采用一测多评法测定板蓝根或其制剂中生物碱类、木脂素类和核苷类成分的含量的方法技术

本发明专利技术公开了采用一测多评法测定板蓝根或其制剂中生物碱类、木脂素类和核苷类成分的含量的方法，选取价廉易得且结构相对稳定的生物碱类化合物(R,S)‑告依春作为参照物，建立其与木脂素类化合物直铁线莲宁B以及核苷类化合物胞苷、尿苷、鸟苷、腺苷的相对校正因子，实现通过只测定板蓝根或其制剂的(R,S)‑告依春的含量，用校正因子计算出另外5种含量较高的木脂素类和核苷类成分的含量，从而简便快捷、全面准确地对板蓝根或其制剂进行多指标的质量评价，有助于保证该产品的质量可控和疗效稳定，同时节约检测成本和时间。

A method for the determination of alkaloids, lignans and nucleosides in Radix Isatidis or its preparations by one-step multi-evaluation

【技术实现步骤摘要】
采用一测多评法测定板蓝根或其制剂中生物碱类、木脂素类和核苷类成分的含量的方法
：本专利技术涉及板蓝根检测
，具体涉及采用一测多评法测定板蓝根或其制剂中生物碱类、木脂素类和核苷类成分的含量的方法。
技术介绍
：板蓝根，为十字花科植物蒋蓝的干燥根，功能主治为清热解毒，凉血利咽。用于温疫时毒，发热咽痛，温毒发斑，痄腮，烂喉丹痧，大头瘟疫，丹毒，痈肿。板蓝根主要含有木脂素类、生物碱类、核苷类等活性成分。木脂素(Lignan)是一类由2分子苯丙素衍生物氧化聚合而成的植物次级代谢产物。具有抗病毒、抗炎、抗氧化、抗肿瘤和保肝等多种药理活性和重要的应用价值，其中的直铁线莲宁B被证明具有体外抑制流感病毒复制的药效。基于木脂素的药用价值，有较多木脂素类化合物直铁线莲宁B在药材或者制剂中的含量研究；核苷(Nucleoside)是一类糖甘胺(glycosylamine)分子，组成物是碱基加上环状核糖或脱氧核糖，例如胞苷、尿苷、腺苷、鸟苷与胸腺苷等，是中成药抗病毒的活性成分。核苷类成分在板蓝根药材中含量较高且易溶于水，对板蓝根及其制剂的疗效和质量影响较大。因此，有研究者对核苷类成分的含量测定进行了相关研究，例如肖慧,刘清飞,王义明,等.高效液相法测定板蓝根药材中三种核苷的含量[J].中成药,2008(11):1654-1657.赵亚丽.板蓝根药材中3种核苷高效液相法测定含量分析[J].实用中医药杂志,2017(12):1458-1459.生物碱(Alkaloid)是一种主要包含碱性氮原子的化合物，包括脂溶性的靛蓝、靛玉红和水溶性成分(R,S)-告依春等。现代药理实验表明，板蓝根的生物碱类成分能够抗炎、抗病毒、解热，现行《中国药典》板蓝根的含量测定项下是仅采用HPLC测定水提液中的(R,S)-告依春的量作为质控指标，对板蓝根尚未建立完善的质量控制方法。综上，考察优化板蓝根多成分的含量测定研究很有必要。目前尚未见板蓝根或其制剂的一测多评法同时测定板蓝根或其制剂中生物碱类、核苷类和木脂素类成分含量的方法的研究报道。
技术实现思路
：本专利技术的目的是提供采用一测多评法测定板蓝根或其制剂中生物碱类、木脂素类和核苷类成分的含量的方法，选取价廉易得且结构相对稳定的生物碱类化合物(R,S)-告依春作为参照物，建立其与木脂素类化合物直铁线莲宁B以及核苷类化合物胞苷、尿苷、鸟苷、腺苷的相对校正因子，实现通过只测定板蓝根或其制剂的(R,S)-告依春的含量，用校正因子计算出另外5种含量较高的木脂素类和核苷类成分的含量，从而简便快捷、全面准确地对板蓝根或其制剂进行多指标的质量评价，有助于保证该产品的质量可控和疗效稳定，同时节约检测成本和时间，解决了现有技术的不足。