用于检测尿路感染的引物组和包含该引物组的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种用于检测尿路感染常见病原菌的引物组，包含5组SEQ ID NO.1‑SEQ ID NO.10的引物组。本发明专利技术还公开了一种用于检测尿路感染的试剂盒。本发明专利技术所述的引物组中部分碱基经过修饰，避免引物形成二聚体，提高了反应效率，增强了扩增的特异性。本发明专利技术所述的引物组用于尿路感染的试剂盒中，能够快速、灵敏、特异性地检测样品中尿路感染细菌。

A primer group for detecting urinary tract infections and a kit containing the primer group

【技术实现步骤摘要】
用于检测尿路感染的引物组和包含该引物组的试剂盒
本专利技术涉及生物
，具体涉及一组用于检测尿路感染的引物以及包含该引物组的试剂盒
技术介绍
尿路感染又称泌尿系统感染，是尿路上皮对细菌侵入导致的炎症反应。尿路感染95％以上是由单一细菌引起的。其中50％左右的病人，其病原菌是大肠埃希杆菌。除大肠埃希菌外，肠球菌，绿脓假单胞菌，奇异变形杆菌，克雷伯杆菌等细菌常见于再感染、留置导尿管、有并发症之尿路感染者。临床研究数据表明超过95％的尿路感染是由大肠杆菌，肠球菌，肺炎克雷伯菌，铜绿假单胞菌和奇异变形杆菌引起。目前临床上检测尿路感染细菌常用的方法有细菌培养法。细菌培养法是检测尿路感染细菌的金标准。但该方法对场地要求高，需要专业技术人员无菌操作。而且该方法检测成本高，耗时长。通常需要3-5天才能看到最终的检测结果。尿路感染微生物的临床诊断和鉴定，急需简单，快速，成本低的检测方法。等温扩增可以快速扩增核酸序列，而且不需要精密控温的仪器，在快速检测领域有很大的潜力。等温扩增不需要高温解链，其反应速度和特异性高度依赖于引物的设计与实验筛选。一般增加引物序列的长度可以加快反应速度，但同时增长的引物容易自身结合产生二聚体，降低了特异性与灵敏性，限制了等温扩增技术的应用。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术的专利技术目的在于提供一组用于检测尿路感染常见病原菌的引物，经过修饰的RPA引物用于特异性地快速检测尿路感染细菌的5种最常见的细菌。本专利技术的另一目的在于提供一种用于检测尿路感染的试剂盒，该试剂盒包含经过修饰的RPA引物组，克服了尿路感染细菌当前临床检测的诸多问题，为尿路感染的诊断和精准治疗提供新的检测装置。为了实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案内容具体如下：用于检测尿路感染的引物组，包含引物组1：上游引物：ATTTCATAACCCCCTGTTTATTGTGTTA*A*T*G*G(SEQIDNO.1)下游引物：ATTTTGTTAAACTCAAACGTGATAATGA*G*A*A*T(SEQIDNO.2)引物组2：上游引物：AACTCTCTACGTCGTATTTTATTGTCTTC*T*T*T*A(SEQIDNO.3)下游引物：AAGGGTTTTCTCTTCTTCAGCATATAATT*T*C*A*A(SEQIDNO.4)引物组3：上游引物：ACACTTTTCTCAATAACACCGAGCAGGAG*G*T*T*C(SEQIDNO.5)下游引物：TAAAAAGGGGCGCTACTATAGCACAAAGAT*A*A*A*C(SEQIDNO.6)引物组4：上游引物：TATTCCTAAATATAGTCAAGTTTCTTGTG*A*T*G*T(SEQIDNO.7)下游引物：ATTAAAACGAAAAATATTAAGAATATCGA*C*C*C*C(SEQIDNO.8)引物组5：上游引物：CCTGTTGTTCGTTGCGATCATGGGTG*T*T*T*C(SEQIDNO.9)下游引物：CCAGTTCCACTTTGTCATTCTCGGTC*T*T*G*C(SEQIDNO.10)其中，A*：2-氨基嘌呤核苷；T*：2-硫胸腺嘧啶；C*：N-乙基胞嘧啶；G*：次黄嘌呤。