断奶前对抗欧洲猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病毒株的有效疫苗接种制造技术

本发明专利技术提供修饰的活欧洲PRRS病毒(无论是否重组)，其一直在非猿猴细胞，通常是猪细胞上培养、供养和/或减毒，其中所述细胞表达猪CD163受体，并且其中由所述病毒制备的疫苗是安全且有效的，并且允许断奶前，通常早在生命的第1天，对猪进行单剂量疫苗接种。

Effective vaccination against the European swine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus before weaning

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】断奶前对抗欧洲猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病毒株的有效疫苗接种
本专利技术提供保护包括雄性和雌性的所有年龄的猪的对抗欧洲猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病毒株的疫苗。本专利技术特别提供仔猪在包括从出生之后即刻(即，仅约1天龄或更小)到三周龄的断奶前的安全且早期的疫苗接种，在所有时间任选地与多价组合猪疫苗如二价PRRSV/猪肺炎支原体(Mycoplasmahyopneumoniae,M.hyo)疫苗、二价PRRSV/2型猪圆环病毒(PCV2)疫苗以及三价PRRSV/猪肺炎支原体/PCV2疫苗组合，或简单地单价PRRSV疫苗，其中PRRS疫苗组分通常对应于其被认为是在包括西欧、地中海地区、斯堪的纳维亚地区，和东欧如俄罗斯、土耳其和乌克兰的欧洲大陆上传播(circulating)的基因型(和所述基因型的亚型)。本专利技术广泛涉及新类别的减毒欧洲PRRS病毒株，其以修饰的活体形式，即使作为疫苗给予最小的动物也是非常安全且有效的，并且提供非常久的免疫期。
技术介绍
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的特征在于大母猪和小母猪中的流产、死产以及其他繁殖问题，以及幼猪中的呼吸道疾病。致病物是PRRS病毒(PRRSV)，动脉炎病毒(Arteriviridae)科和巢状病毒(Nidovirales)目的一个成员。巢状病毒是具有由单链正极性RNA组成的基因组的包膜病毒。正链RNA病毒的基因组RNA实现了在遗传信息的储存和表达两方面的双重作用。没有DNA参与巢状病毒的复制或转录。非结构蛋白从巢状病毒的基因组RNA直接转译为大多蛋白并且随后被病毒蛋白酶裂解成朴素的功能蛋白。由所述基因组合成3'-同末端成套次基因组RNA(sgRNA)并将其用作用于转译结构蛋白的信使RNA。因此，巢状病毒基因组RNA的复制是基因组复制与sgRNA合成的一个组合过程。在1980年代后期，几乎同时出现了所述病毒的两种不同基因型，一种在北美洲，而另一种在欧洲。PRRS病毒现在是几乎所有产猪国家的地方性病毒，并且被认为是影响全球猪肉行业的经济上最重要的疾病之一。另外，已经在中国和周边国家分离出毒性极强的基因型，并且所述基因型通常与北美洲基因型密切相关。尽管在了解PRRSV的生物学方面取得了显著进展，但是所述病毒的控制仍然困难。已经证实本领域中动物的疫苗接种在很大程度上是无效的。PRRS通常在经免疫的畜群中重新出现，并且大部分农场上PRRSV疫苗接种运动最终未能控制所述疾病。不受理论限制，使猪感染野生型PRRSV或用该病原体的活减毒形式对其进行疫苗接种不幸地仅仅引发非中和抗体的大量产生。在该时间间隔期间，例如，仅产生有限量的干扰素(IFN)-γ分泌细胞。因此，PRRSV似乎固有地刺激以一贯丰富的体液(基于抗体)免疫和可变且有限但潜在保护性的T辅助细胞(Th)1-样IFN-γ反应区分的不平衡的免疫反应。最可能有助于适应性免疫的不平衡发展的PRRSV感染的一个特征是缺乏足够的先天性免疫反应。通常，病毒感染的细胞分泌I型干扰素“IFN”(包括IFN-α和IFN-β)，其保护邻近细胞不被感染。另外，释放的I型IFN与稚T细胞亚组相互作用以促进其转化成病毒特异性II型IFN(IFN-γ)分泌细胞。相比之下，猪对PRRSV暴露的IFN-α反应几乎不存在。病原体对IFN-α产生的如此低效的刺激预计将对宿主的适应性免疫反应的性质具有显著影响，因为IFN-α上调IFN-γ基因表达。因此，前一种细胞因子很可能控制促进适应性免疫(即，T细胞介导的IFN-γ反应和峰值抗病毒免疫防御)的发展的主要路径。就此而言，显然病毒感染中的先天性免疫与适应性免疫之间的可能联系通过一种特殊类型的树突状细胞发生，这种细胞具有产生大量I型干扰素的能力，并且其在T细胞功能的极化中起关键作用。具体地讲，一种稀少但显著类型的树突状细胞，浆细胞样树突状细胞(PDC)，也称为天然的IFN-α/β产生细胞，借助于其引起稚T细胞分化成IFN-γ分泌细胞的能力而在抗病毒免疫中起关键作用。虽然罕见，但是PDC是IFN-α的强有力的生产者，每个细胞都能够响应病毒产生3-10pg的IFN-α。