船盔乌头中二萜生物碱化合物及其制备方法和用途技术

本发明专利技术涉及一种船盔乌头中二萜生物碱化合物及其制备方法和用途，该方法以船盔乌头药材为原料，用溶剂提取，酸溶碱沉后，通过凝胶Sephadex LH‑20色谱,反相RP‑18柱色谱分离，采用薄层层析法进行分析后得到3个二萜生物碱化合物，分别为船盔乌头素A（1）、船盔乌头素B（2）、船盔乌头素C（3），对上述三种化合物进行体外细胞毒活性测定，试验结果表明：船盔乌头素B（2）在对人早幼粒白血病细胞、人肝癌细胞、人肺癌细胞、人乳腺癌、人结肠癌细胞具有抗肿瘤活性，可用于制备抗肿瘤药物。

Two terpene alkaloid compound in Aconitum monkshood root, preparation method and application thereof

The invention relates to a two terpene alkaloid compound and preparing Aconitum naviculare in the production and use of this method to Aconitum naviculare herbs as raw materials, solvent extraction, acid alkali precipitation, Sephadex LH 20 by gel chromatography, reversed-phase RP separation 18 column chromatography, TLC method 3 two after analyzing the terpenoid alkaloid compounds, respectively Aconitum naviculare A (1), Aconitum naviculare B (2), Aconitum naviculare C (3), of the three compounds were determined in vitro cytotoxicity test results showed that: Aconitum naviculare B (2) with antitumor the activity in human promyelocytic leukemia cells and human hepatoma cells and human lung cancer cells, breast cancer, colon cancer cells, can be used for preparing antitumor drugs.

