本发明专利技术提供了H1N1流感病毒血凝素可诱发广谱保护性抗体的表位肽，其来自于流感A病毒(IAV)H1N1血凝素(HA)切割位点。所述的表位肽除了H14亚型，在包括部分H8的17个IAV‑H亚型HA蛋白中都几乎100％保守地存在。本发明专利技术的表位肽可以用于制备抗流感的广谱治疗性抗体药物和检测用抗原，或用于制备人和/或禽类用单价/多价通用预防性流感疫苗。
Epitope Peptide of H1N1 Influenza Virus Hemagglutinin Inducing Broad-spectrum Protective Antibody and Its Application
【技术实现步骤摘要】
H1N1流感病毒血凝素可诱发广谱保护性抗体的表位肽及其应用
本专利技术属于免疫学和生物医药
，更具体地，本专利技术涉及一种流感A病毒(IAV)血凝素(HA)蛋白可诱发阻断HA前体(HA0)切割抗体的表位肽及其应用。
技术介绍
流感病毒是归属于正黏病毒科的RHA病毒，存在甲型(A)、乙型(B)、丙型(C)和丁型(D)4个属[HauseBM，etal.Characterizationofanovelinfluenzavirusincattleandswine:proposalforanewgenusintheOrthomyxoviridaefamily.MBio2014，5:e00014-e00031]，其中宿主范围广和血清亚型多的流感A病毒(influenzaAvirus，IAV)，依据其暴露于病毒表面的血凝素(Hemagglutinin，HA)和神经氨酸酶(Neuraminidase，NA)发生抗原转变和抗原漂移带来的抗原性差异，又被进一步细分为不同的亚型，目前已发现18种HA亚型(H1～H18)和11种NA亚型(N1～N11)[TongS，etal.NewworldbatsharbordiverseinfluenzaAviruses.PLoSPathog2013，9(10):e1003657]。另外，已确定能在人际间广泛传播的IAV是H1N1、H2N2和H3N2亚型，因此它们又被称为人流感病毒；而目前可感染人的禽流感IAV主要是H5N1、H7N9和H9N2等亚型。流行性感冒主要是由IAV引发的一种呼吸道传染疾病，全球每年感染人数达10亿人之多，其中有30～50万患者最终死亡，且间隔若干年的周期性流感大爆发还将导致更高的发病率和死亡率[LambertLC，etal.Influenzavaccinesforthefuture.NEnglJMed2010，363:2036-2044]。例如，19世纪以来已出现过5次流感大爆发，其中1918年的西班牙流感大流行导致5亿人感染H1N1病毒，约5000万人死亡[NeumannG，etal.Emergenceandpandemicpotentialofswine-originH1N1influenzavirus.Nature2009，460:931-939]；之后于1957年和1968年，相继在亚洲和香港发生过二次人流感病毒H2N2和H3N2大流行[PeirisJS，etal.Avianinfluenzavirus(H5N1):athreattohumanhealth.ClinMicrobiolRev2007，20:243-267；WebsterRG，etal.EvolutionandecologyofinfluenzaAviruses.MicrobiolRev1992，56:152-179]；2009年墨西哥H1N1猪流感也一度蔓延至包括中国和美国在内的200多个国家和地区[WebsterRG，etal.EvolutionandecologyofinfluenzaAviruses.MicrobiolRev1992，56:152-179]，使全世界将近40万人感染，并引起6700多人死亡；以及2013年的中国H7N9禽流感大爆发。IAV也存在于鸡鸭等动物体内，其流行也往往引起家禽的大量死亡和被大批量捕杀，因而会造成巨大的经济损失。因此，严重威胁人类健康和阻碍社会经济发展的流感，始终是世界各国高度关注的公共卫生问题，并为此每年投入大量IAV基础病原学、IAV控制和预防对策的研发经费。目前预防IAV流感大流行相对有效的措施，是接种由对人类危害较大的IAV-H1N1、H3N2和一种流感B病毒(influenzaBvirus，IBV)组成的灭活疫苗、减毒疫苗、亚单位疫苗和病毒样颗粒疫苗等三价疫苗。但由于IAV-HA亚型众多，同时疫苗靶蛋白HA头部区域(HA1)极易发生抗原性漂移而造成同一亚型的众多突变株，导致每年的流感疫苗生产，难以随着IAV流行毒株变异而予以及时匹配更新，再加上每年IAV疫苗株的匹配选育费时费力，生产周期长成本高，因此难以适应满足年年防控流感的社会实际需求。为了能彻底解决上述难题，“通用”流感疫苗的研制迫在眉睫。