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新大肠杆菌表达系统技术方案

技术编号:22129623 阅读:65 留言:0更新日期:2019-09-18 06:02
本发明专利技术公开了新大肠杆菌表达系统,属于基因工程领域。本发明专利技术以大肠杆菌为载体,建立了大肠杆菌LPXA缺失突变株,并通过在缺失突变株中引入含SEQ ID NO.1所示lpxA的质粒。应用本发明专利技术的表达系统表达目的基因,无需抗生素标签。将本发明专利技术的表达系统用于L‑苏氨酸的发酵生产,能够在不影响大肠杆菌的细胞生长的同时,提高L‑苏氨酸的产量。

New expression system of Escherichia coli

【技术实现步骤摘要】
新大肠杆菌表达系统
本专利技术涉及新大肠杆菌表达系统,属于基因工程领域。
技术介绍
在大肠杆菌中为了选择和维持重组质粒,常用抗生素抗性基因作为标记物。然而,抗生素耐药基因的水平转移可导致多药耐药生物的出现。因此,几种维持质粒而不添加抗生素的方法被开发出来。第一种是FabV-三氯生系统,其中三氯生用于维持质粒,但有研究表明它可能有助于细菌耐药性的增加。第二种是基于毒素/抗毒素的系统,该系统中的质粒由毒素和抗毒素之间的平衡维持,这些毒素和抗毒素分别在基因组和质粒中表达;但是,该系统在长时间细胞培养过程中无效。第三种是避免添加抗生素的方法是从染色体中去除一个必需的基因,并将其包含在质粒中。例如,大肠杆菌中的必需基因glyA已从染色体上移除并插入到表达载体中,但在含甘氨酸的培养基中生长时,表达载体可能丢失。必需基因tpiA编码磷酸三糖异构酶,对Embden-Meyerhof-Parnas途径的关键步骤进行催化。有研究将基因tpiA已从染色体上移除并插入到表达载体中,但tpiA的高表达可能影响细胞内代谢。大肠杆菌中必需基因dapD的启动子已被lac启动子取代,因此,它与含有lacO位点的质粒共本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种大肠杆菌表达系统,其特征在于,含有缺失lpxA的大肠杆菌及携带SEQ ID NO.1所示基因的质粒。

【技术特征摘要】
1.一种大肠杆菌表达系统,其特征在于,含有缺失lpxA的大肠杆菌及携带SEQIDNO.1所示基因的质粒。2.一种表达载体,其特征在于,携带SEQIDNO.1所示基因。3.权利要求1所述的大肠杆菌表达系统或权利要求2所述的表达载体在表达目的基因方面的应用。4.一种表达目的基因的方法,其特征在于,应用权利要求1所述的大肠杆菌表达系统,是将目的基因与所述质粒连接,并在所述缺失lpxA的大肠杆菌中表达。5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述表达载体为pRSFCmlpxA。6.根据权利要求4所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员:王小元赵磊胡晓清
申请(专利权)人:江南大学
类型:发明
国别省市:江苏,32

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