催化高浓度底物的重组球孢白僵菌及其构建方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种催化高浓度底物的重组球孢白僵菌及其构建方法和应用。发明专利技术基于代谢工程和外排转运工程策略，将细胞色素P450酶或选自NPF蛋白家族、SWEET蛋白家族中的跨膜转运蛋白编码基因构建至产R‑2‑(4‑羟基苯氧基)丙酸的球孢白僵菌中，构建了能够稳定催化高浓度R‑2‑苯氧基丙酸转化为R‑2‑(4‑羟基苯氧基)丙酸的重组球孢白僵菌。实验组较对照菌株相比，对R‑2‑苯氧基丙酸浓度的耐受能力显著提高，且发酵周期缩短。本发明专利技术提出的构建方法为改造球孢白僵菌催化高浓度R‑2‑苯氧基丙酸转化为R‑2‑(4‑羟基苯氧基)丙酸提供重要靶点，具有工业化应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程领域，具体涉及生物发酵制备r-2-(4-羟基苯氧基)丙酸领域，更具体涉及催化高浓度r-2-苯氧基丙酸生成r-2-(4-羟基苯氧基)丙酸的重组球孢白僵菌及其构建方法与应用。

技术介绍

1、r-2-(4-羟基苯氧基)丙酸是合成光学纯芳氧苯氧丙酸类除草剂的重要中间体。目前，市场上很多除草剂的有效成分都是以外消旋体的方式存在，其中芳氧苯氧丙酸类除草剂是近四十年开发的一类典型的具有外消旋结构的除草剂。该类除草剂的主要特点是除草效果好、保质期长、对农作物无毒性以及在土壤中容易降解，即使过量使用也不会对环境造成污染，至今仍是性能最好的除草剂种类之一。

2、目前，国内外获取r-2-(4-羟基苯氧基)丙酸的方法主要采用化学合成法及近几年出现的微生物发酵法。其中，化学合成法存在安全性低、原料成本高昂、步骤多、周期长、光学活性弱、收率低，且产生污染环境的副产物等缺点。微生物发酵法具有原料易获取、生产成本低、产能易扩大等优点，是r-2-(4-羟基苯氧基)丙酸产业化的发展方向。但目前主要通过筛选优良菌株或优化其发酵条件的方法来提高r-2-(4-羟基本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种催化高浓度底物的重组球孢白僵菌的构建方法，其特征在于，包括：

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述跨膜转运蛋白来源于拟南芥Arabidopsis thaliana。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述底盘菌为Beauveria bassianaZJB23323，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO:M 2023584，保藏日期：2023年04月21日，地址：中国，武汉，武汉大学，430072。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述在底盘菌中过表达...

【技术特征摘要】

1.一种催化高浓度底物的重组球孢白僵菌的构建方法，其特征在于，包括：

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述跨膜转运蛋白来源于拟南芥arabidopsis thaliana。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述底盘菌为beauveria bassianazjb23323，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：cctcc no:m 2023584，保藏日期：2023年04月21日，地址：中国，武汉，武汉大学，430072。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述在底盘菌中过表达细胞色素p450酶和植物源跨膜转运蛋白的方法包括：运用liac/ssdna/peg高效转化法将过表达所述细胞色素p450酶或跨膜转运蛋白编码基因的重组载体导入底盘菌中，筛选后获得所述的重组球孢白僵菌。

6.如权利要求1~5任一所述的方法构建得到的重组球孢白僵菌。

7.如权利要求1~5任一所述的方法构建得到的重组球孢白僵菌或权利要求6所述的重组球孢白僵菌在发酵制备r-2-(4-羟基苯氧基)丙酸中的应用。

【专利技术属性】
技术研发人员：岑宇科，张子杰，薛亚平，郑裕国，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：