【技术实现步骤摘要】
一种丙酮酸和左旋多巴联产工艺与应用
本专利技术涉及一种丙酮酸和左旋多巴联产工艺与应用，属于发酵与酶催化工艺领域。
技术介绍
左旋多巴(3,4-dihydroxyphenyl-L-ananine，简称L-DOPA)的化学名称为3,4-二羟基苯基丙氨酸，其结构式为：作为一种重要的生物活性物质，L-DOPA是从L-酪氨酸到儿茶酚或黑色素的生化代谢途径过程中的重要中间产物。上世纪60年代，国外许多学者开始致力于微生物酶法合成L-DOPA的研究。为了提高L-DOPA产量和底物转化率，研究者们对微生物酶法合成L-DOPA的工艺方法进行了大量研究。酪氨酸酚裂解酶(Tyrosinephenollyase，TPL，E.C.4.1.99.2)，又名β-酪氨酸酶，该酶分子量约200kDa，是一个四聚体酶。TPL酶以磷酸吡哆醛(pyridoxal-phosphate，PLP)为辅酶，以钾离子和氨离子为辅助因子，TPL可以催化L-酪氨酸发生β-消去反应生成苯酚、丙酮酸和氨。由于这个反应是可逆的，将邻苯二酚代替苯酚后，可由邻苯二酚、丙酮酸和氨可在TPL催化下生成L-DOPA。左旋多巴的前体在...
【技术保护点】
1.一种丙酮酸和左旋多巴联产工艺，其特征在于：(1)利用光滑球拟酵母发酵获得丙酮酸料液，料液经过陶瓷膜除菌，超滤膜除蛋白、核酸、色素，滤液进行浓缩至丙酮酸浓度为150‑300g/L；(2)根据丙酮酸的摩尔量向丙酮酸浓缩液加入一定量的邻苯二酚、醋酸铵、EDTA、亚硫酸钠，调pH7.0‑9.0，配制成酶催化底物溶液；(3)利用酪氨酸酚裂解酶基因工程菌发酵获得酪氨酸酚裂解酶菌液，离心收菌体，高压均质机破胞，离心，收集酶液；(4)酶液加入一定量的底物溶液，搅匀，25℃，密封震荡反应；所述底物溶液为丙酮酸浓缩液配制，过流加底物溶液控制邻苯二酚的浓度0‑10g/L，产物达到120g/L...
【技术特征摘要】
1.一种丙酮酸和左旋多巴联产工艺，其特征在于：(1)利用光滑球拟酵母发酵获得丙酮酸料液，料液经过陶瓷膜除菌，超滤膜除蛋白、核酸、色素，滤液进行浓缩至丙酮酸浓度为150-300g/L；(2)根据丙酮酸的摩尔量向丙酮酸浓缩液加入一定量的邻苯二酚、醋酸铵、EDTA、亚硫酸钠，调pH7.0-9.0，配制成酶催化底物溶液；(3)利用酪氨酸酚裂解酶基因工程菌发酵获得酪氨酸酚裂解酶菌液，离心收菌体，高压均质机破胞，离心，收集酶液；(4)酶液加入一定量的底物溶液，搅匀，25℃，密封震荡反应；所述底物溶液为丙酮酸浓缩液配制，过流加底物溶液控制邻苯二酚的浓度0-10g/L，产物达到120g/L以上，停止流加底物溶液，当反应液中邻苯二酚含量低于0.2g/L，停止反应。2.根据权利要求1所述的一种丙酮酸和左旋多巴联产工艺，其特征在于，步骤(1)中发酵罐发酵过程如下：添加15％的葡萄糖，不添加CaCO3，其他成分与发酵培养基相同。用5MNaOH调节pH5.5，转速为500，通氧量1：1，不控制溶氧，在相应温度的条件下进行发酵，培养50-72h，丙酮酸达到75g/L以上，产物不再增加，停止发酵。3.根据权利要求1所述的一种丙酮酸和左旋多巴联产工艺，其特征在于，步骤(3)中LB培养基：胰蛋白胨10g/L、酵母提取物0.5g/L、氯化钠...
【专利技术属性】
技术研发人员：储消和，林挺，吴黎诚，生英涛，陈万河，程跃，徐顺清，沈建，方明山，余炜，柳鹏福，孙俊杰，
申请(专利权)人：浙江工业大学，浙江绿创生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33
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