新的对抗寨卡病毒的疫苗和用于对抗寨卡病毒的DNA抗体构建体的组合制造技术

本文公开了包含编码针对寨卡病毒抗原的抗体及其功能片段的重组核酸序列的组合物。本发明专利技术还涉及包含第一组合物和第二组合物的组合的组合物，所述第一组合物引发哺乳动物的对抗寨卡病毒的免疫应答，所述第二组合物包含编码抗体、其片段、其变体或其组合的重组核酸序列。在一些情况下，所述核酸分子包含编码抗ZIKV‑包膜(抗ZIKV E)蛋白抗体的核苷酸序列。

Combination of a new vaccine against Zhaika virus and a DNA antibody construct against Zhaika virus

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新的对抗寨卡病毒的疫苗和用于对抗寨卡病毒的DNA抗体构建体的组合相关申请的交叉引用本申请享有于2016年9月19日提交的第62/396,750号美国临时申请和2016年11月3日提交的第62/417,093号美国临时申请的优先权，上述每个临时申请均通过引用整体并入本文。
本专利技术涉及编码寨卡(Zika)病毒抗原的抗体及其功能片段的重组核酸序列。本专利技术还涉及寨卡疫苗与组合物的组合，所述组合物包含用于在体内产生一种或多种合成抗体及其功能片段的重组核酸序列。本专利技术的组合物提供了用于诱导免疫应答，以及用于预防性和/或治疗性地使个体对寨卡病毒免疫的改进方法。
技术介绍
寨卡病(Zikadisease)是由寨卡病毒感染引起的，可以通过被感染的蚊子叮咬传播给人类或在人类之间进行性传播。寨卡病毒感染与严重的出生缺陷有关。目前，批准了治疗性抗体用于治疗多种疾病。不幸的是，纯化抗体的制造和运输成本过高。此外，抗体疗法必须每周至每月重新施用-这是确保有效治疗以预防或降低患者发展寨卡病的风险的一个具有挑战性的因素。因此，本领域需要预防和/或治疗寨卡感染的改进疗法。本专利技术满足这种需求。
技术实现思路
本专利技术的一个方面提供了一种组合物，其包含编码寨卡病毒抗原的抗体及其功能片段的重组核酸序列。本专利技术的一个方面提供了在哺乳动物中引发针对寨卡病毒的免疫应答的组合物与包含编码抗体、其片段、其变体或其组合的重组核酸序列的组合物的组合。可以将所述组合物施用给有需要的受试者以促进合成抗体的体内表达和形成。在一个实施方案中，所述核酸分子包含编码抗ZIKV-包膜(抗ZIKVE)蛋白抗体的核苷酸序列。本专利技术的一个方面提供了能够表达在哺乳动物中引发针对寨卡病毒的免疫应答的多肽的核酸构建体。所述核酸构建体由编码核苷酸序列和与编码核苷酸序列可操作连接的启动子组成。所述编码核苷酸序列表达多肽，其中所述多肽包括共有寨卡抗原，包括前体膜-包膜(prM+Env或prME)。所述启动子调节哺乳动物中所述多肽的表达。本专利技术的另一方面提供了能够在哺乳动物中产生针对寨卡病毒的免疫应答的核酸分子。在一个实施方案中，所述核酸分子包含能够在哺乳动物中表达共有寨卡抗原的核酸序列和药学上可接受的赋形剂。在一个实施方案中，所述核酸分子包含与编码共有寨卡抗原的编码序列可操作地连接的启动子。在一个实施方案中，共有寨卡抗原由共有prME组成。本专利技术的另一方面提供了在哺乳动物中引发针对寨卡病毒的免疫应答的方法，其包括向哺乳动物的组织递送核酸分子，所述核酸分子包含能够在哺乳动物细胞中表达寨卡病毒的共有抗原以在哺乳动物中引发免疫应答的核酸序列，并且对所述组织的细胞进行电穿孔以允许所述核酸分子进入细胞内。本专利技术涉及编码一种或多种合成抗体的核酸分子，其中所述核酸分子包含选自下组的至少一种：a)编码抗ZIKV包膜(E)蛋白合成抗体的核苷酸序列；和b)编码抗ZIKV包膜(E)合成抗体的片段的核苷酸序列。在一个实施方案中，所述核酸分子包含编码切割结构域的核苷酸序列。在一个实施方案中，核酸分子包含编码抗ZIKVE抗体的可变重链区和可变轻链区中的一个或多个的核苷酸序列。在一个实施方案中，所述核酸分子包含编码与SEQIDNO:1,SEQIDNO:2,SEQIDNO:3,SEQIDNO:4,SEQIDNO:5,SEQIDNO:6,SEQIDNO:7,SEQIDNO:8,SEQIDNO:9,SEQIDNO:10,SEQIDNO:11,SEQIDNO:12,SEQIDNO:13,SEQIDNO:14,SEQIDNO:15,SEQIDNO:16,SEQIDNO:17,SEQIDNO:18,SEQIDNO:21和SEQIDNO:22中的一个或多个至少90％同源的一个或多个序列的核苷酸序列。在一个实施方案中，所述核酸分子包含编码抗ZIKVE抗体的可变重链区和可变轻链区的核苷酸序列。在一个实施方案中，所述核酸分子包含编码与SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:21和SEQIDNO:22中的一个或多个至少90％同源的一个或多个序列的核苷酸序列。在一个实施方案中，所述核酸分子包含编码多肽的核苷酸序列，所述多肽包含：可变重链区；IRES元件；和可变轻链区。在一个实施方案中，所述IRES元件是病毒IRES或真核IRES之一。在一个实施方案中，所述核酸分子包含：a)在核酸序列的整个长度上与编码选自下组的序列的核酸序列具有至少约95％同一性的核苷酸序列：SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:21和SEQIDNO:22；在一个实施方案中，所述核苷酸序列编码前导序列。在一个实施方案中，所述核酸分子包含表达载体。本专利技术还提供了包含本文所述的任何核酸分子的组合物。在一个实施方案中，所述组合物包含药学上可接受的赋形剂。本专利技术还涉及预防或治疗受试者的疾病的方法，所述方法包括向受试者施用本文所述的核酸分子或组合物。在一个实施方案中，所述疾病是寨卡病毒感染。在一个实施方案中，所述方法还包括向受试者施用抗生素药剂。在一个实施方案中，在施用所述核酸分子或组合物后不到10天施用抗生素。在一个实施方案中，所述方法还包括向受试者施用抗生素药剂。在一个实施方案中，在施用所述核酸分子或组合物后不到10天施用抗生素。附图说明图1描绘了ZIKV-E蛋白的结构。图2描绘了寨卡dMAB开发和表征的工作流程。图3描绘了ZIKV-Env特异性单克隆抗体的结合ELISA。图4描绘了ZVEnv和ZVmAB的蛋白质印迹(westernblot)。装载2μg的rZV包膜蛋白；对ZV单克隆抗体使用1:250稀释。图5描绘了ZIKAmAbVH和VL比对。图6描绘了ZIKAmAbVH和VL比对以及同一性和RMSD矩阵。图7描绘了mAb模型叠加。图8描绘了模型CDR区的比较图9描绘了mAB1C2A6、8D10F4和8A9F9VH和VL比对。图10描绘了1C2A6Fv的模型。图11描绘了8D10F4、1C2A6、8A9F9、3F12E9和1D4G7的Fv生物物理特征的概述。图12显示了寨卡病毒颗粒、寨卡RNA基因组及其翻译基因的图解。图13显示了寨卡疫苗的质粒图谱，示出了编码寨卡抗原的插入片段(表达盒)的定位位点。图14显示了示出各种寨卡抗原设计的线性结构的图。图15显示了寨卡抗原-前导序列+prME的有注释的氨基酸序列。图16和17显示了各种寨卡病毒株之间的遗传关系：图16示出了分离株之间的遗传距离，图17显示了遗传树。图18显示了寨卡疫苗的质粒图谱，示出了编码寨卡-prM+Env的插入片段(表达盒)的定位位点。图19显示了凝胶电泳图像，其示出了表达盒的存在。图20A和20B显示了示本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种核酸分子，其编码一种或多种合成抗体，其中所述核酸分子包含选自由以下组成的组的至少一种：a)编码抗ZIKV包膜(E)蛋白合成抗体的核苷酸序列；b)编码抗ZIKV E蛋白合成抗体的片段的核苷酸序列；

