用于治疗法布里病的方法和组合物技术

本公开提供了核酸酶以及使用这些核酸酶将编码治疗性α半乳糖苷酶A(α‑Gal A)蛋白诸如酶的序列插入细胞中的方法，从而提供用于治疗和/或预防法布里病的蛋白质或细胞治疗剂。还提供了用于表达至少一种α‑Gal A蛋白的组合物。

Method and composition for the treatment of Fabry's disease

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗法布里病的方法和组合物相关申请的交叉引用本专利申请要求2016年10月20日提交的美国临时申请No.62/410,543、2017年1月9日提交的美国临时申请No.62/444,093、2017年2月13日提交的美国临时申请No.62/458,324、2017年5月5日提交的美国临时申请No.62/502,058、2017年6月7日提交的美国临时申请No.62/516,373和2017年8月31日提交的美国临时申请No.62/552,792的权益，这些临时申请的公开内容据此以引用的方式整体并入。
本公开涉及预防和/或治疗法布里病(FabryDisease)和基因治疗领域。
技术介绍
基因治疗在人类治疗的新时代具有巨大的潜力。这些方法将允许治疗迄今为止通过标准医疗实践尚未解决的病症。一个特别有希望的领域是能够将转基因加入细胞中以使该细胞表达此前未在该细胞中产生或次优产生的产物。该技术的用途的实例包括插入编码治疗性蛋白的基因，插入在细胞或个体中某种程度上缺乏的编码蛋白质的编码序列，以及插入编码结构性核酸(诸如微RNA)的序列。转基因可以通过多种方式递送至细胞，使得转基因整合到细胞自身的基因组并维持在其中。近年来，已经开发了转基因整合策略，该策略使用通过位点特异性核酸酶进行的切割，以便靶向插入选定的基因组基因座中(参见例如，共同拥有的美国专利7,888,121)。核酸酶(诸如锌指核酸酶(ZFN)、转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN))或核酸酶系统(诸如RNA指导的CRISPR/Cas系统(利用经工程化的指导RNA))对靶基因具有特异性，并且可以用于产生这样的结果：使转基因构建体通过同源介导的修复(HDR)或在非同源性末端接合(NHEJ)驱动的过程期间通过末端捕获来插入。参见例如美国专利No.9,394,545、9,255,250、9,200,266、9,045,763、9,005,973、9,150,847、8,956,828、8,945,868、8,703,489、8,586,526、6,534,261、6,599,692、6,503,717、6,689,558、7,067,317、7,262,054、7,888,121、7,972,854、7,914,796、7,951,925、8,110,379、8,409,861；美国专利公开20030232410、20050208489、20050026157、20050064474、20060063231、20080159996、201000218264、20120017290、20110265198、20130137104、20130122591、20130177983、20130196373、20140120622、20150056705、20150335708、20160030477和20160024474，这些专利的公开内容以引用的方式整体并入。可以以多种方式将转基因引入和维持在细胞中。按照“cDNA”方法，转基因被引入细胞中，从而使转基因维持在染色体外，而不是通过整合到细胞的染色质中。转基因可以维持在环状载体(例如，质粒或非整合性病毒载体(诸如AAV或慢病毒))上，其中该载体可以包括转录调控序列(诸如启动子、增强子、多聚A信号序列、内含子和剪接信号)(美国公开No.20170119906)。另一种方法涉及将转基因插入高表达的安全港位置，诸如白蛋白基因(参见美国专利No.9,394,545)。该方法称为体内蛋白质替代平台(InVivoProteinReplacement)或IVPRP。按照这种方法，通过核酸酶介导的靶向插入将转基因插入安全港(例如，白蛋白)基因，其中转基因的表达由白蛋白启动子驱动。转基因被工程化为包含信号序列以帮助由转基因编码的蛋白质的分泌/外排。“安全港”基因座包括诸如人类细胞中的AAVS1、HPRT、白蛋白和CCR5基因，以及鼠科动物细胞中的Rosa26的基因座。参见例如美国专利No.7,888,121、7,972,854、7,914,796、7,951,925、8,110,379、8,409,861、8,586,526、美国专利公开20030232410、20050208489、20050026157、20060063231、20080159996、201000218264、20120017290、20110265198、20130137104、20130122591、20130177983、20130177960和20140017212。