一种降钙素原检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术适用于医学检测技术领域，提供了一种降钙素原检测试剂盒及其制备方法，该试剂盒包括R1试剂和R2试剂，所述R1试剂包括以下组分：磷酸盐缓冲液5～7g/L；聚乙二醇17～23g/L；表面活性剂0.9～1.2ml/L；防腐剂0.06～0.08g/L；所述R2试剂包括以下组分：磷酸盐缓冲液2～5g/L；抗人降钙素原抗体的聚苯乙烯胶乳微球630～660mg/L；聚乙二醇17～23g/L；保护剂35～40g/L；防腐剂0.06～0.08g/L。本发明专利技术的试剂盒可应用于检测人体血清中的降钙素原含量，检测结果重复性好，且精度高，最高检测范围可达到100ng/mL，具有很好的临床应用价值。

A procalcitonin detection kit and its preparation method

【技术实现步骤摘要】
一种降钙素原检测试剂盒及其制备方法
本专利技术属于医学检测
，尤其涉及一种降钙素原检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
降钙素原(PCT)是一种含116个氨基酸的无激素活性糖蛋白，在生理情况下由甲状腺-C细胞产生，含量极少，在健康人群的血清或脑脊液中几乎不能被检出，当严重细菌、真菌、寄生虫感染以及脓毒症和多脏器功能衰竭时它在血浆中的水平升高，是诊断和监测细菌炎性疾病感染的重要参数，因此具有重要的临床诊断和鉴别诊断价值。目前，针对降钙素原的检测方法有放射免疫学分析法、双抗夹心免疫化学发光法、透射免疫浊度法等，然而，放射免疫学分析法主要利用人工合成的多克隆抗体特异地识别和连接合成氨基酸降钙素原，能检测正常人的血清PCT，可靠敏感度为4pm/mL，检测的是游离PCT、结合型PCT和降钙素基因相关肽前体的混合物，而不能区分上述三种物质，同时检测耗时长(19～22h)，而且有放射性元素的污染使用受到限制；双抗夹心免疫化学发光法是利用化学发光物质经氧化形成一个激发态的中间体，利用其回到稳定基态时的发光信号来间接测定PCT浓度，存在发光效率低、标记物不稳定或者测试结果稳定性以及重复性差、成本高昂的问题。
技术实现思路
本专利技术实施例提供一种降钙素原检测试剂盒，旨在解决现有降钙素原的检测方法存在检测效率低、成本高昂、测试结果不稳定且准确度低以及重复性差的技术问题。本专利技术实施例是这样实现的，一种降钙素原检测试剂盒，包括R1试剂和R2试剂，其中，所述R1试剂包括以下组分：磷酸盐缓冲液5～7g/L；聚乙二醇600017～23g/L；表面活性剂0.9～1.2ml/L；防腐剂0.06～0.08g/L；所述R2试剂包括以下组分：磷酸盐缓冲液2～5g/L；抗人降钙素原抗体的聚苯乙烯胶乳微球630～660mg/L；聚乙二醇600017～23g/L；保护剂35～40g/L；防腐剂0.06～0.08g/L。本专利技术实施例还提供一种降钙素原检测试剂盒的制备方法，所述R1试剂的制备方法包括：按量称取磷酸盐缓冲液、聚乙二醇6000、表面活性剂以及防腐剂，备用；将所述磷酸盐缓冲液、聚乙二醇6000、表面活性剂以及防腐剂加入搅拌容器中，并加水至1L，搅拌均匀后，进行静置、过滤处理，即得；所述R2试剂的制备方法包括：按量配制磷酸盐缓冲液，将降钙素原抗体稀释至2～3mg/mL，得降钙素原抗体稀释液；向10～15g聚苯乙烯胶乳微球中加入8～13mL活化剂溶液，进行活化处理35～45分