菌株、其构建方法及应用技术

本发明专利技术涉及微生物基因工程领域，特别涉及菌株、其构建方法及应用。本发明专利技术以Xanthomonas campestris为出发菌株，利用基因工程技术失活了菌黄素合成途径的关键基因pigA，并导入了血红蛋白vgb基因，构建了一株黄原胶白色突变株(该菌株已委托中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心进行保藏，保藏号为CGMCC No.14771)，能够产生白色黄原胶，其合成的黄原胶基本不含菌黄素，可减少未知突变对菌株造成的副作用，大量减少乙醇的使用量，节约资源及生产成本，具有广泛的工业应用价值。

Strains, Construction Method and Application

【技术实现步骤摘要】
菌株、其构建方法及应用
本专利技术涉及微生物基因工程领域，特别涉及菌株、其构建方法及应用。
技术介绍
黄原胶(Xanthan)是由黄单胞菌属(Xanthomonas)产生的一种水溶性多糖高聚物，是国际上集增稠、悬浮、乳化、稳定于一体，性能最优越的生物胶，已广泛应用于食品、石油、地矿、医药、环境保护等行业。我国是黄原胶的主要产区，近几年全球对黄原胶的需求逐年上涨，我国黄原胶产量也一直呈现增长趋势。黄原胶的的全球销量从2011年的8.4万吨，上升到2015年的18.2万吨。食品加工和石油钻井、开采仍然会是国内外最主要的黄原胶消费领域。黄原胶无味、无毒、食用安全，性质优良，被广泛的应用于食品领域，黄原胶在食品加工上应用时需要一定的白度。黄原胶合成的同时伴有菌黄素(Xanthomonadins)的产生，菌黄素是一种不溶于水的黄色素，附着于细胞膜外膜上，使菌落和产生的黄原胶呈黄色。工业生产上使用乙醇从发酵液中提黄原胶，菌黄素易溶于有机溶剂，但要达到食品行业应用的标准需要用大量乙醇对黄原胶进行脱色。另外一种解决黄原胶色素问题的方法是对野油菜黄单胞菌进行诱变，筛选无色黄原胶产生突变株。但是传统诱变本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.野油菜黄单胞菌，其特征在于，敲除了pigA基因并具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：Ⅰ、具有SEQ ID NO:15所示的核苷酸序列；Ⅱ、具有SEQ ID NO:15所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；III、与SEQ ID NO:15所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；IV、如Ⅰ、Ⅱ或III所示序列的互补序列。

【技术特征摘要】
1.野油菜黄单胞菌，其特征在于，敲除了pigA基因并具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：Ⅰ、具有SEQIDNO:15所示的核苷酸序列；Ⅱ、具有SEQIDNO:15所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；III、与SEQIDNO:15所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；IV、如Ⅰ、Ⅱ或III所示序列的互补序列。2.野油菜黄单胞菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：扩增获得pigA上下游同源臂基因，通过overlapPCR将pigA基因的上下游同源臂连接，以自杀质粒pLO3为骨架，向质粒上的多克隆位点插入pigA基因的上下游同源臂片段，构建获得菌黄素合成关键基因pigA基因的敲除质粒pLO3-pigA；步骤2：将敲除质粒pLO3-pigA转化至E.coliS17菌株，获得转化子，得到重组菌株E.coliS17/pLO3-pigA；步骤3：将所述重组菌株E.coliS17/pLO3-pigA接合转移至野生型野油菜黄单胞菌，Cmr、tetr双抗平板筛选单交换菌株，蔗糖致死筛选获得缺失pigA基因的双交换菌株△pigA。3.根据权利要求2所述的构建方法获得的野油菜黄单胞菌。4.野油菜黄单胞菌，其特征在于，在如权利要求1或3所述的野油菜黄单胞菌中添加vgb基因，并具有如下所示的核苷酸序列中的任意一项：Ⅰ、具有SEQIDNO:16所示的核苷酸序列；Ⅱ、具有SEQIDNO:16所示的核苷酸序列经修饰、取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；III、与SEQIDNO:16所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；IV、如Ⅰ、Ⅱ或III所示序列的互补序列。5.野油菜黄单胞菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：扩增...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡炎华，马挺，戴晓慧，黄金鑫，常利斌，李岩，
申请(专利权)人：廊坊梅花生物技术开发有限公司，
类型：发明
国别省市：河北,13