一种拳参与珠芽蓼、草血竭的鉴别方法技术

本发明专利技术涉及药材鉴别技术领域，特别涉及一种拳参与珠芽蓼、草血竭的鉴别方法，以绿原酸、3,5‑O‑二咖啡酰奎宁酸和4,5‑O‑二咖啡酰奎宁酸三个成分作为区分物质。本发明专利技术的方法简单易操作，分析时间短，准确率高，达到100%，是一种适合推广使用的方法。

A Method for Identification of Polygonum sphaeroides and Dracaena Dracunculus

【技术实现步骤摘要】
一种拳参与珠芽蓼、草血竭的鉴别方法
本专利技术涉及药材鉴别
，特别涉及一种拳参与珠芽蓼、草血竭的鉴别方法。
技术介绍
拳参为蓼科植物拳参PolygonumbistortaL.的干燥根茎。呈扁长条形或扁圆柱形，弯曲，有的对卷弯曲，两端略尖，或一端渐细，长6～13cm，直径1～2.5cm。表面紫褐色或紫黑色，粗糙，一面隆起，一面稍平坦或略具凹槽，全体密具粗环纹，有残留须根或根痕。质硬，断面浅棕红色或棕红色，维管束呈黄白色点状，排列成环。气微，味苦、涩。珠芽蓼为蓼科植物珠芽蓼PolygonumviviparnmL.的干燥根茎。草血竭为蓼科蓼属植物红茎蓼PolygonumpaleaceumWall.的干燥根茎。三者同为廖科植物，珠芽蓼和草血竭与拳参的外形特征较为接近。有文献曾采用显微横切面观察法对三者进行区分，差异不显著；有文献曾采用聚类法对三者水溶性成分的HPLC指纹图谱进行分析，可以进行适当区分，但是对于样本量的要求过于严格；有文献曾采用HPLC-MS-MS法对三者水溶性成分进行分析，主要成分基本一致，仅存在量的少量差异。各种方法效果均不理想。按照现行的《中国药典》2015年版一部进行检验，性状、显微鉴别、没食子酸的薄层鉴别及HPLC法含量测定均无法对三者进行有效区分，造成市场上珠芽蓼和草血竭代替拳参使用的现象比较普遍。造成这种问题出现的原因，主要是上述检验项目专属性不强。所以，找到拳参与珠芽蓼、草血竭具有差异的检测成分，才能进行有效鉴别。
技术实现思路
为了解决以上现有技术中拳参药材检验方法中存在的问题，将拳参与珠芽蓼、草血竭进行有效区分，本专利技术公开了一种检验准确度高、方法简便的拳参与珠芽蓼、草血竭的鉴别方法。考虑到目前对极性较大的水溶性成分的研究普遍效果不理想，本专利技术将研究方向进行了调整，以极性较低成分进行研究，选定的样品提取条件和色谱条件主要针对该类成分。高效液相色谱法(配二极管阵列检测器)可以实现对拳参低极性成分进行分离，并实现拳参与珠芽蓼、草血竭的有效鉴别。高效液相色谱可以对样品所含的不同化学成分先进行分离，二极管阵列检测器可以进行光谱图的比较，配合使用以达到鉴别的目的，并保证结果的准确性。本专利技术是通过以下步骤得到的：一种拳参与珠芽蓼、草血竭的鉴别方法，将待测样品粉碎，使用有机溶剂提取后，采用高效液相色谱仪进行检测，若检出绿原酸成分，未检出3,5-O-二咖啡酰奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰奎宁酸两个成分，则待测样品为拳参；若同时检出绿原酸、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰奎宁酸三个成分，则待测样品为珠芽蓼或草血竭。在差异成分3,5-O-二咖啡酰奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰奎宁酸的筛选及确认过程中进行了大量的工作。由于拳参主要含有没食子酸和鞣质类成分，目前关于拳参的成分研究工作主要为水溶性成分的研究。鉴于拳参、珠芽蓼、草血竭中水溶性成分差异不明显，我们创新性地对三种药材的脂溶性成分进行了研究。经过反复对比试验，采用低极性溶剂，对拳参、珠芽蓼、草血竭的脂溶性成分进行提取，采用高效液相色谱法进行分离，得到三种药味的脂溶性成分特征图谱。通过对特征图谱的分析比对，得到三种药味的差异性成分，并进一步采用高效液相色谱-质谱联用仪对差异性成分进行鉴定。通过质谱解析以及对照品比对，最终确认差异成分为3,5-O-二咖啡酰奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰奎宁酸。所述的鉴别方法，优选高效液相色谱仪色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以体积分数0.1～1％的酸溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式：0min→15min，乙腈5％→25％；15min→25min，乙腈25％→35％；检测波长为327nm，流速：1ml/min，柱温：35℃。所述的鉴别方法，优选保留时间12.5±0.2min的峰为绿原酸峰，保留时间20.1±0.2min的峰为3,5-O-二咖啡酰奎宁酸峰，保留时间21.0±0.2min的峰为4,5-O-二咖啡酰奎宁酸峰。所述的鉴别方法，优选保留时间12.4±0.2min的峰为绿原酸峰，以绿原酸峰为参照峰，相对保留时间1.61±5％的峰为3,5-O-二咖啡酰奎宁酸峰，相对保留时间1.69±5％的峰为4,5-O-二咖啡酰奎宁酸峰。所述的鉴别方法，优选使用有机溶剂提取中有机溶剂为乙醇。所述的鉴别方法，优选取待测样品粉末，加乙醇进行提取，滤过，蒸干，加水溶解，用乙酸乙酯进行萃取，乙酸乙酯液蒸干，加甲醇溶解并稀释，摇匀，滤过，注入高效液相色谱仪。