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一种基因工程菌湿细胞的收集与保存方法技术

技术编号:22097270 阅读:42 留言:0更新日期:2019-09-14 01:53
本发明专利技术公开了一种基因工程菌湿细胞的收集与保存方法,属于生物工程技术领域。利用本发明专利技术的方法对共表达苏氨酸脱氨酶、甲酸脱氢酶和亮氨酸脱氢酶的大肠杆菌进行湿细胞收集与保存,湿菌体保存2个月后,利用解冻后湿细胞转化生产L‑2‑氨基丁酸,底物L‑苏氨酸转化率达到96.8%,三种酶的相对于新鲜湿细胞的酶活均能达到90.0%以上。

A Method for Collecting and Preserving Wet Cells of Genetically Engineered Bacteria

【技术实现步骤摘要】
一种基因工程菌湿细胞的收集与保存方法
本专利技术涉及一种基因工程菌湿细胞的收集与保存方法,属于生物工程

技术介绍
L-2-氨基丁酸(L-ABA)是一种非天然氨基酸,作为一种重要的化工原材料和手性医药中间体,目前已广泛应用于抑菌抗结核药物盐酸乙胺丁醇、新型抗癫痫药物左乙拉西坦和布瓦西坦等药物合成领域。目前,已被报道的L-ABA的合成方法包括化学法和生物法。化学法主要包括酮丁酸还原法、脱硫反应法等,化学法易形成消旋体,不利于手性化合物的合成,并且反应条件严苛,试剂成本高,环境污染严重,不易进行工业化生产。生物法因其反应条件温和、立体选择性高和绿色环保等特点受到广泛的关注。酶法主要利用苏氨酸脱氨酶(L-TD)、亮氨酸脱氢酶(LDH),偶联甲酸脱氢酶(FDH)或葡萄糖脱氢酶(GDH),以L-苏氨酸为底物合成L-ABA,同时FDH或GDH实现辅酶NADH的循环。国外较早开展了利用氨基酸脱氢酶转化生产L-ABA的工作。1997年Galkin等以2-酮丁酸为底物,通过偶联T.intermedius来源的亮氨酸脱氢酶(LDH)和NADH循环再用酶甲酸脱氢酶(FDH),最终获得36g/L的L本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基因工程菌株湿细胞的收集与保存方法,其特征在于,将基因工程菌株的发酵液降温至4~15℃,加入50~100mmol/L半胱氨酸和/或5~20μmol/L辅酶磷酸吡哆醛,混匀后6000~8000rpm离心5~10min获得湿细胞;所述基因工程菌株以大肠杆菌为宿主,共表达苏氨酸脱氨酶、甲酸脱氢酶和亮氨酸脱氢酶。

【技术特征摘要】
1.一种基因工程菌株湿细胞的收集与保存方法,其特征在于,将基因工程菌株的发酵液降温至4~15℃,加入50~100mmol/L半胱氨酸和/或5~20μmol/L辅酶磷酸吡哆醛,混匀后6000~8000rpm离心5~10min获得湿细胞;所述基因工程菌株以大肠杆菌为宿主,共表达苏氨酸脱氨酶、甲酸脱氢酶和亮氨酸脱氢酶。2.如权利要求1所述的收集与保存方法,其特征在于,离心温度为4~15℃。3.如权利要求1所述的收集与保存方法,其特征在于,收集的湿细胞菌泥的含水量为75%~80%。4.如权利要求1所述的收集与保存方法,其特征在于,将工程菌株置于-10~-20℃冷冻保存。5.如权利要求1所述的收集与保存方法,其特征在于,所述苏氨酸脱氨酶的氨基酸序列如SEQIDNO.4所示,所述亮氨酸脱氢酶的氨基酸序列如SEQIDNO.5所示,所述甲酸脱氢酶的氨基酸序列如SEQIDNO.6所示。6.如权利要求1所述的收集与保存方法,其特征在于,所述基因工...

【专利技术属性】
技术研发人员:张君轩付妍付雪蓉解雨晨任泓宇刘立明刘佳陈修来
申请(专利权)人:江南大学
类型:发明
国别省市:江苏,32

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