本专利技术是通过以下技术方案予以实现的：采用一测多评法测定板蓝根或其制剂药材中生物碱类、木脂素类和核苷类成分的含量的方法，该方法选取价廉易得且结构相对稳定的生物碱类化合物(R,S)-告依春作为参照物，建立其与木脂素类化合物直铁线莲宁B以及核苷类化合物胞苷、尿苷、鸟苷、腺苷的相对校正因子，实现通过只测定板蓝根或其制剂的(R,S)-告依春的含量，同时得到木脂素类化合物直铁线莲宁B以及核苷类化合物胞苷、尿苷、鸟苷、腺苷的含量，采用液相色谱法进行测定，色谱与系统适用性试验条件：色谱柱：C18；流动相以水为流动相A，甲醇为流动相B，采用梯度洗脱程序，梯度条件为：0～3min，3％B；3～20min，3～8％B；20～25min，8～22％B；25～35min，22％B；35～36min，22～25％B；36～48min，25％B；48～50min，25～90％B；50～60min，90％B；流速0.5-1.2mL/min，优选为0.8～1mL/min；检测波长230或254nm，柱温25-35℃，优选为30℃。相对校正因子的计算：相对校正因子的计算公式如下：fk/m＝fk/fm＝(Wk×Am)/(Wm×Ak)Wk为(R,S)-告依春内标物的含量，Am为(R,S)-告依春内标物的峰面积，Wm为被测指标组分k的含量，Am为被测成分m的峰面积。优选地，所述直铁线莲宁B以及核苷类化合物胞苷、尿苷、鸟苷、腺苷的相对校正因子范围分别为0.22-0.26、0.7-0.9、1-1.2、1.4-1.6、1.3-1.6。本专利技术所述的生物碱类化合物包括(R,S)-告依春，木脂素类化合物包括直铁线莲宁B，核苷类化合物包括胞苷、尿苷、鸟苷、腺苷，并不局限于上述所说的6个成分。供试品溶液的制备:取板蓝根，甲醇水溶液超声提取，放冷，称重，用水补足超声过程减失的重量，滤纸滤过，取续滤液，过微孔滤膜，即得供试品溶液。特别地，所述甲醇水溶液为1～20wt％，超声提取温度为40-50℃，频率为60～120kHz，超声提取时间为1～2h。特别地，精密称取板蓝根药材粉末或板蓝根制剂细粉适量，加入5wt％甲醇水溶液超声提取，放冷，称重，用水补足超声过程减失的重量，滤纸滤过，取续滤液，过微孔滤膜，即得供试品溶液。所述超声提取温度为40-50℃，频率为80kHz，超声提取时间为1h。所述微孔滤膜为0.22μm微孔滤膜。所述制剂包括颗粒剂、片剂、胶囊等药学可接受的剂型。特别地，(R,S)-告依春被直铁线莲宁B、胞苷、尿苷、鸟苷中之一替代作为参照物，基于用同样的原理计算出相互间的相对校正因子，测定另外5种成分的含量。本专利技术的有益效果如下：1)本专利技术选取价廉易得且结构相对稳定的生物碱类化合物(R,S)-告依春作为参照物，首次建立其与木脂素类化合物直铁线莲宁B以及核苷类化合物胞苷、尿苷、鸟苷、腺苷的相对校正因子，实现通过只测定板蓝根或其制剂的(R,S)-告依春的含量，用校正因子计算出另外5种含量较高的木脂素类和核苷类成分的含量，同时测定板蓝根或其制剂中三类(生物碱类、核苷类和木脂素类)6种成分以上含量的方法，从而简便快捷、全面准确地对板蓝根或其制剂进行多指标的质量评价，且灵敏度高，有助于保证该产品的质量可控和疗效稳定，同时节约检测成本和时间，提高了工作效率，能够更有效、更全面、更准确地控制板蓝根或其制剂的质量，确保质量的稳定均一，保证产品的安全有效，实用性强。2)本专利技术所述的一测多评方法是仅通过使用(R,S)-告依春一种对照品，即能实现对其他3类5个成分(直铁线莲宁B、胞苷、尿苷、鸟苷、腺苷)的多指标含量测定和质量评价；可应用于板蓝根或其制剂包括板蓝根饮片、颗粒剂、片剂和胶囊等，更全面地检测和控制板蓝根或其制剂中有效成分的转化率，有利于质量的监控和工艺的改进。