【技术实现步骤摘要】
一种利用角蛋白酶提取DNA的方法
本专利技术属于提取DNA
，具体涉及一种利用角蛋白酶提取DNA的方法。
技术介绍
嫌疑人在犯罪现场残留的生物物证中，指纹、毛发、指甲等占有非常大的比例，而案件侦查人员想要从这些物证中获取嫌疑人遗传信息，就必须解决指纹、毛发、指甲等的DNA提取问题，指纹中含有皮肤角质层细胞脱落的物质，角质层细胞是一些角化死亡的细胞，含有少量尚未完全降解的基因组DNA和大量角蛋白，与角质层细胞类似，指甲、毛发也含有少量尚未完全降解的基因组DNA和大量角蛋白，如何消化角蛋白，释放其中的微量DNA，是从指纹、毛发、指甲中成功提取DNA的关键；现阶段常用的DNA提取方法为有机法，有机法利用DNA易溶于水，不溶于有机溶液的特性，进行提取使用有机溶剂将样品与纯水混合，样品中蛋白质分子与水进行水合作用，在表面形成一层水化层，使蛋白质分子进入水溶液中形成稳定胶体溶液，通过加入有机溶剂进行离心提取DNA,其提取DNA特点为双链，纯度高，但在提取DNA的过程中加入一定量的有毒有机试剂，进行DNA提取时会挥发，对人体...
【技术保护点】
1.一种利用角蛋白酶提取DNA的方法，其特征在于：包括以下步骤：/nA、取样，对样品进行处理，往样品中加入角蛋白酶和裂解液，混匀后加热消化裂解；/nB、将高速离心后的上清液转移至新的离心管中，往离心管中加入结合液，通过DNA结合载体结合DNA；/nC、用乙醇溶液漂洗DNA结合载体；/nD、用脱洗液洗脱DNA。/n
【技术特征摘要】
1.一种利用角蛋白酶提取DNA的方法，其特征在于：包括以下步骤：
A、取样，对样品进行处理，往样品中加入角蛋白酶和裂解液，混匀后加热消化裂解；
B、将高速离心后的上清液转移至新的离心管中，往离心管中加入结合液，通过DNA结合载体结合DNA；
C、用乙醇溶液漂洗DNA结合载体；
D、用脱洗液洗脱DNA。
2.根据权利要求1所述的一种利用角蛋白酶提取DNA的方法，其特征在于：步骤A中所述的样品为头发、指甲、指纹中的一种，具体由如下方法处理：
1)头发：取头发一根，去除毛囊部位，剪取靠近毛囊端3-4厘米长部位放入离心管中；
2)指甲：取指甲一块，剪成小块放入离心管中；
3)指纹：用沾有纯化水的拭子擦拭指纹，折断拭子头放入离心管中。
3.根据权利要求1所述的一种利用角蛋白酶提取DNA的方法，其特征在于：步骤A中所述的角蛋白酶的浓度为5Units/ul，角蛋白酶的用量为10ul；步骤A中所述的裂解液成分为：10mmol/lTris-HCl，m/v浓度为0.1％的十二烷基硫酸钠，1mmol/lEDTA，裂解液pH值为10.0，裂解液的用量为300ul。
4.根据权利要求1所述的一种利用角蛋白酶提取DNA的方法，其特征在于：步骤B中所述的结合液成分为：4.5mol/l异硫氰酸胍，100mmol/l柠檬酸钠，结合液的pH值5.5，结合液的用量为450ul。
5.根据权利要求1所述的一种利用角蛋白酶提取DNA的方法，其特征在于：步骤B中所述的DNA结合载体为磁珠、硅珠、硅胶模中的一种。
6.根据权利要求5所述的一种利用角蛋白酶提取DNA的方法，其特征在于：通过磁珠提取DNA的具体步骤如下：
1.1:进行取样，对样品进行处理，将处理后的样品加入离心管中，往离心管加入角蛋白酶和裂解液,进行搅拌5-15min，在温度为50℃的条件下，进行水浴加热3-6h，制得第一混合溶液；
1.2：将步骤1.1装有第一混合溶液的离心管，放入离心机中，在转速为12000rpm的条件下，进行离心1min，将上清液转移至新的离心管内，加入结合液和磁珠，将离心管放置在振荡器上，在转速为1300rpm的室温条件下，震荡5-15min，将离心管放置在磁力架上静置5-10min，去除上清液得到第一中间体的磁珠；
1.3：漂洗液加入步骤1.2装有磁珠的离心管中，将离心管放置在振荡器上，在转速为1300rpm的室温条件下，震荡5-10min，将离心管放置在磁力架上静置5-10min，去除上清液，再次加入漂洗液在转速为1300rpm的室温条件下，震荡5-10min，将离心管放置在磁力架上静置5-10min，去除上清液，得到含有第二中间体的磁珠；
1.4：将步骤1.3制得的含有第二中间体的磁珠放入新的离心管中，加入洗脱液，在温度为65℃，转速为1300rpm的条件下，震荡10-15min，取出磁珠，制得DNA溶液。
7.根据权利要求5所述的一种利用角蛋...
【专利技术属性】
技术研发人员：张丹，侯庆唐，夏冬景，何凤琴，
申请(专利权)人：山东森芃生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37
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