检测NUMB内吞适配蛋白表达水平的试剂的应用和试剂盒制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，涉及检测NUMB表达水平的试剂的应用和试剂盒。更具体地，涉及检测NUMB表达水平的试剂在制备用于乳腺癌辅助诊断和/或乳腺癌患者预后判断的制剂中的应用以及一种用于乳腺癌辅助诊断和/或乳腺癌患者预后判断的试剂盒。临床样本检测结果显示，乳腺癌中NUMB表达较癌旁组织显著降低；且NUMB低表达不利于乳腺癌患者总体生存。因此，检测该基因表达变化的试剂可用于乳腺癌预后或者诊断、治疗。

The application and kit of the reagent to detect the expression level of numb

The invention belongs to the field of biotechnology, and relates to the application of a reagent and a kit for detecting the expression level of numb. More specifically, it relates to the application of a reagent for detecting the expression level of numb in the preparation of a preparation for the auxiliary diagnosis of breast cancer and / or the prognosis judgment of breast cancer patients, and a kit for the auxiliary diagnosis of breast cancer and / or the prognosis judgment of breast cancer patients. The results of clinical samples showed that the expression of numb in breast cancer was significantly lower than that in adjacent tissues, and the low expression of numb was not conducive to the overall survival of breast cancer patients. Therefore, the reagent for detecting the change of the gene expression can be used for the prognosis, diagnosis and treatment of breast cancer.

