一种腺病毒颗粒获得方法技术

本发明专利技术公开了一种腺病毒颗粒获得方法，具体涉及腺病毒获取领域，具体操作步骤如下：S1、pshuttle‑cmv‑hTERT穿梭质粒的构建；S2、BJ5183/p超级感受态的制备；S3、同源重组腺病毒质粒构建；S4、腺病毒颗粒收集。本发明专利技术通过pshuttle‑cmv‑hTERT穿梭质粒的构建、BJ5183/p超级感受态的制备、同源重组腺病毒质粒构建以及腺病毒颗粒收集共四个步骤，能够稳定的获取腺病毒，且每次获取的腺病毒颗粒数都能够保持稳定，相比于现有技术中腺病毒的获取，获取效率以及稳定性都得到了很大的提高。

A Method for Obtaining Adenovirus Particles

【技术实现步骤摘要】
一种腺病毒颗粒获得方法
本专利技术涉及腺病毒获取
，更具体地说，本专利技术涉及一种腺病毒颗粒获得方法。
技术介绍
近年来的研究发现PDLCs有类似间充质干细胞(Mesenchymalstemcells，MSCs)功能的细胞，能在体外分化为成骨细胞，脂肪细胞及神经样细胞，使牙周组织的再生成为可能，遗憾的是牙周膜的再生机制尚不明晰。牙周膜的再生研究方面，主要受限于原代PDLCs的传代培养会降低细胞的分化潜能，并失去原代特性，比如，不同代数牙周膜的成骨分化能力差异非常大。所以建立与原代PDLCs表型和生长特性相同，并能稳定传代的PDLCs细胞系，对牙周膜再生机制的研究提供细胞平台，有着重大的意义。构建保留原代细胞特征的稳定的人PDLCs细胞系存在诸多难点。Kamata等人通过共转染hTERT和人乳头状瘤细胞病毒16成功构建了人PDLCs系，可是这些细胞失去了钙化潜能。本研究组在前期研究中发现，通过导入各种抑癌基因以期构建稳定的细胞系时，细胞的形态，生长状态都可能发生改变。而人端粒反转转录酶(Humantelomerasereversetranscriptase，hTERT)是细胞内正本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种腺病毒颗粒获得方法，其特征在于：具体操作步骤如下：S1、pshuttle‑cmv‑hTERT穿梭质粒的构建；S1.1、根据NCBI hTERT基因cDNA序列设计引物，引物包括上游引物和下游引物；S1.2、在上游引物添加HindIII酶切位点及保护碱基，在下游引物添加KpnI酶切位点保护碱基；S1.3、参照高保真DNA聚合酶Platinum Pfx DNA Polymerase说明书，采用PCR法特异性扩增hTERT基因编码序列，利用1％琼脂糖凝胶进行电泳分析，得到大小为3.3kb条带；S1.4、将限制性内切酶HindIII、KpnI双酶切hTERT和pshuttle‑cmv进行酶切，...

【技术特征摘要】
1.一种腺病毒颗粒获得方法，其特征在于：具体操作步骤如下：S1、pshuttle-cmv-hTERT穿梭质粒的构建；S1.1、根据NCBIhTERT基因cDNA序列设计引物，引物包括上游引物和下游引物；S1.2、在上游引物添加HindIII酶切位点及保护碱基，在下游引物添加KpnI酶切位点保护碱基；S1.3、参照高保真DNA聚合酶PlatinumPfxDNAPolymerase说明书，采用PCR法特异性扩增hTERT基因编码序列，利用1％琼脂糖凝胶进行电泳分析，得到大小为3.3kb条带；S1.4、将限制性内切酶HindIII、KpnI双酶切hTERT和pshuttle-cmv进行酶切，得到酶切产物胶，回收后使用T4连接酶连接得到连接产物，接着将连接产物加入Trans-T1感受态细胞中将其转化，然后使用质粒小量提取试剂盒说明书进行抽提质粒，最后用PmeI酶切鉴定抽提的质粒，将鉴定为阳性的质粒进行测序；S2、BJ5183/p超级感受态的制备；S2.1、采用热激法将质粒pAd-Easy-1转化成BJ5183感受态，然后涂氨苄霉素琼脂板，挑取单克隆；S2.2、采用Inoue方法制备含pAd-Easy-1的BJ5183超级感受态，命名为BJ5183/p；S3、同源重组腺病毒质粒构建；S3.1、用PmeI酶切pshuttle-cmv-TERT质粒使其线性化，然后采用热激法将其转化成超级感受态BJ5183/p；S3.2、涂氨苄抗性琼脂板，挑取10个菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦晓东，何祥一，曾飒，张志东，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃,62