一种新的环状RNA circCRKL在前列腺癌治疗中的应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药技术领域，具体公开环状RNA circCRKL或其增效剂在制备药物中的应用，所述药物用于治疗前列腺癌。本发明专利技术首次发现circCRKL与前列腺癌的相关性，通过细胞功能学实验，发现过表达circCRKL以后，可以显著的抑制前列腺癌的增殖、侵袭、迁移和集落形成能力，表明circCRKL在前列腺癌的发生发展过程中起到重要的调节作用。同时，裸鼠成瘤实验表明circCRKL过表达显著抑制了前列腺癌细胞在动物体内的生长，进一步证明circCRKL对于前列腺癌细胞的抑制作用。circCRKL对于前列腺癌的增殖、迁移、侵袭和集落形成的生物学行为具有显著的抑制作用，有望为前列腺癌患者提供新的治疗靶标和方向。

Application of a new cyclic RNA circCRKL in the treatment of prostate cancer

The invention relates to the field of biomedical technology, in particular to the application of cyclic RNA circCRKL or its synergist in the preparation of drugs for the treatment of prostate cancer. The present invention first discovers the correlation between circCRKL and prostate cancer. Through cell function experiments, it is found that overexpression of circCRKL can significantly inhibit the proliferation, invasion, migration and colony formation of prostate cancer, indicating that circCRKL plays an important regulatory role in the occurrence and development of prostate cancer. At the same time, the over-expression of circCRKL in nude mice significantly inhibited the growth of prostate cancer cells in vivo, which further demonstrated the inhibitory effect of circCRKL on prostate cancer cells. CircCRKL can significantly inhibit the proliferation, migration, invasion and colony formation of prostate cancer, which is expected to provide new therapeutic targets and directions for prostate cancer patients.

