利用选择性过滤柱对法医检样中DNA进行纯化浓缩的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用选择性过滤柱对法医检样中DNA进行纯化浓缩的方法，具体如下：将消化裂解后的细胞液加入选择性过滤柱的内管中，同时将选择性过滤柱在离心机中离心；向选择性过滤柱内加入5‑100微升水，震荡30s后，将选择性过滤柱内的水溶液转移至干净的离心管内，此时离心管的溶液即为纯化浓缩后的溶液。本发明专利技术利用裂解液将检样中残留的人源细胞进行裂解消化后，DNA完全游离于溶液中，通过离心管将检样中的固体颗粒离心除去，再通过选择性过滤柱的底部的超滤膜，在高速离心情况下，超滤膜仅对小分子物质具有透过性，对生物大分子物质DNA无透过性，进而能够实现大分子物质DNA的纯化浓缩。

Purification and Concentration of DNA in Forensic Samples by Selective Filtration Column

【技术实现步骤摘要】
利用选择性过滤柱对法医检样中DNA进行纯化浓缩的方法
本专利技术属法医物证鉴定领域，涉及一种利用选择性过滤柱对法医检样中DNA进行纯化浓缩的方法。
技术介绍
法医DNA分型是法医物证鉴定的重要技术手段之一，常见法医DNA分型技术包括限制性片段长度多态性标记技术(RFLPs)、短串联重复序列分析技术(STR)、单核苷酸多态性分析技术(SNP)、DNA甲基化分析技术等等。无论是哪一种DNA分型技术，都离不开核酸提取纯化技术，只有从法医检样中提取到高质量的DNA，下游的DNA分型技术才能有得到有效地分型数据。DNA提取，首先，需要将细胞进行裂解，使得细胞核内的染色质释放出来；其次，需要消化分解染色质中的蛋白质，使得DNA完全游离出来；再次，需要将溶液中存在的细胞碎片、无机盐等杂质去除，对DNA进行纯化。目前，商品化的DNA提取试剂盒中，细胞裂解消化一般利用表面活性剂和蛋白酶K来完成，DNA纯化一般利用硅胶膜、磁珠、硅珠在特殊溶液条件下对DNA的可逆吸附来完成，这些商品化试剂盒的缺点是需要反复漂洗硅胶膜、磁珠、硅珠来去除细胞碎片、无机盐等。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种利用选择性过滤柱对法医检样中DNA进行纯化浓缩的方法，利用裂解液将检样中残留的人源细胞进行裂解消化，待细胞膜、核膜、蛋白质等组分被消化后，DNA完全游离于溶液中，通过离心管将检样中的固体颗粒离心除去，滤液中仅包含DNA一种生物大分子及一些小分子，再利用选择性过滤柱截留生物大分子DNA，滤去小分子物质，使得滤液中的小分子DNA得到纯化浓缩，选择性过滤柱的底部装配了超滤膜，在高速离心情况下，超滤膜仅对小分子物质具有透过性，对生物大分子物质DNA无透过性，进而能够实现大分子物质DNA的纯化浓缩。本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：一种利用选择性过滤柱对法医检样中DNA进行纯化浓缩的方法，具体如下：第一步，将消化裂解后的细胞液加入选择性过滤柱的内管中，同时将选择性过滤柱在3000-14000r/min的离心机中离心1-10min，将小分子物质过滤除去；第二步，向选择性过滤柱内加入5-100微升水，震荡30s后，将选择性过滤柱内的水溶液转移至干净的离心管内，此时离心管的溶液即为纯化浓缩后的溶液；其中选择性过滤柱包括外管和套设在外管内部的内管，内管的管底开有出液口，出液口处一体连接固定有出液管，同时内管的侧壁内表面位于出液口的上方安装有支撑板，支撑板的表面开有若干滤液孔，同时支撑板的表面从下到上依次设有超滤膜和密封压圈，密封压圈压紧在超滤膜的表面。进一步地，细胞液的具体消化裂解过程如下：①对法医检样进行取材，加入细胞裂解消化液，在50-80℃下裂解消化15min-12h；②将裂解消化后的细胞液放入离心管中，在3000-14000r/min的离心机中离心1-10min，然后取离心管中上清溶液至选择性过滤柱内。进一步地，所述超滤膜为孔径范围为1nm-100nm的微孔过滤膜。进一步地，超滤膜的材质为纤维素、纤维素的衍生物、聚偏氟乙烯、聚砜、聚丙烯腈、聚酰胺交链的聚乙烯醇、改性丙烯酸聚合物、聚碳酸酯、聚氯乙烯、聚砜酰胺、磺化聚砜中的一种，或其它能制成孔径范围为1nm-20nm超滤膜的材质。本专利技术的有益效果：本专利技术利用裂解液将检样中残留的人源细胞进行裂解消化，待细胞膜、核膜、蛋白质等组分被消化后，DNA完全游离于溶液中，通过离心管将检样中的固体颗粒离心除去，滤液中仅包含DNA一种生物大分子及一些小分子，再利用选择性过滤柱截留生物大分子DNA，滤去小分子物质，使得滤液中的小分子DNA得到纯化浓缩，选择性过滤柱的底部装配了超滤膜，在高速离心情况下，超滤膜仅对小分子物质具有透过性，对生物大分子物质DNA无透过性，进而能够实现大分子物质DNA的纯化浓缩。附图说明为了便于本领域技术人员理解，下面结合附图对本专利技术作进一步的说明。图1为依据本专利技术的方法及选择性过滤柱获得的DNA溶液的分型图谱；图2为本专利技术选择性过滤柱的剖视图；图3为本专利技术选择性过滤柱局部结构示意图。