【技术实现步骤摘要】
一种基于多重PCR富集循环肿瘤DNA的方法和试剂盒
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种基于多重PCR富集循环肿瘤DNA的方法和试剂盒。
技术介绍
随着人类基因组完成图完成，人类进入后基因组时代。在后基因组时代，首先要求利用人类基因组DNA序列信息来研究基因及其变异，以检测变异带来的功能改变。通常肿瘤的发生涉及多个基因的发生发展，针对单一基因变化的研究就显示出很大的局限性，只有全面检测多个基因的碱基突变，才能有效监控MRD，用药指导，治疗疗效和术后治疗等。近年来，针对ctDNA(循环肿瘤DNA，CirculationtumorDNA)，即“液体活检”在临床中的应用，开展了广泛的研究，覆盖肿瘤全程管理的方方面面：如肿瘤筛查、分子诊断、转移或复发监测、实时监测疗效、探寻新的靶点和耐药机制等。ctDNA指坏死或凋亡的肿瘤细胞释放到外周血中的肿瘤DNA片段，其带有肿瘤特异性突变或表观遗传学改变。cfDNA(游离DNA，circulating-freecellDNA)是指存在于血浆或血清的细胞外DNA。ctDNA包含在cfDNA中，是肿瘤患者cfDNA中的一部分。研究结...
【技术保护点】
1.一种基于多重PCR富集循环肿瘤DNA的方法，其特征在于，包含以下步骤：步骤(1)，设计若干PCR引物对，PCR引物上带有U碱基，所述的PCR引物对包含正向引物和反向引物，所述的正向引物和反向引物均包含：一段用于扩增基因目标区域的扩增引物序列、及一段引物连接序列；所述的引物连接序列用于与测序平台的通用测序接头连接；步骤(2)，取含有循环肿瘤DNA的模板，并将所述模板和步骤(1)所述的PCR引物对一起进行第一次PCR反应，获得第一次PCR反应产物；步骤(3)，在所述的第一次PCR反应产物中加入组合酶，以消化残留的PCR引物；所述的组合酶包含：用于将所述的第一次PCR反应产物...
【技术特征摘要】
1.一种基于多重PCR富集循环肿瘤DNA的方法，其特征在于，包含以下步骤：步骤(1)，设计若干PCR引物对，PCR引物上带有U碱基，所述的PCR引物对包含正向引物和反向引物，所述的正向引物和反向引物均包含：一段用于扩增基因目标区域的扩增引物序列、及一段引物连接序列；所述的引物连接序列用于与测序平台的通用测序接头连接；步骤(2)，取含有循环肿瘤DNA的模板，并将所述模板和步骤(1)所述的PCR引物对一起进行第一次PCR反应，获得第一次PCR反应产物；步骤(3)，在所述的第一次PCR反应产物中加入组合酶，以消化残留的PCR引物；所述的组合酶包含：用于将所述的第一次PCR反应产物中的U碱基切除并降解单链DNA片段的第一类酶、以及用于将所述第一次PCR反应产物中的双链DNA上的U修复为T的第二类酶；步骤(4)，将通用测序接头加入到第一次PCR反应产物中，进行第二次PCR反应，以获得测序文库。2.根据权利要求1所述的基于多重PCR富集循环肿瘤DNA的方法，其特征在于，所述的PCR引物上的U碱基的个数为1个或者1个以上。3.根据权利要求1所述的基于多重PCR富集循环肿瘤DNA的方法，其特征在于，所述的第一类酶包含UDG酶、APendonuclease酶和核酸外切酶I，所述的第二类酶包含T4多聚核苷酸激酶、DNA聚合酶和DNA连接酶。4.根据权利要求1所述的基于多重PCR富集循环肿瘤DNA的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的正向引物和反向引物还均包含：一段UMI分子标签序列。5.根据权利要求4所述的基于多重PCR富集循环肿瘤DNA的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的UMI分子标签序列为UNNNACTNNNTGAU。6.根据权利要求1所述的基于多重PCR富集循环肿瘤DNA的方法，其特征在于，所述的通...
【专利技术属性】
技术研发人员：蔡微菁，徐泽，
申请(专利权)人：常州桐树生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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