【技术实现步骤摘要】
一种提高酪氨酸酚裂解酶催化生产左旋多巴效率的方法
本专利技术涉及一种提高酪氨酸酚裂解酶催化生产左旋多巴效率的方法与应用，属于酶催化工艺领域。
技术介绍
左旋多巴(3,4-dihydroxyphenyl-L-ananine，简称L-DOPA)的化学名称为3,4-二羟基苯基丙氨酸，其结构式为：作为一种重要的生物活性物质，L-DOPA是从L-酪氨酸到儿茶酚或黑色素的生化代谢途径过程中的重要中间产物。上世纪60年代，国外许多学者开始致力于微生物酶法合成L-DOPA的研究。为了提高L-DOPA产量和底物转化率，研究者们对微生物酶法合成L-DOPA的工艺方法进行了大量研究。酪氨酸酚裂解酶(Tyrosinephenollyase，TPL，E.C.4.1.99.2)，又名β-酪氨酸酶，该酶分子量约200kDa，是一个四聚体酶。TPL酶以磷酸吡哆醛(pyridoxal-phosphate，PLP)为辅酶，以钾离子和氨离子为辅助因子，TPL可以催化L-酪氨酸发生β-消去反应生成苯酚、丙酮酸和氨。由于这个反应是可逆的，将邻苯二酚代替苯酚后，可由邻苯二酚、丙酮酸和氨可在TPL催化下生成L...
【技术保护点】
1.一种提高酪氨酸酚裂解酶催化生产左旋多巴效率的方法，其特征在于：(1)挑单菌落接种到含LB培养基的试管中，加卡那霉素(50mg/L)30‑37℃，220rpm，培养12‑16h，得到一级种子；(2)将所述一级种子接种到含发酵培养基的摇瓶中，30‑37℃，200‑250rpm，培养2‑5h，加IPTG至终浓度0.6mM，28‑32℃，180‑220rpm，培养10‑12h；所述发酵培养基组分如下：胰蛋白胨12g/L、酵母提取物24g/L、甘油5g/L，磷酸二氢钾2.31g/L、三水磷酸氢二钾16.43g/L；(3)离心收菌，得到菌体，超声破胞，高速离心，获得上清酶液；(4)...
【技术特征摘要】
1.一种提高酪氨酸酚裂解酶催化生产左旋多巴效率的方法，其特征在于：(1)挑单菌落接种到含LB培养基的试管中，加卡那霉素(50mg/L)30-37℃，220rpm，培养12-16h，得到一级种子；(2)将所述一级种子接种到含发酵培养基的摇瓶中，30-37℃，200-250rpm，培养2-5h，加IPTG至终浓度0.6mM，28-32℃，180-220rpm，培养10-12h；所述发酵培养基组分如下：胰蛋白胨12g/L、酵母提取物24g/L、甘油5g/L，磷酸二氢钾2.31g/L、三水磷酸氢二钾16.43g/L；(3)离心收菌，得到菌体，超声破胞，高速离心，获得上清酶液；(4)酶液加入底物溶液，搅匀，25℃，密封震荡反应；所述底物溶液包括14-16g/L的丙酮酸钠、10-12g/L的邻苯二酚、50-60g/L的醋酸铵、2-5g/L的亚硫酸钠、1-3g/L的EDTA，调pH7.5-8.5，反应产物浓度达到20g/L以上，加入10-30g/L的左旋多巴晶体，诱导产品提前析晶。2.根据权利要求1所述的一种提高酪氨酸酚裂解酶催化生产左旋多巴效率的方法，其特征在于，所述的LB培养基：胰蛋白胨10g/L、酵母提取物0.5g/L、氯化钠10g/L、纯水。3.根据权利要求2所述的一种提高酪氨酸酚裂解酶催化生产左旋多巴效率的方法，其特征在于，步骤(2)中一级种子接种到100ml的发...
【专利技术属性】
技术研发人员：储消和，吴黎诚，生英涛，陈万河，程跃，徐顺清，沈建，方明山，余炜，柳鹏福，孙俊杰，
申请(专利权)人：浙江工业大学，浙江绿创生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33
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