一株高山芽孢杆菌及其在防治荔枝霜疫病中的应用制造技术

本发明专利技术属于植物病害生防技术领域，公开了一株高山芽孢杆菌XJGS‑4及其在防治荔枝霜疫病中的应用。将该高山芽孢杆菌命名为高山芽孢杆菌(Bacillus altitudinis)XJGS‑4，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，简称GDMCC，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，保藏号为GDMCC No:60698，保藏时间为2019年6月17日。本发明专利技术得到的高山芽孢杆菌来源于健康荔枝果树根际土壤，长期与荔枝互惠共生，避免了其破坏植物表面微生态环境稳定性的可能；本发明专利技术的高山芽孢杆菌及基于其得到的生物制剂对荔枝霜疫霉均具有强烈的抑制作用，具有很好的开发应用前景。

A Bacillus alpina strain and its application in the control of litchi frost blight

The invention belongs to the technical field of Plant Disease Biocontrol, and discloses a Bacillus alpina xjgs \u2011 4 and its application in the prevention and control of litchi frost blight. This bacillus alpina was named as Bacillus altitudinis xjgs \u2011 4, which was deposited in Guangdong Province microbial species preservation center, referred to as gdmcc, address: Guangdong Institute of Microbiology, 5F, building 59, courtyard 100, Xianlie Middle Road, Guangzhou City, preservation No.: 60698, preservation time: June 17, 2019. The Bacillus alpina obtained by the invention comes from the rhizosphere soil of healthy litchi fruit trees, which is mutually symbiotic with litchi for a long time, avoiding the possibility of damaging the stability of the micro ecological environment on the plant surface; the Bacillus alpina and the biological preparation based on the Bacillus alpina have a strong inhibitory effect on Phytophthora frost of litchi, and have a good prospect of development and application.