【技术实现步骤摘要】
一种新的环状RNAcircCRKL在前列腺癌治疗中的应用
本专利技术涉及生物医药
，具体地说，是一种新的环状RNAcircCRKL在前列腺癌治疗中的应用。
技术介绍
前列腺癌是男性最常见的恶性肿瘤之一，2019年美国肿瘤协会预测新诊断前列腺癌174650例，占男性肿瘤的20％，位于男性肿瘤发病率第一位；死亡31620例，位于男性肿瘤死亡率第二位。在我国，近年来随着生活水平的提高以及前列腺特异性抗原(prostatespecificantigen，PSA)筛查的普及，前列腺癌发病率呈上升趋势，而发病年龄随年份增加有所降低。同时，年龄标准化的死亡率从2000年到2011年一直呈上升趋势。虽然PSA检测广泛用于前列腺癌的筛查和诊断，但是因其导致的过度诊断和治疗，现在PSA检测已经不被专家推荐。因此，寻找更加准确和特异的生物标记物已经成为人们日益迫切的需求。目前，几种类型的生物标志物被专家推荐应用于前列腺癌患者的诊断和预后监测，包括基于血液的尿液样本为基础的PCA3,ExoDxProstate以组织样本为基础的然而，这些生物标记物仍缺乏有力的证据被纳入前列腺癌的常规筛查和治疗流程中。前列腺癌发病机制复杂，许多基因都参与其发病过程，如PTEN、AR、GOLPH3、PAK1等基因，其中雄激素及雄激素受体(androgenreceptor,AR)信号通路在前列腺癌发生发展过程中占据重要的地位。早期局灶性前列腺癌可通过根治性手术、放射性粒子植入或外放射达到治愈效果，但晚期前列腺癌的治疗仍以去雄激素治疗(androgendeprivationtherapy,ADT)为主，最终前列腺癌会不可逆地转化为去雄抵抗前列腺癌(castration-resistantprostatecancer,CRPC)。由于前列腺癌的异质性和发病机制复杂性，临床治疗手段疗效有限，患者会很快进展到前列腺癌不可治愈阶段，给患者本人的健康及家庭造成了严重的危害。因此，深入探讨前列腺癌的发病机制，寻找新的治疗靶点已经成为临床治疗的迫切需要。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术中的不足，提供环状RNA的新用途。第一个方面，本专利技术提供环状RNAcircCRKL或其增效剂在制备药物中的应用，所述药物用于治疗前列腺癌。在上述应用中，作为一个优选方案，所述增效剂为circCRKL过表达质粒载体。第二个方面，本专利技术提供环状RNAcircCRKL或其增效剂在制备药物中的应用，所述药物用于抑制前列腺癌恶性生物学行为。在上述应用中，作为一个优选方案，所述恶性生物学行为是指前列腺癌的增殖，过表达circCRKL能够抑制前列腺癌的增殖。在上述应用中，作为一个优选方案，所述恶性生物学行为是指前列腺癌的迁移，过表达circCRKL能够抑制前列腺癌的迁移。在上述应用中，作为一个优选方案，所述恶性生物学行为是指前列腺癌的侵袭，过表达circCRKL能够抑制前列腺癌的侵袭；在上述应用中，作为一个优选方案，所述恶性生物学行为是指前列腺癌的集落形成，过表达circCRKL能够抑制前列腺癌的集落形成。第三个方面，本专利技术提供一种治疗前列腺癌的药物组合物，所述药物组合物包括如上所述的环状RNA或增加所述环状RNA的表达量的试剂中的至少一种。第四个方面，本专利技术提供一种治疗前列腺癌的表达载体，所述表达载体表达如上所述的环状RNA。所述的载体包括病毒载体和真核载体。其中病毒载体可以是任意适当的载体，包括但不限于逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺病毒相关病毒载体、疱疹病毒载体、甲病毒载体等。真核载体可以是任意适当的载体，包括但不限于pCMT-Myc表达载体、pcDNA3.0表达载体、pcDNA6.0表达载体、pEGFP表达载体、PefBos表达载体、pTet表达载体、pTRE表达载体、或者是在已公开表达载体的基础上经改造获得的载体。本专利技术中，所述的增效剂包括了激动剂、上调剂、稳定剂等，是指任何能够促进circCRKL的表达、或促进circCRKL的活性、或促进circCRKL的有效作用时间、或促进circCRKL的稳定性的物质。其中增效剂的靶标不限于circCRKL本身，还可以是circCRKL的上下游。例如可以是编码circCRKL的基因组序列、circCRKL的靶基因、调控circCRKL的蛋白或基因。本专利技术中，所述的药物还可以包含药学上可接受的载体，例如可以是药物稀释剂、缓冲剂、赋形剂等。所述药物可以按照常规方法制备成各种剂型，包括显微注射剂，或适于转染的注射液、片剂等。所述的药物可以单独施用，或者与其他能够治疗前列腺癌的药物进行组合物使用，受试者可以是人类或其他哺乳动物。本专利技术首次发现circCRKL与前列腺癌的相关性，使用慢病毒包装质粒并转染前列腺癌细胞DU145和PC-3细胞，构建了过表达circCRKL的稳转细胞和阴性对照细胞。通过细胞功能学实验，我们发现过表达circCRKL以后，可以显著的抑制前列腺癌的增殖、侵袭、迁移和集落形成能力，表明circCRKL在前列腺癌的发生发展过程中起到重要的调节作用。同时，裸鼠成瘤实验表明circCRKL过表达显著抑制了前列腺癌细胞在动物体内的生长，进一步证明了circCRKL对于前列腺癌细胞的抑制作用。上述体内和体外的功能学实验证实circCRKL对于前列腺癌的增殖、迁移、侵袭和集落形成的生物学行为具有显著的抑制作用，有望为前列腺癌患者提供新的治疗靶标和方向。附图说明图1.质粒示意图。图2.质粒转染后circCRKL表达量。图3.扩增产物Sanger测序峰图。图4.CircCRKL在前列腺细胞系的表达。通过实时定量PCR在多种细胞系中检测circCRKL的表达，包括RWPE-1、PC-3、DU145和LNCaP细胞(每种细胞系重复n＝3次)。结果用平均值±标准误表示。*P值<0.05，**P值<0.01。图5.前列腺癌稳转细胞系构建。图中显示了在第五次传代时过表达circCRKL的DU145细胞(第一二行)和PC-3细胞(第三四行)的光镜图像、荧光图像和合并图像。大约90％的细胞是GFP阳性的。通过实时定量PCR检测，在稳转过表达细胞中(右侧上方为DU145细胞，右侧下方为PC-3细胞)，circCRKL过表达组(circCRKLoe)中circCRKL表达量高于阴性对照(NC)细胞组。结果用平均值±标准误表示。*P值<0.05，**P值<0.01，***P值<0.001。图6.过表达circCRKL对于前列腺癌增殖能力的影响。DU145细胞和PC-3细胞分别转染空质粒病毒和circCRKL过表达病毒构建稳转细胞系。CCK-8试剂盒检测circCRKL过表达组(circCRKLoe)和阴性对照组(NC)的细胞增殖活性。(A)DU145细胞。(B)PC-3细胞。数据结果用折线图表示。组间比较采用独立样本t检验。结果用平均值±标准误表示。实验重复次数n＝3。*P值<0.05，**P值<0.01，***P值<0.001。图7.过表达circCRKL对于前列腺癌细胞迁移能力的影响。使用Transwell迁移实验测定过表达circCRKL细胞组(circCRKLoe)和阴性对照细胞(NC)组的迁移本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.环状RNA circCRKL或其增效剂在制备药物中的应用，其特征在于，所述药物用于治疗前列腺癌。

【技术特征摘要】
1.环状RNAcircCRKL或其增效剂在制备药物中的应用，其特征在于，所述药物用于治疗前列腺癌。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述增效剂为circCRKL过表达质粒载体。3.环状RNAcircCRKL或其增效剂在制备药物中的应用，其特征在于，所述药物用于抑制前列腺癌恶性生物学行为。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述药物用于抑制前列腺癌的增殖。5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈刚，宋振宇，晁凡，马哲，
申请(专利权)人：复旦大学附属金山医院，
类型：发明
国别省市：上海,31