钟，得聚苯乙烯胶乳微球活化液；所述聚苯乙烯胶乳微球粒径为220～300nm；将所述聚苯乙烯胶乳微球活化液缓慢滴加入所述降钙素原抗体稀释液中，并于25～40℃下搅拌反应3～5h，得偶联降钙素原抗体的聚苯乙烯胶乳微球悬浊液；向所述偶联降钙素原抗体的聚苯乙烯胶乳微球悬浊液中加入聚乙二醇6000，并于25～40℃下进行封闭处理1～2h；将所述封闭处理后的悬浊液进行高速离心以及洗涤处理，并加入预称取好的保护剂以及防腐剂，同时加所述磷酸盐缓冲液至1L，搅拌均匀，即得。本专利技术实施例提供的降钙素原检测试剂盒，由R1试剂和R2试剂双试剂组成，通过R1试剂中双表面活性剂的添加，有效提高该试剂盒的稳定性，在2～8℃密避保存可稳定18个月，开启后在2～8℃避光可稳定2个月；另外，通过添加生物活性物质的保护剂，大大提高降钙素原抗体和胶乳微球偶联复合物的结合效率和稳定性，即通过使用与抗体共价结合的胶乳颗粒予以增强免疫沉淀反应，产生凝集以致浊度上升，从而大大提高了检测工作效率，同时检测结果重复性好，且精度高，最高检测范围可达到100ng/mL，具有很好的临床应用价值。附图说明图1是本专利技术实施例1试剂盒测试测试样本中的降钙素原含量的实测值与PCT理论值的线性范围曲线图；图2是本专利技术实施例1试剂盒测试样本中的降钙素原含量的实测值与PCT理论值的相关性曲线图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。本专利技术实施例提供的降钙素原检测试剂盒，由R1试剂和R2试剂双试剂组成，通过R1试剂中双表面活性剂的添加，有效提高该试剂盒的稳定性，在2～8℃密避保存可稳定18个月，开启后在2～8℃避光可稳定2个月；另外，通过添加生物活性物质的保护剂，大大提高降钙素原抗体和胶乳微球偶联复合物的结合效率和稳定性，即通过使用与抗体共价结合的胶乳颗粒予以增强免疫沉淀反应，产生凝集以致浊度上升，从而大大提高了检测工作效率，同时检测结果重复性好，且精度高，最高检测范围可达到100ng/mL。在本专利技术实施例中，抗人降钙素原抗体选购自菲鹏生物股份有限公司。在本专利技术实施例中，聚苯乙烯胶乳微球选购自JSR株式会社。在本专利技术实施例中，磷酸盐缓冲液为生物缓冲剂，为反应提供稳定的、适宜的pH环境。试剂储存时，为试剂提供一个良好的储存环境，保证试剂的有效储存；其中，所述R1试剂中磷酸盐缓冲液的pH值宜为6～7，优选6.5；所述R2试剂中磷酸盐缓冲液的pH值为7.5～8.5，优选8.0。在本专利技术实施例中，聚乙二醇的分子量为6000，其为环氧乙烷水解产物的聚合物，是一种非离子型的水溶性聚合物，具有水溶性、不挥发性、生理惰性、温和性等特性，作为分散剂和乳化剂，提高配制溶液和反应体系的均匀性和稳定性，提高抗原抗体结合物的反应浊度，提高试剂的灵敏度。在本专利技术实施例中，防腐剂为液体生物防腐剂Proclin300或叠氮化钠，用于防止溶液中微生物生长，保持试剂的稳定性。在本专利技术实施例中，保护剂为海藻糖，作为生物活性物质的稳定剂和保护剂，提高降钙素原抗体和胶乳微球偶联复合物的结合效率和稳定性。在本专利技术实施例中，表面活性剂为吐温-20和/或十六烷基三甲基溴化铵，更优选地，所述表面活性剂为吐温-20与十六烷基三甲基溴化铵，体积比为1:4。在本专利技术实施例中，活化剂溶液为羰基二咪唑和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液，体积比为2:3。