【技术实现步骤摘要】
船盔乌头中二萜生物碱化合物及其制备方法和用途
本专利技术涉及植物化学领域，具体涉及从船盔乌头药材中提取、分离二萜生物碱化合物。
技术介绍
船盔乌头(Aconitumnaviculare.Stapf)，藏药名榜嘎，始载于藏药的典籍《月王药诊》，属于毛茛科(Ranunculaceae)乌头属(Aconitum.)植物。船盔乌头性味苦，寒，有小毒，多入丸散，具有清热解毒的功效。该种植物在藏药的应用中多为复方制剂，例如十一味金色丸、十二味翼首伞、十三味榜嘎散。2010版《中国药典》41个藏药成方制剂中均含有船盔乌头，约占藏药方剂的20％，由此可见其应用的广泛性。现代药理学研究表明，船盔乌头具有抗炎、镇痛的作用。船盔乌头应用较为广泛，目前对于该藏药的化学成分与药理作用的系统研究可供参考的数据较少，因此对于船盔乌头中具有抗肿瘤活性的二萜生物碱化合物成分进行提取分离研究很有必要，对船盔乌头抗肿瘤活性的探究具有很大的学术价值。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，提供一种船盔乌头中二萜生物碱化合物及其制备方法和用途。该化合物1为船盔乌头素A(1)；化合物2为船盔乌头素B(2)；化合物3为船盔乌头素C(3)。其中，船盔乌头素A(1)为双二萜生物碱，其分子式为C40H50N2O4；船盔乌头素B(2)为双二萜生物碱，其分子式为C47H56N2O5；船盔乌头素C(3)分子式为C29H37NO3。其中，船盔乌头素A(1)结构式为其中，船盔乌头素B(2)结构式为其中，船盔乌头素C(3)结构式为其中，船盔乌头中二萜生物碱化合物的制备方法按下列步骤进行：A、取船盔乌头地上部分，干燥粉碎后，采用工业甲醇冷浸3次，工业丙酮冷浸1次，冷浸时间72h，减压浓缩回收溶剂得到浸膏；B、采用盐酸调节浸膏PH为2-3，依次采用石油醚，乙酸乙酯,正丁醇萃取，调节酸水PH为10，然后再次用,乙酸乙酯,正丁醇萃取，减压浓缩回收得到正丁醇部位的总生物碱；C、将步骤B中的总生物碱经凝胶SephadexLH-20色谱,反相RP-18柱色谱分离，采用薄层层析法进行分析，即得到二萜生物碱化合物船盔乌头素A(1)、船盔乌头素B(2)、船盔乌头素C(3)。其中，船盔乌头素B(2)在制备治疗或预防癌症疾病的药物中的应用，所述癌症为白血病、肝癌、肺癌、乳腺癌、结肠癌。附图说明图1为本实施例的利用设定构型的结构计算值与实验值比较后所获得确定的构型示意图。具体实施方式取船盔乌头地上部位10kg,干燥,粉碎,工业甲醇冷浸3次,工业丙酮冷浸1次,每次72h。回收溶剂,得浸膏,然后用酸水调节PH＝2-3,依次采用石油醚，乙酸乙酯,正丁醇萃取。酸水部分调节PH＝10，然后再次用,乙酸乙酯,正丁醇萃取,然后得到正丁醇部位的总生物碱18g。总生物碱依次采用凝胶SephadexLH-20色谱,反相RP-18柱色谱分离与分析。对得到的船盔乌头中二萜生物碱化合物进行分析，其中船盔乌头素A(1)通过13CNMR(表2)及ESIMS(m/z[M+H]+＝623),可以确定其分子式为C40H50N2O4不饱和度为15，通过2DNMR确定其平面结构。通过ROESY和文献确定其相对构型,H-11(J＝11.0Hz)及H-9(J＝9.0Hz),表明两者二面角为零度,以此确定H-11为β构型。根据1H-1HCOSY显示,H-11与H-13存在W型耦合,由此推断H-13为β构型，其核磁数据(表1)及二维相关如下：船盔乌头A(1)的关键HMBC和1H-1HCOSY相关：在量子化学计算方面，计算VCD图谱，然后利用设定构型的结构计算值与实验值比较，获得确定的构型。本专利技术所得到的船盔乌头中二萜生物碱化合物，其中船盔乌头素B(2)，通过13CNMR及ESIMS(m/z[M+H]+＝729),可以确定其分子式为C47H56N2O5,通过红外图谱3429,1719cm-1存在较强吸收,可以判断分子含有羟基和羰基。通过13CNMR(表2)与化合物1比较,十分相似,化合物2多了一个苯甲酰基在2位取代。然后通过2DNMR(HMBC和1H-1HCOSY)确定其平面结构。通过ROESY和文献确定其相对构型,H-2出现一个brs峰(w1/2＝10.8Hz),表明H-2与H-1β或者H-3β没有直立键(a-a)耦合,那么H-2作为平伏键(β构型)。H-11(J＝8.8Hz)及H-9,表明两者二面角为零度,以此确定H-11为β构型[5]。根据1H-1HCOSY显示，H-11与H-13存在W型耦合，由此推断H-13为β构型。其核磁数据(表2)及二维相关如下:船盔乌头B(2)的关键HMBC及1H-1HCOSY相关：本专利技术所得到船盔乌头中二萜生物碱化合物，其中船盔乌头素C(3)为白色粉末，根据HREIMSm/z447.2779(calcdforC29H37NO3,447.2773[M]+),确定船盔乌头C(3)分子式为C29H37NO3,具有11个不饱和度。红外图谱3441及1641cm-1处强吸收确定分子中羟基和双键的存在。通过分析13CNMR(表2)和DEPT谱,确定船盔乌头素C(3)具有29个碳原子,其中包括2个甲基,10个亚甲基,10个次甲基及7个季碳。根据2DNMR图谱分析,确定其平面结构。船盔乌头素C(3)的关键HMBC及1H-1HCOSY相关表1船盔乌头A(1)、船盔乌头B(2)、船盔乌头C(3)的氢谱数据其中：船盔乌头A(1)、船盔乌头B(2)：400MHz船盔乌头C(3)：600MHz溶剂：pyridine-d5表2船盔乌头A(1)、船盔乌头B(2)、船盔乌头C(3)碳谱数据其中，船盔乌头A(1)、船盔乌头B(2)：100MHz船盔乌头C(3)：150MHz溶剂：pyridine-d5对提取出来的船盔乌头A(1)、船盔乌头B(2)、船盔乌头C(3)在五株肿瘤细胞人早幼粒白血病细胞(HL-60)、人肝癌细胞(SMMC-7721)、人肺癌细胞(A549)、人乳腺癌(MCF-7)、人结肠癌细胞(SW480)进行细胞毒活性筛选发现，船盔乌头B(2)具有较好的抗肿瘤活性(表3)，可用于治疗和预防癌症的药物中。表3、船盔乌头A(1)、船盔乌头B(2)、船盔乌头C(3)细胞毒活性筛选结果经本专利技术制备的船盔乌头中二萜生物碱化合物，该化合物1为船盔乌头素A(1)；化合物2为船盔乌头素B(2)；化合物3为船盔乌头素C(3)，化合物2具有较好的抗肿瘤活性。可用于制备抗肿瘤药物。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种船盔乌头中二萜生物碱化合物，其特征在于该化合物1为船盔乌头素A(1)；化合物2为船盔乌头素B(2)；化合物3为船盔乌头素C(3)；船盔乌头素A(1)为双二萜生物碱，其分子式为C

【技术特征摘要】
1.一种船盔乌头中二萜生物碱化合物，其特征在于该化合物1为船盔乌头素A(1)；化合物2为船盔乌头素B(2)；化合物3为船盔乌头素C(3)；船盔乌头素A(1)为双二萜生物碱，其分子式为C40H50N2O4；船盔乌头素B(2)为双二萜生物碱，其分子式为C47H56N2O5；船盔乌头素C(3)分子式为C29H37NO3。2.如权利要求1所述的一种船盔乌头中二萜生物碱化合物，其特征在于，所述船盔乌头素A(1)结构式为。3.权利要求1所述的一种船盔乌头中二萜生物碱化合物，其特征在于，所述船盔乌头素B(2)结构式为。4.权利要求1所述的一种船盔乌头中二萜生物碱化合物，其特征在于，所述船盔乌头素C(3)结构式为。5.如权利要求1所述的一种船盔乌头中二萜生物碱化合物的制备方法，其特征在于，具体操作按下列步骤进行...

【专利技术属性】
技术研发人员：何江波，吕小满，句红萍，陶剑，余珊，王波，张雪梅，朱华结，
申请(专利权)人：昆明学院，
类型：发明
国别省市：云南,53