作为进一步的方案，本专利技术所述的引物组中，A*，T*，G*，C*可以与对应T，A，C，G形成稳定的氢键，从而根据沃森-克里克原则进行配对。但是A*，T*，G*，C*与T*，A*，C*，G*不能形成稳定的氢键，无法根据沃森-克里克原则进行配对。因此会表现出：A*可以与T配对，但是A*不能与T*配对；T*可以与A配对，但是T*不能与A*配对；G*可以与C配对，但是G*不能与C*配对；C*可以与G配对，但是C*不能与G*配对。一种用于检测尿路感染的试剂盒，该试剂盒包括反应液、反应酶系和引物组，所述引物组为引物组1，上游引物：ATTTCATAACCCCCTGTTTATTGTGTTA*A*T*G*G(SEQIDNO.1)，下游引物：ATTTTGTTAAACTCAAACGTGATAATGA*G*A*A*T(SEQIDNO.2)；引物组2，上游引物：AACTCTCTACGTCGTATTTTATTGTCTTC*T*T*T*A(SEQIDNO.3)，下游引物：AAGGGTTTTCTCTTCTTCAGCATATAATT*T*C*A*A(SEQIDNO.4)；引物组3：上游引物：ACACTTTTCTCAATAACACCGAGCAGGAG*G*T*T*C(SEQIDNO.5)，下游引物：TAAAAAGGGGCGCTACTATAGCACAAAGAT*A*A*A*C(SEQIDNO.6)；引物组4：上游引物：TATTCCTAAATATAGTCAAGTTTCTTGTG*A*T*G*T(SEQIDNO.7)，下游引物：ATTAAAACGAAAAATATTAAGAATATCGA*C*C*C*C(SEQIDNO.8)；引物组5：上游引物：CCTGTTGTTCGTTGCGATCATGGGTG*T*T*T*C(SEQIDNO.9)，下游引物：CCAGTTCCACTTTGTCATTCTCGGTC*T*T*G*C(SEQIDNO.10)；其中，A*：2-氨基嘌呤核苷；T*：2-硫胸腺嘧啶；C*：N-乙基胞嘧啶；G*：次黄嘌呤。作为进一步优选的方案，本专利技术所述的反应液包含Tris-HCl、KCl、二硫苏糖醇、甜菜碱、海藻糖、PEG、BSA。作为进一步优选的方案，本专利技术所述的Tris-HCl的pH为7～9作为进一步优选的方案，本专利技术所述的反应酶系包含dNTPs、聚合酶Bsu、蛋白因子、重组酶。作为进一步优选的方案，本专利技术所述的蛋白因子为蛋白RecF、RecO、RecR，单链DNA结合蛋白SSB中的一种或多种。作为进一步优选的方案，本专利技术所述的重组酶为细菌重组酶RecA、古生菌重组酶RadA、噬菌体重组酶UvsX或者真核生物重组酶Rad51中的一种或多种。作为进一步优选的方案，本专利技术所述的试剂盒还包括启动液，所述启动液为氯化镁。作为进一步优选的方案，本专利技术所述的氯化镁的浓度为5mM～20mM。与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：1.本专利技术所述的引物组中部分碱基经过修饰，避免引物形成二聚体，提高了反应效率，增强了扩增的特异性。2.本专利技术所述的引物组用于尿路感染的试剂盒中，能够快速、灵敏、特异性地检测样品中尿路感染细菌。上述说明仅是本专利技术技术方案的概述，为了能够更清楚了解本专利技术的技术手段，而可依照说明书的内容予以实施，并且为了让本专利技术的上述和其他目的、特征和优点能够更明显易懂，以下特举较佳实施例，并配合附图，详细说明如下。