【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
技术实现思路
【技术保护点】
1.一种用于将CRISPR/Cas介导的基因编辑系统递送至受试者的眼睛的细胞的方法，所述方法包括向所述受试者施用与以下复合的多于一个脂质纳米颗粒(LNP)：
2.根据权利要求1所述的方法，其中将CRISPR/Cas介导的基因编辑系统递送至所述受试者的小梁网细胞。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述靶基因是肌纤蛋白(MYOC)基因。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述受试者的眼睛中所述靶基因的表达、由所述靶基因编码的蛋白质的表达或两者在施用后降低至少20％、至少40％、至少70％或至少90％。
<...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于将crispr/cas介导的基因编辑系统递送至受试者的眼睛的细胞的方法，所述方法包括向所述受试者施用与以下复合的多于一个脂质纳米颗粒(lnp)：
2.根据权利要求1所述的方法，其中将crispr/cas介导的基因编辑系统递送至所述受试者的小梁网细胞。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述靶基因是肌纤蛋白(myoc)基因。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述受试者的眼睛中所述靶基因的表达、由所述靶基因编码的蛋白质的表达或两者在施用后降低至少20％、至少40％、至少70％或至少90％。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述受试者的眼睛的小梁网细胞中所述靶基因的表达降低。
6.一种用于治疗患有青光眼的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用与以下复合的多于一个脂质纳米颗粒(lnp)：
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述青光眼是肌纤蛋白相关的青光眼。
8.根据权利要求6或7所述的方法，其中所述青光眼是原发性开角型青光眼(poag)。
9.根据权利要求6-8中任一项所述的方法，其中所述受试者的眼睛的小梁网细胞中所述myoc基因的表达降低。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述rna指导的核酸酶是cas9核酸酶。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述cas9核酸酶是金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus)cas9(sacas9)核酸酶或酿脓链球菌(streptococcus pyogenes)cas9(spcas9)核酸酶。
12.根据权利要求4-11中任一项所述的方法，其中被所述指导rna靶向的位点在myoc基因的外显子1、外显子2或外显子3内。
13.根据权利要求4-12中任一项所述的方法，其中被所述指导rna靶向的位点包含选自由seq id no:1-27和55-115组成的组的核苷酸序列。
14.根据权利要求4-13中任一项所述的方法，其中被所述指导rna靶向的位点包含选自由seq id no:6、10、15、18、26、59、61、63、64、66、69、72-77、79、81、82、90、95、98-101、104、106、107、109和113-115组成的组的核苷酸序列。
15.根据权利要求4-14中任一项所述的方法，其中被所述指导rna靶向的位点包含选自由seq id no:10、64、73、74、75、76和115组成的组的核苷酸序列。
16.根据权利要求4-15中任一项所述的方法，其中所述指导rna包含间隔区序列，所述间隔区序列具有对应于选自由seq id no:1-27和55-115组成的组的核苷酸序列中的任何一个的rna序列。
17.根据权利要求4-16中任一项所述的方法，其中所述指导rna包含间隔区序列，所述间隔区序列具有对应于选自由seq id no:6、10、15、18、26、59、61、63、64、66、69、72-77、79、81、82、90、95、98-101、104、106、107、109和113-115组成的组的核苷酸序列中的任何一个的rna序列。
18.根据权利要求4-17中任一项所述的方法，其中所述指导rna包含间隔区序列，所述间隔区序列具有对应于选自由seq id no:10、64、73、74、75、76和115组成的组的核苷酸序列中的任何一个的rna序列。
19.根据权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所述指导rna是sacas9 sgrna或spcas9 sgrna。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述指导rna包含选自由seq id no:195-371组成的组的核苷酸序列。
21.根据权利要求19或20所述的方法，其中所述指导rna包含选自由seq id no:258、267-270、309、319、328-331、370和371组成的组的核苷酸序列。
22.根据权利要求1-21中任一项所述的方法，其中所述多于一个lnp中的lnp包含可电离阳离子脂质、辅助脂质、甾醇和聚(乙二醇)-脂质(peg-脂质)。
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述lnp包含约20％-60％的可电离脂质、约18.5％至60％的甾醇、约0.01％至30％的辅助脂质和/或约0％-10％的peg-脂质。
24.根据权利要求22-23中任一项所述的方法，其中所述可电离阳离子脂质选自由c12-200、ckk-e12、dlin-mc3、dlin-mc4、dlin-mc5、dodma、dotap、dodap、dc胆固醇、dlin-dma、dlin-k-dma和dlin-kc2_dma组成的组。
25.根据权利要求22-24中任一项所述的方法，其中所述辅助脂质选自由以下组成的组：1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dopc)、1,2-二月桂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dlpc)、1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dmpc)、1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dopc)、双十一酰基磷脂酰胆碱(dupc)、磷脂酰胆碱(popc)、1-硬脂酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(sopc)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dope)、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dspe)、1,2-双十六酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dppe)、1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dmpe)、1-硬脂酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(sope,18:0-18:1pe)、1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(pope)、二油酰基磷脂酰甘油(dopg)和二棕榈酰基-sn-甘油-3-pg(dppg)。
26.根据权利要求22-25中任一项所述的方法，其中所述甾醇选自由胆固醇、谷甾醇、β-谷甾醇、植物甾醇、岩藻甾醇、动物固醇和麦角甾醇组成的组。
27.根据权利要求22-25中任一项所述的方法，其中所述甾醇选自由胆固醇、谷甾醇、β-谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、岩藻甾醇和麦角甾醇组成的组。
28.根据权利要求22-27中任一项所述的方法，其中所述peg-脂质是dmg-peg、dsg-peg、peg-神经酰胺或peg-磷脂。
29.根据权利要求1-27中任一项所述的方法，其中所述多于一个lnp中的lnp包含约50mol％的c12-200、dlin-mc3、dodma或dotap、约10mol％的dspc、约37.0mol％-39.5mol％的胆固醇或谷甾醇和约0.5％-3.0％的dmg-peg。
30.根据权利要求29所述的方法，其中所述lnp包含约50mol％的c12-200、约10mol％的dspc、约37.0mol％-39.5mol％的谷甾醇和约0.5％-1.5％的dmg-peg。
31.根据权利要求1-27中任一项所述的方法，其中所述多于一个lnp的平均粒度为约80nm-100nm，并且任选地85nm-95nm。
32.根据权利要求1-31中任一项所述的方法，其中所述多于一个lnp通过玻璃体内注射或前房内注射施用至所述受试者。
33.根据权利要求1-32中任一项所述的方法，其中所述方法包括向所述受试者单次施用所述多于一个lnp。
34.根据权利要求1-33中任一项所述的方法，其中所述受试者...
【专利技术属性】
技术研发人员：赛什达尔·雷迪·珀利斯，多米尼克·奥莱特，迈克尔·卢卡森，ML·德匡特，
申请(专利权)人：克里斯珀医疗股份公司，
类型：发明
国别省市：
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