测定IgE的试剂组合制造技术

本发明专利技术涉及测定IgE的试剂组合，其包括第一试剂，该第一试剂含有固相支持物、第一抗IgE抗体、磷酸缓冲液、氯化钠、BSA和防腐剂；第三试剂，所述第三试剂含有第二抗IgE抗体、磷酸缓冲液、氯化钠、酪蛋白和防腐剂。通过提供该试剂组合有效降低了所有基质效应所带来的干扰，同时扩大了检测范围。此外，本发明专利技术还涉及测定IgE的方法。

Combination of reagents for the determination of IgE

【技术实现步骤摘要】
测定IgE的试剂组合
本专利技术属于免疫体外诊断领域，具体涉及一种用于测定促IgE的试剂组合。
技术介绍
IgE是免疫球蛋白质家族的成员，又称为反应素和亲细胞抗体，是介导I型超敏反应的主要抗体。IgE由B细胞分泌并在B细胞的表面上表达。B细胞合成的IgE通过经短膜结合区连接至成熟IgE序列的跨膜结构域锚定于B细胞膜中。IgE对肥大细胞及嗜碱性粒细胞具有高度亲和性，可与细胞表面的高亲和性受体FcεRI结合，当过敏原再次进入机体时，与致敏肥大细胞脱颗粒，释放生物活性物质，引发I性变态反映(哮喘、枯草热、变态反应性皮炎等)，此外IgE还有抗寄生虫感染的作用。IgE升高常见于超敏反应性疾病(如过敏性鼻炎、外源性哮喘、枯草热、变态性皮炎、慢性荨麻疹)、寄生虫感染以及IgE型多发性骨髓瘤、ADIS、非霍奇金淋巴癌、高IgE综合征(Job综合征)等，因此可通过对IgE水平的检测来对有关疾病进行辅助判断。美国临床标准化委员会(NCCLS)从两个角度定义了基质效应(matrixeffect)：样品中除分析物以外的其它组分对分析物测定值的影响；基质对分析方法准确测定分析物的能力的干扰。国际标准化组织对“基质效应”的定义为：除被测定物质以外样本的物征，它可以影响到被测物质的检测及检测结果(ISO15189)。Miller和Thomas等人所下的一个针对临床实验室的基质效应：不同于新鲜标本的反应特性使测定结果产生的偏差。总的来说，基质效应来自于生物标本中未知的或性质不明的物质或特性(如黏度、表面张力、蒸汽压)所引起的干扰，及除测定物质以外样本的物质，它可以影响到被测物的检测及检测结果。在对患者的血样进行测定时，基质效应主要来源于血清中的干扰物质，例如胆红素、生物素、甘油三酯、血红蛋白、维生素C、类风湿因子、HAMA抗体等。目前常用的IgE免疫测定方法有放射免疫分析法、酶联免疫分析法和化学发光免疫分析等。然而这些方法均会面临基质效应所带来的问题，从而干扰IgE的最终测定效果。因此，在IgE体外诊断领域，存在着降低测定时基质效应所带来的干扰的强烈需求。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题是如何从整体上有效地降低IgE检测时的基质效应和干扰。为此，本专利技术对IgE免疫测定的提供了一种用于测定IgE的试剂组合，所述试剂组合包括：第一试剂，所述第一试剂含有固相支持物、第一抗IgE抗体、磷酸缓冲液、氯化钠、BSA和防腐剂；第三试剂，所述第三试剂含有第二抗IgE抗体、磷酸缓冲液、氯化钠、酪蛋白和防腐剂。另外，对于本专利技术的试剂组合，进一步研究发现，通过调整第一试剂、第三试剂中各成分浓度范围，能够进一步减少基质效应的影响，使测定结果更为准确。因此，在优选的实施方式中，所述第一试剂含有0.03～3g/L的固相支持物、0.5～30mg/L的第一抗IgE抗体、5～60mM的磷酸缓冲液、2～25g/L的氯化钠、1～25g/L的BSA和/或0.3～6mL/L的防腐剂。所述第一抗IgE抗体可以包被于所述固相支持物上的方式存在。在具体的实施方式中，第一试剂中的组分的终浓度例如可以为：0.05g/L或2.5g/L的固相支持物；1mg/L或25mg/L的第一抗IgE抗体；10mM或50mM的磷酸缓冲液；4g/L或20g/L的氯化钠；2g/L或20g/L的BSA；和/或0.5mL/L或5mL/L的防腐剂。在优选的实施方式中，第三试剂中第二抗IgE抗体为0.005～2.5mg/L、磷酸缓冲液为5～60mM、氯化钠为1～25g/L、酪蛋白为0.5～25g/L和/或防腐剂为0.3～6mL/L。在具体的实施方式中，第三试剂中的组分的终浓度例如可以为：0.01mg/L或2mg/L的第二抗IgE抗体；10mM或50mM的磷酸缓冲液；2g/L或20g/L的氯化钠；1g/L或20g/L的酪蛋白；和/或0.5mL/L或5mL/L的防腐剂。在另一个实施方式中，本专利技术的试剂组合可进一步包括第二试剂，其含有TRIS缓冲液、氯化钠、BSA、防腐剂和阻断剂plus。优选的，所述第二试剂含有5～110mM的TRIS缓冲液、2～25g/L的氯化钠、1～25g/L的BSA、0.3～6mL/L的防腐剂和/或3～45mg/L的阻断剂plus。在具体的实施方式中，第二试剂中的组分的终浓度例如可以为：20mM或50mM的TRIS缓冲液；4g/L或20g/L的氯化钠；2g/L或20g/L的BSA；0.5mL/L或5mL/L的防腐剂；和/或5mg或40mg/L的阻断剂plus。在优选的实施方式中，所述固相支持物为磁微粒。在具体的实施方式中，所述第一抗IgE抗体可为鼠源的，所述第二抗IgE抗体可为鼠源的。更优选的，所述第一试剂中固相载体为0.5～1.5g/L、第一抗IgE抗体为5～15mg/L、磷酸缓冲液为16～24mM、氯化钠为8～12g/L、BSA为8～12g/L和/或防腐剂为2.4～3.6mL/L。尤其优选的，所述第一试剂中固相载体为1g/L，第一抗IgE抗体为10mg/L，磷酸缓冲液为20mM，氯化钠为10g/L，BSA为10g/L和/或防腐剂为3mL/L。更优选的，所述第三试剂中第二抗IgE抗体为0.5～1.5mg/L、磷酸缓冲液为16～24mM、氯化钠为8～12g/L、酪蛋白为8～12g/L和/或防腐剂为2.4～3.6mL/L。尤其优选的，所述第三试剂中第二抗体为1mg/L，磷酸缓冲液为20mM，氯化钠为10g/L，酪蛋白为10g/L和/或防腐剂为3mL/L。更优选的，所述第二试剂中TRIS缓冲液为40～60mM、氯化钠为8～12g/L、BSA为8～12g/L、防腐剂为2.4～3.6mL/L和/或阻断剂plus为16～24mg/L。尤其优选的，所述第二试剂中TRIS缓冲液为50mM，氯化钠为10g/L，BSA为10g/L，防腐剂为3mL/L，和/或阻断剂plus为20mg/L。在优选的实施方式中，所述第二试剂和/或第三试剂可进一步包括色素；色素的浓度可例如为0.05～5g/L。示例性的色素可以是果绿色素或柠檬黄。在具体的实施方式中，所述第一试剂与第二试剂的体积比可为1:0.2～5，优选为1:1～2。又一方面，本专利技术提供了一种测定IgE的方法，包括：1)将来自受试者的样本与本专利技术的第一试剂混合；2)加入本专利技术的第三试剂；3)获得检测值。优选的，在步骤1)中还加入了本专利技术的第二试剂。具体地，步骤1)中形成待测物(IgE)-第一抗IgE抗体-固相支持物的复合物；而在加入第三试剂后，该复合物进一步可与第二抗IgE抗体结合，进一步形成固相支持物-第一抗IgE抗体-待测物-第二抗IgE抗体的复合体。在一个具体的实施方式中，第一步：加入样本、第一试剂和第二试剂，三者混匀反应；进入仪器清洗站，磁吸附去除液体；第二步：加入第三试剂混匀反应，再进入仪器清洗站，磁吸附去除液体；第三步：进入仪器检测系统，获得化学发光信号值，仪器软件根据相关曲线计算出测定浓度。本专利技术的有益效果在于提高了IgE免疫测定时的结果可靠性；又一方面，本专利技术通过一定的配比，在保证抗原、抗体反应效率的前提下，有效降低了基质效应、内源性和外源性等干扰；再一方面，本专利技术扩宽IgE免疫检测时的线性范围。附图说明图1显示了试剂组合2.1、试剂本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种试剂组合，包括：第一试剂，所述第一试剂含有固相支持物、第一抗IgE抗体、磷酸缓冲液、氯化钠、BSA和防腐剂；第三试剂，所述第三试剂含有第二抗IgE抗体、磷酸缓冲液、氯化钠、酪蛋白和防腐剂。

