一种吡啶并吡唑酮类衍生物及其抗甲型流感病毒方面的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种吡啶并吡唑酮类衍生物及其在制备甲型流感病毒药物中的应用。本发明专利技术证实一种吡啶并吡唑酮类衍生物，命名为化合物J1，经一系列研究发现，该化合物具有显著的广谱抗流感病毒的活性。选用无毒性浓度的化合物J1进行H5N1和H7N9亚型假病毒实验，结果显示该化合物具有显著的抑制甲型流感病毒进入的活性并呈剂量依赖性。作用机制研究显示化合物J1靶向流感病毒血凝素HA2亚基，抑制流感病毒进行膜融合，从而抑制流感病毒的进入，可以用于制备预防和治疗流感的药物。因此，本发明专利技术的化合物可用于甲型流感病毒的预防或治疗，有望成为防治流感的候选药物进行深入研究与开发。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医药领域，具体涉及一种具有抗甲型流感病毒活性的吡啶并吡唑酮类衍生物。
技术介绍
近年来流感病毒频繁爆发，严重危害到人类和动物的生命健康。由于流感病毒抗原性转变和抗原性漂移的存在，使流感病毒具有了极高的变异性，新型流感病毒的出现也对社会卫生事业造成了巨大威胁。2013年我国多省(市)出现的高致病性H7N9流感病毒，就是一种新重组的禽流感病毒，确诊感染病例的死亡率接近30％。近两年，广东等地又出现了人感染新型H5N6和H10N8等禽流感病毒的病例。因此，流感的防治，尤其是药物治疗，已迫在眉睫。迄今为止，在全球临床应用的抗流感药物神经氨酸酶抑制剂和M2离子通道抑制剂两类共5种，目前两类药物的耐药病毒株均已经出现。因此，目前函需探索新的药物作用靶点，开发新的抗流感药物，寻找新的治疗方案。流感病毒进入抑制剂有望发展成为新型抗流感药物。流感病毒通过其表面血凝素蛋白(HA)介导，首先是HA1亚基与靶细胞表面的唾液酸受体结合，通过胞吞作用进入细胞，在胞内体的低pH环境下，HA2亚基发生构象改变，使隐藏的融合肽暴露出来，插到胞内体膜上，同时三分子HA2也形成类似六螺旋束的结构，拉近病毒膜与胞内体膜的距离而发生融合，形成融合孔，将病毒的核酸释放到胞浆内。阻断病毒进入靶细胞的过程，可以有效抑制流感病毒的感染。血凝素蛋白在这一过程中发挥重要作用，有望成为潜在的抗病毒药物靶点，开发新的抗病毒药物。天然产物具有结构的多样性和生物活性的多样性。天然产物及其衍生物在以往的疾病治疗中发挥了无可限量的作用，也是当今药物研发过程中最具有潜力的资源之一。本专利技术首次合成一种吡啶并吡唑酮类衍生物，命名为化合物J1，具有显著的抗甲型流感病毒的活性。实验结果表明该化合物为研发出新型的抗甲型流感病毒的先导化合物，寻找新型结构的抗流感病毒药物提供了可能。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术存在的不足之处而提供了一种化合物，3-(4-氯苯基)-4,5-二氢-1,4-二苯基-1氢-吡唑[3,4-b]吡啶-6(7氢)-酮，如式I所示，简称为化合物J1，所述化合物J1能够抑制甲型流感病毒的进入，从而为流感病毒性疾病的预防和治疗提供一种新的途径和手段，具有重要的研发价值和开发意义。本专利技术还提供了所述化合物J1的用途。本专利技术一个方面提供了一种化合物，3-(4-氯苯基)-4,5-二氢-1,4-二苯基-1氢-吡唑[3,4-b]吡啶-6(7氢)-酮，其结构如式I所示。本专利技术另一个方面提供了一种式I所示化合物在制备抗流感病毒药物中的应用。其中，所述流感病毒为甲型流感病毒，优选为H1N1、H3N2、H5N1、H7N1、H7N2、H7N3、H7N7、H7N9、H9N2或H10N8。本专利技术再一个方面提供了式I所示化合物在制备抑制H5N1和H7N9亚型假病毒进入靶细胞的药物中的应用。其中，所述式I所示化合物抗甲型流感病毒中的作用机制是靶向流感病毒血凝素HA2亚基，抑制流感病毒进行膜融合，可以用于制备预防和治疗流感的药物。本专利技术再一个方面提供了式I所示化合物的制备方法，其包括以下步骤：1)将4-氯苯甲酰乙腈，苯肼加入水中，搅拌并加热至回流；2)回流0.5-5小时后，依次加入苯甲醛、米氏酸，在100℃下继续搅拌至反应完全；3)以有机溶剂进行萃取，并合并有机相后去除溶剂，柱层析进行纯化后获得式I所示化合物。其中步骤2)中的有机溶剂选自乙酸乙酯。本专利技术所述的化合物结构式如下上述所示的化合物J1能够剂量依赖的抑制抗H5N1、H3N2、H1N1、H7N9亚型甲型流感病毒的进入。本专利技术所述的化合物J1靶向流感病毒血凝素HA2亚基，从而抑制流感病毒进行膜融合，可以用于制备预防和治疗流感的药物。