“通用”流感疫苗概念的提出和被接受，起始于以病毒表面保守的跨膜离子通道M2基质蛋白的研究，即发现M2抗原可在IAV亚型之间产生免疫交叉反应性[SlepushkinVA，etal.ProtectionofmiceagainstinfluenzaAviruschallengebyvaccinationwithbaculovirus-expressedM2protein.Vaccine1995，13:1399-1402]，之后改用其在亚型间更为保守的M2蛋白N端胞外区肽(M2e)作为免疫原[DengL，etal.M2e-basedUniversalinfluenzaAvaccine.Vaccine2015，3:105-136]，并证明M2e抗体虽然不能中和IAV病毒，但可通过抗体依赖细胞介导的细胞杀伤产生有效抗IAV流感保护作用[JegerlehnerA，etal.InfluenzaAvaccinebasedontheextracellulardomainofM2:weekprotectionmediatedviaantibody-dependentNKcellactivity.JImmunol2004，172:5598-5605；FanJ，etal.PreclinicalstudyofinfluenzavirusAM2peptideconjugatevaccinesinmice，ferrets，andrhesusmonkeys.Vaccine2004，22:2993-3003]，或通过控制同源M2四聚体质子通道活性调节病毒内pH值，以影响IAV的复制扩散[SchnellJR，etal.StructureandmechanismoftheM2proteinchannelofinfluenzaAvirus.Nature2008，451:591-595]。IAV在宿主体内的复制还取决于病毒被细胞内吞后内涵体中pH下降而打开M2离子通道，并使IAV发生构象变化，进而导致HA茎部(HA2)N端融合肽(fusionpeptide，FP)与宿主细胞膜受体融合的事件发生。同时发现此又一重要靶点的HA2-FP(aa1-23或1-38)氨基酸序列，不仅在IAV亚型及其突变株间高度保守，且能诱发特异抑制HA与宿主细胞膜受体融合活性的抗体[VareckovaE，etal.AmonoclonalantibodyspecifictotheHA2glycoproteinofinfluenzaAvirushemagglutininthatinhibitsitsfusionactivityreducesreplicationofthevirus.ActaVirol2003，47:229-236]。因此，随之开始出现同时单独或组合M2e和HA2-FP表位肽的通用流感疫苗研制[StanekováZ，etal.ConservedepitopesofinfluenzaAvir本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种分离的多肽，其特征在于，所述的多肽长度为6～11aa，且包括式(I)所示的氨基酸序列；RGXFGA (I)；其中，X选自氨基酸L或I；并且，所述的多肽来源于流感A病毒。
【技术特征摘要】
1.一种分离的多肽，其特征在于，所述的多肽长度为6～11aa，且包括式(I)所示的氨基酸序列；RGXFGA(I)；其中，X选自氨基酸L或I；并且，所述的多肽来源于流感A病毒。2.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述的多肽来源于：流感A病毒H1～H7、H9～H13、H15～H18亚型和/或部分H8亚型的血凝素蛋白。3.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述的多肽为在式(I)所示氨基酸序列的多肽基础上延展的多肽，包括式(II)所示的氨基酸序列；SIQSRGLFGAI(II)。4.一种复合多肽，其包括2拷贝或3拷贝的权利要求1～3任一所述的多肽；较佳地，2拷贝或3拷贝的权利要求1～3任一所述的多肽之间，还包括连接肽；更佳地，所述的连接肽包括：GG或AA。5.一种偶联物，其特征在于，包括：(a)权利要求1～3任一所述的多肽或权利要求4所述的复合多肽；以及(b)与(a)可操作性连接的活性蛋白、载体蛋白或固相载体；较佳地，所述的活性蛋白用于提高(a)多肽的稳定性，提高活性多肽的半衰期，延长活性多肽的作用时间，和/或提高活性多肽的溶解度；较佳地，所述载体蛋白用于附着或连接(a)多肽；较佳地，所述的固相载体用于附着或连接(a)多肽。6.权利要求1～3任一所述的多肽、权利要求4所述的复合多肽或权利要求5所述的偶联物的用途...
【专利技术属性】
技术研发人员：李元春，谢毅，王健，戴建锋，唐海平，顾少华，季朝能，程一航，连文博，詹建民，徐万祥，
申请(专利权)人：上海市计划生育科学研究所，
类型：发明
国别省市：上海,31
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