下面结合具体实施例详细说明本专利技术试剂盒，但这些实施例并不应认为是限制本专利技术的定义。实施例1一种降钙素原检测试剂盒，包括R1试剂和R2试剂，其中，所述R1试剂包括以下组分：磷酸盐缓冲液5.2g/L；聚乙二醇600017.8g/L；表面活性剂0.9ml/L；液体生物防腐剂Proclin3000.06g/L；所述表面活性剂为吐温-20与十六烷基三甲基溴化铵，体积比为1:4。所述R1试剂的制备方法包括：按量称取磷酸盐缓冲液、聚乙二醇6000、表面活性剂以及液体生物防腐剂Proclin300，备用；将所述磷酸盐缓冲液、聚乙二醇6000、表面活性剂以及液体生物防腐剂Proclin300加入搅拌容器中，并加水至1L，搅拌均匀后，进行静置、过滤处理，即得。所述R2试剂包括以下组分：磷酸盐缓冲液2.5g/L；抗人降钙素原抗体的聚苯乙烯胶乳微球630mg/L；聚乙二醇600017.5g/L；海藻糖35g/L；液体生物防腐剂Proclin3000.06g/L。所述R2试剂的制备方法包括：按量配制磷酸盐缓冲液，将降钙素原抗体稀释至2mg/mL，得降钙素原抗体稀释液；向10g聚苯乙烯胶乳微球中加入8mL活化剂溶液(羰基本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种降钙素原检测试剂盒，其特征在于，包括R1试剂和R2试剂，其中，所述R1试剂包括以下组分：磷酸盐缓冲液5～7g/L；聚乙二醇6000 17～23g/L；表面活性剂0.9～1.2ml/L；防腐剂0.06～0.08g/L；所述R2试剂包括以下组分：磷酸盐缓冲液2～5g/L；抗人降钙素原抗体的聚苯乙烯胶乳微球630～660mg/L；聚乙二醇6000 17～23g/L；保护剂35～40g/L；防腐剂0.06～0.08g/L。

【技术特征摘要】
1.一种降钙素原检测试剂盒，其特征在于，包括R1试剂和R2试剂，其中，所述R1试剂包括以下组分：磷酸盐缓冲液5～7g/L；聚乙二醇600017～23g/L；表面活性剂0.9～1.2ml/L；防腐剂0.06～0.08g/L；所述R2试剂包括以下组分：磷酸盐缓冲液2～5g/L；抗人降钙素原抗体的聚苯乙烯胶乳微球630～660mg/L；聚乙二醇600017～23g/L；保护剂35～40g/L；防腐剂0.06～0.08g/L。2.如权利要求1所述的降钙素原检测试剂盒，其特征在于，包括R1试剂和R2试剂，其中，所述R1试剂包括以下组分：磷酸盐缓冲液6.057g/L；聚乙二醇600020g/L；表面活性剂1ml/L；防腐剂0.07g/L；所述R2试剂包括以下组分：磷酸盐缓冲液3.0285g/L；抗人降钙素原抗体的聚苯乙烯胶乳微球645mg/L；聚乙二醇600020g/L；保护剂37g/L；防腐剂0.07g/L。3.如权利要求1所述的降钙素原检测试剂盒，其特征在于，所述R1试剂中磷酸盐缓冲液的pH值为6～7。4.如权利要求1所述的降钙素原检测试剂盒，其特征在于，所述R2试剂中磷酸盐缓冲液的pH值为7.5～8.5。5.如权利要求1所述的降钙素原检测试剂盒，其特征在于，所述表面活性剂为吐温-20和/或十六烷基三甲基溴化铵。6.如权利要求1所述的降钙素原检测试剂盒，其特征在于，所述表面活性剂为吐温-20与十六烷基三甲基溴化铵，体积比为1:4。7.如权利要求1所述的降钙素原检测...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾宪亮，
申请(专利权)人：曾宪亮，
类型：发明
国别省市：江苏,32