3)本专利技术的方法具有普遍的适用性和重现性，不同的实验人员、仪器和色谱柱对该方法的结果无明显影响。4)本专利技术将中药中以单一药材原料药以国际上药品的质量标准看齐，为中药的质量标准发展奠定了物质基础，对于板蓝根或其制剂的市场拓展、临床应用及其国际化进程具有重要意义。附图说明：图1混合对照品在254nm条件下的HPLC图；其中，1、R,S-告衣春，3、胞苷，4、尿苷，5、尿苷，6、腺苷；图2板蓝根药材在254nm条件下的HPLC图；其中，1、R,S-告衣春，3、胞苷，4、尿苷，5、尿苷，6、腺苷；图3混合对照品在230nm条件下的HPLC图；其中，1、R,S-告衣春，2、直铁线莲宁B；图4板蓝根药材在23本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.采用一测多评法测定板蓝根或其制剂中生物碱类、木脂素类和核苷类成分的含量的方法，其特征在于，该方法选取(R,S)‑告依春作为参照物，建立其与木脂素类化合物以及核苷类化合物相对校正因子，实现通过只测定板蓝根或其制剂的(R,S)‑告依春的含量，同时得到木脂素类化合物以及核苷类化合物的含量，采用液相色谱法进行测定，色谱与系统适用性试验条件：色谱柱：C18，流动相以水为流动相A，甲醇为流动相B，采用梯度洗脱程序，梯度条件为：0～3min，3％B；3～20min，3～8％B；20～25min，8～22％B；25～35min，22％B；35～36min，22～25％B；36～48min，25％B；48～50min，25～90％B；50～60min，90％B；流速0.5‑1.2mL/min，检测波长230或254nm，柱温25‑35℃。

【技术特征摘要】
1.采用一测多评法测定板蓝根或其制剂中生物碱类、木脂素类和核苷类成分的含量的方法，其特征在于，该方法选取(R,S)-告依春作为参照物，建立其与木脂素类化合物以及核苷类化合物相对校正因子，实现通过只测定板蓝根或其制剂的(R,S)-告依春的含量，同时得到木脂素类化合物以及核苷类化合物的含量，采用液相色谱法进行测定，色谱与系统适用性试验条件：色谱柱：C18，流动相以水为流动相A，甲醇为流动相B，采用梯度洗脱程序，梯度条件为：0～3min，3％B；3～20min，3～8％B；20～25min，8～22％B；25～35min，22％B；35～36min，22～25％B；36～48min，25％B；48～50min，25～90％B；50～60min，90％B；流速0.5-1.2mL/min，检测波长230或254nm，柱温25-35℃。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述木脂素类化合物为直铁线莲宁B；所述核苷类化合物选自胞苷、尿苷、鸟苷、腺苷中的任一种。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，流速为0.8～1mL/min，柱温为30℃。4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，相对校正因子的计算公式如下：fk/m＝fk/fm＝(Wk×Am)/(Wm×Ak)；其中Wk为(R,S)-告依春内标物的...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄远，董福越，王德勤，李淑如，李楚源，
申请(专利权)人：广州白云山和记黄埔中药有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44