附图说明图1为未经修饰的引物组与修饰后的引物组扩增结果对比结果图，其中A组表示利用未经修饰的引物组进行等温扩增反应，产生引物二聚体，降低了扩增反应的特异性与敏感性；A组中a：DNAladder，b：大肠杆菌，chuA基因(AF280396)，c：肠球菌，rpoA基因，NC_004668，d：肺炎克雷伯菌，khe基因，AF293352，e：奇异变形杆ureR基因，Z18752，f：铜绿假单胞菌，lasB基因，JN118955；B组表示采用本专利技术经过修饰其中4个碱基后的引物序列；B组中g：大肠杆本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于检测尿路感染的引物组，其特征在于，包含引物组1，上游引物：ATTTCATAACCCCCTGTTTATTGTGTTA*A*T*G*G，下游引物：ATTTTGTTAAACTCAAACGTGATAATGA*G*A*A*T；引物组2，上游引物：AACTCTCTACGTCGTATTTTATTGTCTTC*T*T*T*A，下游引物：AAGGGTTTTCTCTTCTTCAGCATATAATT*T*C*A*A；引物组3，上游引物：ACACTTTTCTCAATAACACCGAGCAGGAG*G*T*T*C，下游引物：TAAAAAGGGGCGCTACTATAGCACAAAGAT*A*A*A*C；引物组4：上游引物：TATTCCTAAATATAGTCAAGTTTCTTGTG*A*T*G*T，下游引物：ATTAAAACGAAAAATATTAAGAATATCGA*C*C*C*C；引物组5：上游引物：CCTGTTGTTCGTTGCGATCATGGGTG*T*T*T*C，下游引物：CCAGTTCCACTTTGTCATTCTCGGTC*T*T*G*C；其中，A*：2‑氨基嘌呤核苷；T*：2‑硫胸腺嘧啶；C*：N‑乙基胞嘧啶；G*：次黄嘌呤。...

【技术特征摘要】
1.用于检测尿路感染的引物组，其特征在于，包含引物组1，上游引物：ATTTCATAACCCCCTGTTTATTGTGTTA*A*T*G*G，下游引物：ATTTTGTTAAACTCAAACGTGATAATGA*G*A*A*T；引物组2，上游引物：AACTCTCTACGTCGTATTTTATTGTCTTC*T*T*T*A，下游引物：AAGGGTTTTCTCTTCTTCAGCATATAATT*T*C*A*A；引物组3，上游引物：ACACTTTTCTCAATAACACCGAGCAGGAG*G*T*T*C，下游引物：TAAAAAGGGGCGCTACTATAGCACAAAGAT*A*A*A*C；引物组4：上游引物：TATTCCTAAATATAGTCAAGTTTCTTGTG*A*T*G*T，下游引物：ATTAAAACGAAAAATATTAAGAATATCGA*C*C*C*C；引物组5：上游引物：CCTGTTGTTCGTTGCGATCATGGGTG*T*T*T*C，下游引物：CCAGTTCCACTTTGTCATTCTCGGTC*T*T*G*C；其中，A*：2-氨基嘌呤核苷；T*：2-硫胸腺嘧啶；C*：N-乙基胞嘧啶；G*：次黄嘌呤。2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，A*可以与T配对，但是A*不能与T*配对；T*可以与A配对，但是T*不能与A*配对；G*可以与C配对，但是G*不能与C*配对；C*可以与G配对，但是C*不能与G*配对。3.一种用于检测尿路感染的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括反应液、反应酶系和引物组，所述引物组为引物组1，上游引物：ATTTCATAACCCCCTGTTTATTGTGTTA*A*T*G*G，下游引物：ATTTTGTTAAACTCAAACGTGATAATGA*G*A*A*T；引物组2，上游引物：AACTCT...

【专利技术属性】
技术研发人员：李腾，吴永辉，李达，
申请(专利权)人：深圳易致生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44