【技术实现步骤摘要】
一株高山芽孢杆菌及其在防治荔枝霜疫病中的应用
本专利技术属于植物病害生防
，具体涉及一株高山芽孢杆菌XJGS-4及其在防治荔枝霜疫病中的应用。
技术介绍
荔枝(LitchichinensisSonn.)是种植在我国南方地区重要的热带及亚热带水果，其果实色香味俱佳，营养丰富，适量食用还具有药用价值，享负“中华之珍果”的盛名，是我国最具竞争力的出口水果之一。但由于荔枝成熟的季节是盛夏，采摘、运输和贮藏过程中，容易因变褐腐烂造成巨大的经济损失，而采后病害是引起腐烂的主要原因。荔枝霜疫病是采后环节中引起荔枝鲜果腐烂的主要病害。然而目前，在生产上对荔枝霜疫病的控制主要以化学防治为主。这不仅为荔枝果实的食用安全留下潜在的风险，还会促使病原微生物产生抗药性。为此，许多研究致力于开发安全高效的生物防治方法。从荔枝根际土壤中筛选拮抗微生物，能有效维持植物根际土壤的微生态环境稳定性，具有重要的现实意义。芽孢杆菌属(Bacillus)是一种广谱性的拮抗细菌，有多个芽孢杆菌亚群在植物病害生物防治中具有重要地位。杨少波等报道了多粘芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa)产生的生物活性物质能对尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)、黑曲霉(Aspergillusniger)等病原菌具有显著的拮抗作用，陈海英等筛选到一株多粘类芽孢杆菌对瓜类炭疽病菌、水稻纹枯病菌等真菌具有较好的抑菌作用。周佳暖等报道了一株高山芽孢杆菌对香蕉细菌病害及真菌病害具有强烈的抑制作用。因此芽孢杆菌作为一类重要的自然资源，已引起国内外研究者的广泛关注，具有开发生物农药的潜力。
技术实现思路
为了克服上述现有技术在防治荔枝霜疫病中的缺点与不足，开发高山芽孢杆菌的应用，本专利技术的首要目的在于提供一株以荔枝果树根际微生物为筛选对象，分离得到的对荔枝霜疫霉具有较好抑制作用的高山芽孢杆菌，命名为高山芽孢杆菌(Bacillusaltitudinis)XJGS-4，为生物防治代替化学防治提供新的资源与方向，未来可作为生物农药进行开发利用。本专利技术另一目的在于提供一种基于上述高山芽孢杆菌制备得到的生物制剂。本专利技术再一目的在于提供上述高山芽孢杆菌在防治荔枝霜疫病中的应用。本专利技术的目的通过下述方案实现：一株高山芽孢杆菌，将其命名为高山芽孢杆菌(Bacillusaltitudinis)XJGS-4，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，简称GDMCC，地址：中国广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，保藏号为GDMCCNo:60698，保藏时间为2019年6月17日。所述的高山芽孢杆菌在LB培养基上30℃培养24h，单菌落圆形乳白色，表面褶皱。一种生物制剂，基于上述的高山芽孢杆菌制备得到。所述的生物制剂由所述的高山芽孢杆菌经液体发酵制备得到，优选包括以下步骤：将高山芽孢杆菌接种至LB液体培养基中培养，即可获得生物试剂。所述LB液体培养基的pH值为7.0。所述的培养指在28-30℃，摇床震荡速率为180-220rpm条件下培养24h。本专利技术还提供上述生物制剂在防治荔枝霜疫病中的应用。本专利技术还提供上述高山芽孢杆菌在防治荔枝霜疫病中的应用。本专利技术相对于现有技术，具有如下的优点及有益效果：1、本专利技术得到的高山芽孢杆菌来源于健康荔枝果树根际土壤，长期与荔枝互惠共生，避免了其破坏植物表面微生态环境稳定性的可能；2、本专利技术的生物制剂对荔枝霜疫霉具有强烈的抑制作用，而且该生物制剂来源环保无毒性，对生态环境影响小；3、本专利技术得到的高山芽孢杆菌，培养条件要求低，具有很好的开发应用前景。附图说明图1为高山芽孢杆菌XJGS-4在LB培养基上的单菌落图。图2为荔枝霜疫霉的正常生长菌落形态。图3为高山芽孢杆菌XJGS-4对荔枝霜疫霉的抑制效果图。图4为高山芽孢杆菌XJGS-4的生物制剂对荔枝霜疫霉的抑制效果图。具体实施方式下面结合实施例和附图对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。实施例中涉及的试剂均可从商业渠道获得。实施例1：高山芽孢杆菌的分离、纯化和保藏(1)LB培养基的配制：称取胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，加水1000mL搅拌混匀，再加琼脂15g，充分加热溶解后分装至250mL三角瓶中，121℃湿热灭菌20min，保存备用。(2)高山芽孢杆菌的分离与纯化：用于分离拮抗菌的土壤样品采集于华南农业大学荔枝果园健康果树根际土壤。称取10g土壤样品，在无菌条件下将土样加入到盛有90mL无菌生理盐水(0.9％)的三角瓶中，置于28℃的180rpm摇床上振荡30min，制备得到稀释倍数为10-1的土壤稀释液，在室温下静置10min以分离沙、石、土等固体杂质。取1mL稀释倍数为10-1的土壤稀释液加入到9mL生理盐水的试管中，充分混匀，制备得到稀释倍数为10-2的土壤稀释液。以此类推，将土壤液逐级稀释至10-5。取100μL稀释液(稀释倍数分别为：10-3、10-4和10-5)涂布于步骤(1)制备得到的LB固体平板上，每个稀释倍数设置3个重复，30℃培养3d，以分离土壤中的各种细菌。挑取大小、形状、颜色、质地、表面结构等特征差异明显的细菌，用平板划线法纯化获得单菌落，待用。将纯化得到的菌株进行16S序列分析，其中一株细菌序列(如下所示)与GenBank中登录号为MN148770.1的BacillusaltitudinisstrainJ54同源性达99.71％，证实其分类命名为高山芽孢杆菌(Bacillusaltitudinis)，命名为高山芽孢杆菌(Bacillusaltitudinis)XJGS-4。序列片段如下：AGAGTTTGATCCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAGCGGACAGAAGGGAGCTTGCTCCCGGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGAGCTAATACCGGATAGTTCCTTGAACCGCATGGTTCAAGGATGAAAGACGGTTTCGGCTGTCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCAAGAGTAACTGCTTGCACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGT本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株高山芽孢杆菌，其特征在于将其命名为高山芽孢杆菌(Bacillus altitudinis)XJGS-4，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，简称GDMCC，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，保藏号为GDMCC No:60698，保藏时间为2019年6月17日。/n

【技术特征摘要】
1.一株高山芽孢杆菌，其特征在于将其命名为高山芽孢杆菌(Bacillusaltitudinis)XJGS-4，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，简称GDMCC，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，保藏号为GDMCCNo:60698，保藏时间为2019年6月17日。


2.一种生物制剂，其特征在于基于权利要求1所述的高山芽孢杆菌制备得到。


3.根据权利要求2所述的生物制剂，其特征在于由包括以下步骤的方法制备得到：将所...

【专利技术属性】
技术研发人员：习平根，黄桢辉，于戈，关天放，袁玉花，孔广辉，李敏慧，范晓宁，姜子德，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东;44