本专利技术所述的化合物J1能作为先导化合物进行结构修饰，获得活性更好地化合物并制成抗流感病毒药物。本专利技术所述的化合物J1可用于制成抗甲型流感的药物。结合现代常用药物制剂手段，可将所述的化合物制成注射液、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液，从而采用比较方便的口服给药形式，其中本专利技术化合物在所述药物中的质量百分比含量为1～20％。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。综上所述，本专利技术具有以下优点和效果1、本专利技术首次发现一种吡啶并吡唑酮类衍生物具有抗甲型流感病毒的作用，为流感病毒性疾病的预防和治疗提供一种新的小分子天然药物。2、本专利技术所述的化合物J1在浓度范围内没有细胞毒性。该化合物能够剂量依赖的抑制H5N1、H3N2、H1N1、H7N9亚型甲型流感病毒的进入，提供广谱的抗病毒作用，可以用于制备预防和治疗流感的药物。3、本专利技术所述的化合物具有吡啶并吡唑酮结构，结构新颖，目前未见该结构的化合物抗流感病毒方面的报道，因此，可以作为先导化合物进行结构修饰。4、本专利技术所述的化合物J1抗甲型流感病毒的作用机制为靶向流感病毒血凝素HA2亚基，从而抑制流感病毒进行膜融合，可以用于制备预防和治疗流感的药物。5、本专利技术所述的化合物J1可单独制成抗流感病毒药物。附图说明图1禽流感假病毒实验检测化合物J1对H5N1和H7N9流感病毒假病毒的抑制效果。A.H5N1假病毒对MDCK细胞的感染性；B.化合物J1对多种H5N1假病毒的抑制活性；C.化合物J1对H7N9假病毒的抑制活性。图2MST实验检测化合物靶向流感病毒血凝素蛋白HA。图3血凝抑制实验测定化合物不能作用于流感病毒血凝素蛋白HA1。图4ELISA实验测定化合物靶向流感病毒血凝素蛋白HA2。具体实施方式为了更好地理解本专利技术的内容，下面结合具体实施方法对本
技术实现思路
作进一步说明，但本专利技术的保护内容不局限以下实施例。本专利技术所用材料293T细胞和犬肾细胞(MDCK)在包含有10％热灭活胎牛血清(FBS)，50单位毫升青霉素和50微克/毫升链霉素(P/S)的DMEM培养基中培养。MDCK在病毒感染后,在含有1微克/毫升的TPCK胰蛋白酶但不含有胎牛血清的MEM中培养。所有的人源H5N1假病毒，分别是A/Qinghai/59/2005，A/Xinjiang/1/2006，A/Anhui/1/2005，A/HongKong/156/1997，A/Thailand/Kan353/2004，A/VietNam/1194/2004。所用流感病毒株具体为：A/HongKong/415742/2009(H1N1)、A/Vietnam/1194/2004(H5N1)、A/Anhui/1/2013(H7N9)，分别在MDCK细胞中增殖并在本研究中使用。所有与活病毒相关试验是在生物安全2级或3级设施中进行。实施例1吡啶并吡唑酮类衍生物J1的合成方法在5mL的圆底烧瓶中加入4-氯苯甲酰乙腈(1mmol，179mg)，苯肼(1mmol，108mg)，水(2mL)，搅拌，加热至回流(100℃)，2小时后，依次加入苯甲醛(1mmol，106mg)，米氏酸(1mmol，144mg)，100℃下继续搅拌，1小时后，停止反应，加入乙酸乙酯(3×5mL)萃取并合并有机相，旋转蒸发除去溶剂后，柱层析分离提纯。得到产物3-(4-chlorophenyl)-4,5-dihydro-1,4-diphenyl-1H-pyrazolo[3,本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种式I所示化合物，

【技术特征摘要】
1.一种式I所示化合物，2.一种式I所示化合物在制备抗流感病毒药物中的应用。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述流感病毒为甲型流感病毒，优选为H1N1、H3N2、H5N1、H7N1、H7N2、H7N3、H7N7、H7N9、H9N2或H10N8。4.式I所示化合物在制备抑制H5N1和H7N9亚型假病毒进入靶细胞的药物中的应用。5.根据权利要求1和2所述的应用，其特征在与：所述式I所示化合物抗甲型流感病毒中的作用机制是靶...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨洁，刘叔文，
申请(专利权)人：南方医科大学，
类型：发明
国别省市：广东;44