与依赖于转基因的随机整合的经典整合方法相比，核酸酶介导的整合提供了改善的转基因表达、增加的安全性和表达持久性的前景，因为它允许精确的转基因定位以使基因沉默或附近癌基因的活化的风险最小化。虽然将转基因递送至靶细胞是完全实施该技术必须克服的一个障碍，但是必须克服的另一个问题是确保在转基因被插入细胞中并表达之后，这样编码的基因产物必须达到生物体的必要位置，并且在足够的局部浓度下有效。对于以缺乏蛋白质或存在异常非功能性蛋白质为特征的疾病，转基因编码的野生型蛋白质的递送可以是非常有帮助的。溶酶体贮积病(LSD)是一组罕见的代谢单基因病，它们的特征为缺乏通常参与废脂质、糖蛋白和粘多糖分解的各种功能性溶酶体蛋白。这些疾病的特征为这些化合物在细胞中的积累，因为由于特定酶的功能丧失而不能将它们加工用于再循环。最常见的例子是戈谢(Gaucher)病(葡萄糖脑苷脂酶缺乏-基因名称：GBA)、法布里病(α半乳糖苷酶A缺乏-GLA)、亨特氏(Hunter)症(艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶缺乏-IDS)、贺勒氏(Hurler)症(α-L-艾杜糖醛酸酶缺乏-IDUA)、庞贝氏(Pompe)症(α-葡萄糖苷酶(GAA))和尼曼-匹克(Niemann-Pick)病(神经鞘磷脂磷酸二酯酶1缺乏-SMPD1)。当把所有组合在一起时，LSD在7000名新生儿群体中的发病率约为1。另见美国专利公开No.20140017212、2014-0112896和20160060656。例如，法布里病是α半乳糖苷酶A(α-GalA)缺乏所导致的X连锁的鞘糖脂代谢病。它与鞘糖脂(包括球形三酰基神经酰胺(也称为GL-3和Gb3)和球形三酰基鞘氨醇(lyso-Gb3)、球形二酰基神经酰胺(galabioasylceramide)和B血型物质)的进行性沉积相关。疾病的症状多种多样，可以包括灼热、刺痛(肢端感觉异常)或剧烈疼痛发作(它们称为“法布里危象”)，这些症状可以持续数分钟至数天。其他症状包括出汗减少、运动耐受性低、红紫色皮疹(称为血管角化瘤)、眼部异常、胃肠道问题、心脏问题(诸如心脏扩大和心脏病发作)、可导致肾功能衰竭的肾脏问题和CNS问题以及一般情况下法布里病患者的预期寿命大幅缩短。目前对法布里病的治疗可涉及使用两种不同的人类α-GalA制剂(即，阿加糖酶(agalsidase)β或阿加糖酶α)进行的酶替代疗法(ERT)，这需要每两周一次对患者进行昂贵和耗时的输注(通常在约0.2-1mg/kg之间)。这种疗法仅用于治疗症状并且不是治愈性的，因此在患者的余生中必须重复给患者施用这些蛋白质，并且可能产生针对所注射的蛋白质的中和抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种在细胞中表达至少一种α半乳糖苷酶A(α‑Gal A)蛋白的方法，所述方法包括将编码所述至少一种α‑Gal A蛋白的GLA转基因施用于所述细胞，以使得所述α‑Gal A蛋白在所述细胞中表达。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.10.20 US 62/410,543;2017.01.09 US 62/444,093;1.一种在细胞中表达至少一种α半乳糖苷酶A(α-GalA)蛋白的方法，所述方法包括将编码所述至少一种α-GalA蛋白的GLA转基因施用于所述细胞，以使得所述α-GalA蛋白在所述细胞中表达。2.如权利要求1所述的方法，其中所述细胞在患有法布里病的受试者中。3.如权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述转基因包含cDNA。4.如权利要求2所述的方法，其中将所述转基因施用于所述受试者的肝脏。5.如权利要求1至4中任一项所述的方法，所述方法还包括施用一种或多种核酸酶，所述核酸酶在受试者的肝细胞中切割内源性白蛋白基因，以使得所述转基因整合到所述白蛋白基因中并且由所述白蛋白基因表达。6.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中由所述转基因表达的所述α-GalA蛋白使所述受试者中的鞘糖脂的量降低至少2倍。7.如权利要求1所述的方法，其中所述转基因包含野生型GLA序列或经密码子优化的GLA序列。8.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述转...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·W·赫斯顿，
申请(专利权)人：桑格摩生物治疗股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US