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.09.19 US 62/396,750;2016.11.03 US 62/417,0931.一种核酸分子，其编码一种或多种合成抗体，其中所述核酸分子包含选自由以下组成的组的至少一种：a)编码抗ZIKV包膜(E)蛋白合成抗体的核苷酸序列；b)编码抗ZIKVE蛋白合成抗体的片段的核苷酸序列；2.根据权利要求1所述的核酸分子，其还包含编码切割结构域的核苷酸序列。3.根据权利要求1所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含编码抗ZIKVE抗体的核苷酸序列。4.根据权利要求3所述的核酸分子，其中所述抗ZIKVE抗体包含与选自由SEQIDNO:11-22组成的组的序列具有至少90％同源性的氨基酸序列或其免疫原性片段。5.根据权利要求4所述的核酸分子，其中所述抗ZIKVE抗体包含选自由SEQIDNO:11-22组成的组的氨基酸序列或其免疫原性片段。6.根据权利要求1所述的核酸分子，其中所述抗ZIKVE蛋白合成抗体包含可变重(VH)链和可变轻(VL)链。7.根据权利要求6所述的核酸分子，其中抗ZIKVE蛋白合成抗体VH链包含与选自由SEQIDNO:1、SEQIDNO:3、SEQIDNO:5、SEQIDNO:7和SEQIDNO:9组成的组的序列具有至少90％同源性的氨基酸序列或其免疫原性片段。8.根据权利要求7所述的核酸分子，其中抗ZIKVE蛋白合成抗体VH链包含选自由SEQIDNO:1、SEQIDNO:3、SEQIDNO:5、SEQIDNO:7和SEQIDNO:9组成的组的序列或其免疫原性片段。9.根据权利要求6所述的核酸分子，其中抗ZIKVE蛋白合成抗体VL链包含与选自由SEQIDNO:2、SEQIDNO:4、SEQIDNO:6、SEQIDNO:8和SEQIDNO:10组成的组的序列具有至少90％同源性的氨基酸序列或其免疫原性片段。10.根据权利要求9所述的核酸分子，其中抗ZIKVE蛋白合成抗体VL链包含选自由SEQIDNO:2、SEQIDNO:4、SEQIDNO:6、SEQIDNO:8和SEQIDNO:10组成的组的序列或其免疫原性片段。11.根据权利要求1所述的核酸分...

【专利技术属性】
技术研发人员：大卫·韦纳，卡鲁皮亚·穆苏马尼，严健，
申请(专利权)人：宾夕法尼亚大学理事会，威斯塔解剖学和生物学研究所，艾诺奥医药品有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US