【技术实现步骤摘要】
检测NUMB内吞适配蛋白表达水平的试剂的应用和试剂盒
本专利技术属于生物
，更具体地，涉及检测NUMB内吞适配蛋白(NUMB)表达水平的试剂在制备用于乳腺癌辅助诊断和/或乳腺癌患者预后判断的制剂中的应用以及一种用于乳腺癌辅助诊断和/或乳腺癌患者预后判断的试剂盒。
技术介绍
乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，根据2012流行病学统计，全球每年新诊断多达170万乳腺癌患者，大约522000人死于乳腺癌，在发达国家成为仅次于肺癌的重要死亡因素。乳腺癌占所有女性肿瘤的25％，所有肿瘤相关死亡的15％。在中国，2013年新发乳腺癌病例278800人，按中国人群标准发病率为42.02/100000人，估计死亡人数为64600人，死亡率为9.74/100000人。在我国随着社会经济因素的改变，乳腺癌发病率和死亡率都在不断增加。随着对乳腺癌发生发展的生物学机制的理解，肿瘤靶向治疗和内分泌治疗等在乳腺癌治疗中起到了重要作用。随着分子分型和精准医学的发展，探索和发现新的乳腺癌关键靶基因，对于乳腺癌个体化诊断和治疗具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种新的乳腺癌预后标志物NUMB内吞适配蛋白(NUMB)，由此进一步提供检测NUMB表达水平的试剂在制备用于乳腺癌辅助诊断和/或乳腺癌患者预后判断的制剂中的应用以及一种用于乳腺癌辅助诊断和/或乳腺癌患者预后判断的试剂盒。NUMB是一种蛋白编码基因，定位于14q24.2-q24.3，包含14个外显子，GeneID:8650，其编码蛋白质定位于细胞膜、细胞核和细胞质。目前，有关NUMB基因在乳腺癌发生发展中的作用未见报道。本专利技术的专利技术人通过癌症和肿瘤基因图谱(CancerGenomeAtlas，TCGA)高通量数据挖掘发现NUMB低表达不利于乳腺癌患者预后，并通过收集临床乳腺癌患者样本和随访信息，进一步验证NUMB表达差异对乳腺癌患者的预后作用。为了实现上述目的，本专利技术的第一方面提供检测NUMB内吞适配蛋白(NUMB)表达水平的试剂在制备用于乳腺癌辅助诊断和/或乳腺癌患者预后判断的制剂中的应用。进一步地，所述检测NUMB表达水平包括检测NUMB的基因表达水平和/或检测NUMB的蛋白表达水平。更具体地，所述检测NUMB表达水平的方法包括：通过RT-qPCR方法检测乳腺癌和癌旁组织中NUMB的表达量；通过分子探针技术检测乳腺癌和癌旁组织中NUMBmRNA表达量；通过免疫组化或Western-Blot检测乳腺癌和癌旁组织中NUMB蛋白表达量。更具体地，所述检测NUMB表达水平的试剂为靶向NUMB编码DNA序列的寡核酸探针、PCR引物，或者为靶向NUMB的抗体。根据本专利技术，优选地，所述检测NUMB表达水平的试剂为具有SEQIDNO：1和SEQIDNO：2所示核苷酸序列的实时荧光定量PCR特异性引物。5’-AGGTTGAGCCATGCAGTAGG-3’，SEQIDNO：15’-GCTTGTTCAGTGGCTGTTGT-3’，SEQIDNO：2本专利技术的第二方面提供一种用于乳腺癌辅助诊断和/或乳腺癌患者预后判断的试剂盒，该试剂盒包括：检测NUMB表达水平的试剂。进一步地，所述检测NUMB表达水平的试剂为靶向NUMB编码DNA序列的寡核酸探针、PCR引物，或者为靶向NUMB的抗体。具体地，所述检测NUMB表达水平的试剂为具有SEQIDNO：1和SEQIDNO：2所示核苷酸序列的实时荧光定量PCR特异性引物。根据本专利技术，所述试剂盒还可以含有其他常规的用于实时荧光定量的试剂，优选地，所述试剂盒还包括以下组分中的至少一种：Trizol、异丙醇、氯仿、无水乙醇、无RNA酶水、随机引物、5×M-MLV缓冲液、dNTPs、RNA酶抑制剂、M-MLV逆转录酶、具有SEQIDNO：3和SEQIDNO：4所示核苷酸序列的ACTB实时荧光定量PCR特异性引物。5’-GGCACCCAGCACAATGAAGA-3’，SEQIDNO：35’-ACTCCTGCTTGCTGATCCAC-3’，SEQIDNO：4临床样本检测结果显示，乳腺癌中NUMB表达较癌旁组织显著降低(P<0.001)；且NUMB低表达不利于乳腺癌患者总体生存(P＝0.018)。因此，检测该基因表达变化的试剂可用于乳腺癌预后或者诊断、治疗。本专利技术的其它特征和优点将在随后具体实施方式部分予以详细说明。附图说明通过结合附图对本专利技术示例性实施方式进行更详细的描述，本专利技术的上述以及其它目的、特征和优势将变得更加明显。图1示出了TCGA高通量数据分析乳腺癌中NUMB的表达。乳腺癌组织中NUMB表达显著低于正常组织(P<0.001)。图2示出了TCGA高通量数据分析NUMB低表达对乳腺癌患者生存的影响。NUMB低表达不利于乳腺癌患者总体生存(P＝0.00435)。图3示出了乳腺癌组织中NUMB的表达。乳腺癌组织中NUMB表达显著低于癌旁组织(P＝0.0037)。图4示出了乳腺癌组织中NUMB低表达对乳腺癌患者生存的影响。NUMB低表达不利于乳腺癌患者总体生存(P＝0.018)。具体实施方式下面将更详细地描述本专利技术的优选实施方式。虽然以下描述了本专利技术的优选实施方式，然而应该理解，可以以各种形式实现本专利技术而不应被这里阐述的实施方式所限制。实施例中未注明具体条件者，皆按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。实施例1本实施例用于说明TCGA高通量数据分析乳腺癌中NUMB的表达变化。1.TCGA高通量数据分析过程：登录TCGA门户网站UALCAN(http://ualcan.path.uab.edu/index.html)首页，点击“Analysis”，输入基因名称“NUMB”，选择TCGAdataset“Breastinvasivecarcinoma”，检索，点击“Expression”，记录结果。利用GraphPad12.0软件作图，统计方法为T检验，P＜0.05为差异有统计学意义。2.结果：乳腺癌组织中NUMB的表达较正常组织显著降低(P<0.001)，如图1所示。实施例2本实施例用于说明TCGA高通量数据分析NUMB低表达与乳腺癌预后关系。1.TCGA高通量数据分析过程：登录TCGA门户网站cBioPortal(http://www.cbioportal.org/)，选择肿瘤数据集“BreastInvasiveCarcinoma(TCGAProvisional)”，组学数据选择“mRNAExpressionz-Scores(RNASeqV2RSEM)”，基因输入“NUMB：EXP<＝-2”，检索，弹出页面中点击“Survival”，记录结果。Kaplan-Meier法绘制生存曲线，log-rank检验生存曲线差异，P＜0.05为差异有统计学意义。2.结果：NUMB低表达不利于乳腺癌患者总体生存(P＝0.00435)(图2)。实施例3本实施例用于说明制备检测NUMB表达量的试剂用于制备乳腺癌患者预后的试剂盒(50次反应)。1.Trizol50.0ml；2.异丙醇50.0ml；3.氯仿50.0ml；4.无水乙醇50.0ml；5.无RNA酶水5.0ml6.1.0μM随机引本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测NUMB内吞适配蛋白(NUMB)表达水平的试剂在制备用于乳腺癌辅助诊断和/或乳腺癌患者预后判断的制剂中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测NUMB内吞适配蛋白(NUMB)表达水平的试剂在制备用于乳腺癌辅助诊断和/或乳腺癌患者预后判断的制剂中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其中，所述检测NUMB表达水平包括检测NUMB的基因表达水平和/或检测NUMB的蛋白表达水平。3.根据权利要求1所述的应用，其中，所述检测NUMB表达水平的方法包括：通过RT-qPCR方法检测乳腺癌和癌旁组织中NUMB的表达量；通过分子探针技术检测乳腺癌和癌旁组织中NUMBmRNA表达量；通过免疫组化或Western-Blot检测乳腺癌和癌旁组织中NUMB蛋白表达量。4.根据权利要求1所述的应用，其中，所述检测NUMB表达水平的试剂为靶向NUMB编码DNA序列的寡核酸探针、PCR引物，或者为靶向NUMB的抗体。5.根据权利要求4所述的应用，其中，所述检测NUMB表达水平的试剂为具有SEQIDNO：1和SEQID...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏伟，赵小芳，郝玲，胡明，李春明，
申请(专利权)人：江苏医药职业学院，
类型：发明
国别省市：江苏,32