【技术特征摘要】
1.一种试剂组合，包括：第一试剂，所述第一试剂含有固相支持物、第一抗IgE抗体、磷酸缓冲液、氯化钠、BSA和防腐剂；第三试剂，所述第三试剂含有第二抗IgE抗体、磷酸缓冲液、氯化钠、酪蛋白和防腐剂。2.根据权利要求1所述的试剂组合，所述试剂组合进一步包括：第二试剂，所述第二试剂含有TRIS缓冲液、氯化钠、BSA、防腐剂和阻断剂plus。3.根据权利要求1或2的试剂组合，其中，所述第一试剂含有0.03～3g/L的固相支持物、0.5～30mg/L的第一抗IgE抗体、5～60mM的磷酸缓冲液、2～25g/L的氯化钠、1～25g/L的BSA和0.3～6mL/L的防腐剂。4.根据权利要求1或2的试剂组合，其中，所述第三试剂含有0.005～2.5mg/L的第二抗IgE抗体、5～60mM的磷酸缓冲液、1～25g/L的氯化钠、0.5～25g/的酪蛋白和0.3～6mL/L的防腐剂。5.根据权利要求2的试剂组合，其中，所述第二试剂含有5～110mM的TRIS缓冲液、2～25g/L的氯化钠、1～25g/L的BSA、0.3～6mL/L的防腐剂和...

【专利技术属性】
技术研发人员：涂益，田君喜，张凌燕，张盛勇，
申请(专利权)人：迈克生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51