相比之下，基于每个细胞计，单核细胞产生低5至10倍的IFN-α。已经描述了猪PDC的表型和一些生物性质(Summerfield等，2003,Immunology110:440)。最新的研究已经确定，PRRSV不刺激猪PDC分泌IFN-α(Calzada等，2010,VeterinaryImmunologyandImmunopathology135:20)。已经发现这个事实与在疫苗接种时外源添加的IFN-α的观察相组合改善PRRSV特异性IFN-γ反应的强度(W.A.Meier等，Vet.Immunol.Immunopath.102，第299页至第314页，2004)，突出了IFN-α在猪感染这种病毒期间所起到的关键作用。鉴于IFN-α对保护性免疫的发展的明显关键作用，重要的是确定不同PRRS病毒储备液刺激和/或抑制IFN-α产生的能力。因此，存在对用于保护不被PRRS影响的新型且改善的修饰的活疫苗的迫切需要。欧洲PRRS通常被命名为“1型”以将其与远亲关系的北美洲或“2型”PRRS相区分，并且这两种类型在总核苷酸水平上仅约60％相同。第一种明确定义的欧洲PRRSV分离株被Wensvoort等公开为莱利斯塔德剂(Lelystadagent)(参见InstitutPasteurIsolate1102和美国专利5,620,691和6,197,310以及其国际对应案)。各种亚型的欧洲PRRS(所有这些都可以在本专利技术的所有方面得到保护)在M.P.Murtaugh等，VirusResearch，第154卷，第18页至第30页，2010；和M.Shi等，VirusResearch，第154卷，第7页至第17页，2010中进一步阐述。早期北美洲PRRS分离株公开于美国专利5,476,778和5,840,563中。本专利技术人已经发现，可以提供减毒形式的欧洲PRRS病毒株，在给予最小的动物时其也是安全且有效的，并且与许多其他的目前可用的PRRS疫苗不同，其没有禁用动物免疫反应机制的许多方面，诸如上述的那些，从而进一步有助于安全性和功效。如本领域熟知的，已证明培养PRRS病毒非常困难。历史上，猴肾细胞系MA-104及其衍生物几乎专门用于商业化修饰的活PRRSV疫苗的繁殖和减毒，尽管并不知道此类细胞为什么可用于此目的(参见美国专利5,476,778)。哺乳动物细胞表面蛋白“CD163”被PRRS病毒天然地使用以进入哺乳动物细胞的发现(参见，例如美国专利9,102,912)已经被允许开发新的PRRSV允许细胞系。令人惊讶的是，这些较新细胞系的减毒产生具有与现有疫苗不同的性质的疫苗病毒(参见，美国专利9,566,324和美国申请公开2013-0309263)。因此，已经令人惊讶地发现，适于在(1)猪细胞或(2)并入猪CD163受体的非猪细胞(参见，美国专利7,754,464)上培养的欧洲PRRS病毒保持比由通过传统方法培养的疫苗病毒所提供的对猪科动物的安全性和功效概况更有意义的安全性和功效概况，并且，另外，即使在早期进行疫苗接种，也可以实现保护性免疫。由此看来本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于保护猪科动物免受PRRS病毒感染的疫苗，所述疫苗以有效产生抗感染的免疫保护作用的量包含：(a)欧洲PRRS病毒，其由SEQ ID NO:5的多核苷酸分子或在高度严格条件下与其杂交的任何多核苷酸编码，所述条件是在65℃下在0.5M NaHPO4、7％SDS、1mM EDTA中与过滤器结合的DNA杂交，并且在68℃下在0.1×SSC/0.1％SDS中洗涤；(b)所述编码多核苷酸分子；(c)呈质粒形式的所述多核苷酸分子；或(d)包含所述多核苷酸分子的病毒载体；以及适合兽用的载剂，并且其中所述疫苗早在仔猪一天龄或更小时提供早期且安全的疫苗接种，并且其中所述疫苗提供长达6个月的免疫期。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.12.14 US 62/434,1441.一种用于保护猪科动物免受PRRS病毒感染的疫苗，所述疫苗以有效产生抗感染的免疫保护作用的量包含：(a)欧洲PRRS病毒，其由SEQIDNO:5的多核苷酸分子或在高度严格条件下与其杂交的任何多核苷酸编码，所述条件是在65℃下在0.5MNaHPO4、7％SDS、1mMEDTA中与过滤器结合的DNA杂交，并且在68℃下在0.1×SSC/0.1％SDS中洗涤；(b)所述编码多核苷酸分子；(c)呈质粒形式的所述多核苷酸分子；或(d)包含所述多核苷酸分子的病毒载体；以及适合兽用的载剂，并且其中所述疫苗早在仔猪一天龄或更小时提供早期且安全的疫苗接种，并且其中所述疫苗提供长达6个月的免疫期。2.权利要求1所述的疫苗，其中所述疫苗在施用到约8～12小时龄的仔猪时提供抗感染的保护作用。3....

【专利技术属性】
技术研发人员：J·G·卡尔沃特，M·巴拉施，M·法特，D·S·皮尔斯，M·L·凯斯，
申请(专利权)人：硕腾服务有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国,US