The invention relates to a method for improving the quality and yield of levodopa products, including: (1) fermentation to obtain tyrosine phenol lyase; (2) preparation of substrate solution; (3) preparation of feeding liquid: after boiling tap water, nitrogen gas is passed through and the temperature is lowered to 10 25 C, antioxidant is added to 2 5g/L sodium sulfite and 0.5 2g/L ascorbic acid, followed by 100 160g/L sodium pyruvate and 100 160 g/L sodium pyruvate. Catechol in g/L, ammonium acetate in 10 20g/L, EDTA in 1 3g/L, adjusting pH 7.5 8.5. (4) Substrate solution keeps through nitrogen all the time. After adding enzyme into substrate solution, reaction vessel is sealed and oxygen-insulated. Small amount of nitrogen is kept under positive pressure, stirred and sealed at 16 25 C. The reaction is stopped by adding feeding solution (feeding vessel is sealed and a small amount of nitrogen is always put in to keep positive pressure). The feeding fluid is filled up and the catechol concentration is lower than 0.05g/L. The invention improves the product quality, improves the conversion rate of catechol and the product yield, and has the application value of industrial production.
【技术实现步骤摘要】
一种提高左旋多巴产品品质和产率的方法
本专利技术涉及一种再酶催化生产左旋多巴的过程中提高产品品质和产率的方法与应用，属于酶催化工艺领域。
技术介绍
左旋多巴(3,4-dihydroxyphenyl-L-ananine，简称L-DOPA)的化学名称为3,4-二羟基苯基丙氨酸，其结构式为：作为一种重要的生物活性物质，L-DOPA是从L-酪氨酸到儿茶酚或黑色素的生化代谢途径过程中的重要中间产物。上世纪60年代，国外许多学者开始致力于微生物酶法合成L-DOPA的研究。为了提高L-DOPA产量和底物转化率，研究者们对微生物酶法合成L-DOPA的工艺方法进行了大量研究。酪氨酸酚裂解酶(Tyrosinephenollyase，TPL，E.C.4.1.99.2)，以磷酸吡哆醛(pyridoxal-phosphate，PLP)为辅酶，催化邻苯二酚、丙酮酸和氨生成L-DOPA。由于底物邻苯二酚和产物左旋多巴在溶液中易被氧化，生成黑色氧化物，对产品品质造成严重影响，并降低了L-DOPA的产率。
技术实现思路
本专利技术的目的是降低转化液中邻苯二酚和多巴的氧化，提高转化率和产品收率。具体操作...
【技术保护点】
1.一种提高左旋多巴产品品质和产率的方法，其特征在于：(1)发酵获取酪氨酸酚裂解酶；(2)配制底物溶液：自来水煮沸后，通氮气并降温至10‑25℃，先加入抗氧化剂加入2‑5g/L的亚硫酸钠和0.5‑2g/L的抗坏血酸，再加入14‑16g/L的丙酮酸钠、10‑12g/L的邻苯二酚、50‑60g/L的醋酸铵、1‑3g/L的EDTA，调pH7.5‑8.5；(3)配制补料液：自来水煮沸后，通氮气并降温至10‑25℃，先加入抗氧化剂加入2‑5g/L的亚硫酸钠和0.5‑2g/L的抗坏血酸，再加入100‑160g/L的丙酮酸钠、100‑160g/L的邻苯二酚、10‑20g/L的醋酸铵、1‑...
【技术特征摘要】
1.一种提高左旋多巴产品品质和产率的方法，其特征在于：(1)发酵获取酪氨酸酚裂解酶；(2)配制底物溶液：自来水煮沸后，通氮气并降温至10-25℃，先加入抗氧化剂加入2-5g/L的亚硫酸钠和0.5-2g/L的抗坏血酸，再加入14-16g/L的丙酮酸钠、10-12g/L的邻苯二酚、50-60g/L的醋酸铵、1-3g/L的EDTA，调pH7.5-8.5；(3)配制补料液：自来水煮沸后，通氮气并降温至10-25℃，先加入抗氧化剂加入2-5g/L的亚硫酸钠和0.5-2g/L的抗坏血酸，再加入100-160g/L的丙酮酸钠、100-160g/L的邻苯二酚、10-20g/L的醋酸铵、1-3g/L的EDTA，调pH7.5-8.5；(4)底物溶液始终保持通氮气，酶加入底物溶液后反应容器密封隔氧，通小量氮气保持正压，搅匀，16-25℃，密封震荡反应；流加补料溶液(补料容器密封，并始终通入小量氮气保持正压)，补料液流加完毕，邻苯二酚浓度低于0.05g/L，停止反应。2.根据权利要求1所述的一种提高左旋多巴产品品质和产率的方法，其特征在于步骤(2)配置的底物溶液是自来水煮沸后通氮气并降温至25℃，先加入2g/L亚硫酸钠和1g/L的抗坏血酸，再加入14g/L的丙酮酸钠...
【专利技术属性】
技术研发人员：储消和，林挺，吴黎诚，生英涛，陈万河，程跃，徐顺清，沈建，方明山，余炜，柳鹏福，孙俊杰，
申请(专利权)人：浙江工业大学，浙江绿创生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33
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