所述的鉴别方法，优选乙醇的提取方法为超声处理30分钟。所述的鉴别方法，优选待测样品与乙醇的质量体积比为1g:25mL。所述的鉴别方法，优选酸溶液为0.1％磷酸溶液。本专利技术的有益效果：本专利技术的方法简单易操作，分析时间短，准确率高，特别是采用《中国药典》规定的检验项目和方法仍无法有效区分的拳参与珠芽蓼、草血竭药材，采用该方法，准确率达到100％，是一种适合推广使用的方法。附图说明图1为绿原酸、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰奎宁酸混合对照品HPLC色谱图，自左至右分别为绿原酸峰、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸峰和4,5-O-二咖啡酰奎宁酸峰，图2为绿原酸、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰奎宁酸对照品紫外光谱图，自上至下分别为绿原酸、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰奎宁酸，图3为拳参药材HPLC色谱图，图4为拳参药材中绿原酸的紫外光谱图，图5为珠芽蓼药材HPLC色谱图，图6为珠芽蓼药材中绿原酸、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰奎宁酸的紫外光谱图，自上至下分别为绿原酸、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰奎宁酸，图7为草血竭药材HPLC色谱图，图8为草血竭药材中绿原酸、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰奎宁酸的紫外光谱图，自上至下分别为绿原酸、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰奎宁酸。具体实施方式以下通过具体实施例对本专利技术作进一步的说明，并非对本专利技术的限定，依照本领域公知的现有技术，本专利技术的实施方式并不限于具体实施例。实施例11.仪器与试药仪器：MettlerToledoXSE205电子天平；Waters2695-2998高效液相色谱仪(PDA检测器)；对照品：绿原酸，购自中国食品药品检定研究院；批号为110753-201314，含量为96.6％；3,5-O-二咖啡酰奎宁酸、4,5-O-二咖啡酰奎宁酸，均购自成都普思生物科技有限公司，批号分别为ps100623-02、ps100623-01，纯度≥98％；试药：甲醇、乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯。拳参药材、珠芽蓼药材、草血竭药材各10批，均为药材市场收集。2.溶液的制备2.1混合对照品溶液的制备：精密称取绿原酸、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰奎宁酸对照品适量，加甲醇制成浓度均约为50μg/ml的混合对照品溶液。2.2药材溶液的制备：取待测药材粉末适量，取约1g，精密称定，加入乙醇30ml，超声提取30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加适量水溶解，用乙酸乙酯振摇提取二次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，并转移至5ml量瓶中，摇匀，滤过，作为供试品溶液。3.色谱条件与本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种拳参与珠芽蓼、草血竭的鉴别方法，其特征在于将待测样品粉碎，使用有机溶剂提取后，采用高效液相色谱仪进行检测，若检出绿原酸成分，未检出3,5‑O‑二咖啡酰奎宁酸和4,5‑O‑二咖啡酰奎宁酸两个成分，则待测样品为拳参；若同时检出绿原酸、3,5‑O‑二咖啡酰奎宁酸和4,5‑O‑二咖啡酰奎宁酸三个成分，则待测样品为珠芽蓼或草血竭。

【技术特征摘要】
1.一种拳参与珠芽蓼、草血竭的鉴别方法，其特征在于将待测样品粉碎，使用有机溶剂提取后，采用高效液相色谱仪进行检测，若检出绿原酸成分，未检出3,5-O-二咖啡酰奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰奎宁酸两个成分，则待测样品为拳参；若同时检出绿原酸、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰奎宁酸三个成分，则待测样品为珠芽蓼或草血竭。2.根据权利要求1所述的鉴别方法，其特征在于高效液相色谱仪色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以体积分数0.1～1％的酸溶液为流动相B，采用梯度洗脱方式：0min→15min，乙腈5％→25％；15min→25min，乙腈25％→35％；检测波长为327nm，流速：1ml/min，柱温：35℃。3.根据权利要求2所述的鉴别方法，其特征在于保留时间12.5±0.2min的峰为绿原酸峰，保留时间20.1±0.2min的峰为3,5-O-二咖啡酰奎宁酸峰，保留时...

【专利技术属性】
技术研发人员：林林，林永强，于凤蕊，穆向荣，解盈盈，
申请(专利权)人：山东省食品药品检验研究院，
类型：发明
国别省市：山东,37