具体实施方式请参阅图1-3，结合如下实施例进行详细说明：一种利用选择性过滤柱对法医检样中DNA进行纯化浓缩的方法，具体如下：第一步，对法医检样进行取材，加入细胞裂解消化液，在50-80℃下裂解消化15min-12h；细胞裂解消化液能对法医检样中的人源细胞进行裂解消化，并将DNA释放至溶液中；其中细胞裂解消化液中含有1％(W/V)的十二烷基硫酸钠、10mmol/L的乙二胺四乙酸二钠，20mmol/L的三羟甲基氨基甲烷，0.5mg/ml蛋白酶K，并且细胞裂解消化液的pH＝7.5；第二步，将第一步中裂解消化后的细胞液放入离心管中，在3000-14000r/min的离心机中离心1-10min，然后取离心管中上清溶液至选择性过滤柱的内管2内；第三步，将选择性过滤柱在3000-14000r/min的离心机中离心1-10min，将小分子物质过滤除去；第四步，向选择性过滤柱内加入5-100微升水，震荡30s后，将选择性过滤柱内的水溶液转移至干净的离心管内，此时离心管的溶液即为纯化浓缩后的溶液，将得到的DNA溶液用21试剂盒(Promega公司)进行PCR扩增，PCR产物用AB3500XL基因分析仪(AB公司)进行电泳分析，数据用GeneMapper软件分析，结果见图1；其中选择性过滤柱包括外管1和套设在外管1内部的内管2，内管2的管底开有出液口21，出液口21处一体连接固定有出液管22，同时内管2的侧壁内表面位于出液口21的上方安装有支撑板3，支撑板3的表面开有若干滤液孔，同时支撑板3的表面从下到上依次设有超滤膜4和密封压圈5，密封压圈5压紧在超滤膜4的表面，防止超滤膜4滑动，实现超滤膜4的完全密封固定，防止溶液从超滤膜4与内管2之间连接处流出，造成下层的污染，同时内管2可以在高速离心状态下，对裂解消化后不含固体颗粒的溶液进行纯化浓缩，所述纯化浓缩是指不含固体颗粒的溶液中的小分子在高速离心状态下穿透超滤膜，生物大分子DNA被超滤膜截留；所述超滤膜为孔径范围为1nm-100nm的微孔过滤膜，超滤膜的材质为纤维素、纤维素的衍生物、聚偏氟乙烯、聚砜、聚丙烯腈、聚酰胺交链的聚乙烯醇、改性丙烯酸聚合物、聚碳酸酯、聚氯乙烯、聚砜酰胺、磺化聚砜中的一种，或其它能制成孔径范围为1nm-20nm超滤膜的材质，利用孔径范围在2nm-100nm的超滤膜，在压力的推动下，对大分子与小分子进行分离，在超滤过程中，水溶液在压力的推动下，流经超滤膜的表面，小于超滤膜孔的溶剂及小分子溶质穿透超滤膜，比超滤膜大的分子被截留；内管2的顶端侧壁外表面一体连接固定有挡圈23，同时内管2的顶端侧壁外表面一体连接固定有固定圈24，固定圈24与外管1的顶端侧壁内表面压紧相接，同时挡圈23底面与内管2的顶端面相接，实现对外管1的支撑悬置。以上公开的本专利技术优选实施例只是用于帮助阐述本专利技术。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该专利技术仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本专利技术的原理和实际应用，从而使所属
技术人员能很好地理解和利用本专利技术。本专利技术仅受权利要求书及其全部范围和本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.利用选择性过滤柱对法医检样中DNA进行纯化浓缩的方法，其特征在于，具体如下：第一步，将消化裂解后的细胞液加入选择性过滤柱的内管中，同时将选择性过滤柱在3000‑14000r/min的离心机中离心1‑10min，将小分子物质过滤除去；第二步，向选择性过滤柱内加入5‑100微升水，震荡30s后，将选择性过滤柱内的水溶液转移至干净的离心管内，此时离心管的溶液即为纯化浓缩后的溶液；其中选择性过滤柱包括外管和套设在外管内部的内管，内管的管底开有出液口，出液口处一体连接固定有出液管，同时内管的侧壁内表面位于出液口的上方安装有支撑板，支撑板的表面开有若干滤液孔，同时支撑板的表面从下到上依次设有超滤膜和密封压圈，密封压圈压紧在超滤膜的表面。

【技术特征摘要】
1.利用选择性过滤柱对法医检样中DNA进行纯化浓缩的方法，其特征在于，具体如下：第一步，将消化裂解后的细胞液加入选择性过滤柱的内管中，同时将选择性过滤柱在3000-14000r/min的离心机中离心1-10min，将小分子物质过滤除去；第二步，向选择性过滤柱内加入5-100微升水，震荡30s后，将选择性过滤柱内的水溶液转移至干净的离心管内，此时离心管的溶液即为纯化浓缩后的溶液；其中选择性过滤柱包括外管和套设在外管内部的内管，内管的管底开有出液口，出液口处一体连接固定有出液管，同时内管的侧壁内表面位于出液口的上方安装有支撑板，支撑板的表面开有若干滤液孔，同时支撑板的表面从下到上依次设有超滤膜和密封压圈，密封压圈压紧在超滤膜的表面。2.根据权利要求1所述的利用选择性过滤柱对法医检样中DNA进行纯化浓缩的方...

【专利技术属性】
技术研发人员：张丹，熊槐，梁龙杰，
申请(专利权)人：山东森芃生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37