼，L克莱因，YS阿拉泰恩，RL博戈拉德，HK帕马纳班，
申请(专利权)人：克里斯珀医疗股份公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH
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