一种控制酒萸肉炮制工艺参数的指纹图谱建立方法技术

本发明专利技术公开了一种控制酒萸肉炮制工艺的指纹图谱建立方法：通过控制炮制过程中各炮制参数在指纹图谱中马钱苷、莫诺苷、没食子酸、原儿茶酸、5‑羟甲基糠醛五个成分的含量(峰面积)，从而控制酒萸肉的炮制工艺。以单因素方式考察了燀制时间、闷润时间、蒸制时间三个因素对于五个化学成分的炮制前后的影响，确认最佳燀制、闷润和蒸制时间。

A fingerprint method for controlling processing parameters of Cornus officinalis

【技术实现步骤摘要】
一种控制酒萸肉炮制工艺参数的指纹图谱建立方法
本专利技术涉及中药炮制
，具体涉及一种控制山茱萸炮制工艺参数的指纹图谱建立方法。
技术介绍
山茱萸为山茱萸科植物山茱萸CornusofficinalisSieb.etZucc.的干燥成熟果肉；最早收录于《神农本草经》。其酸、涩，微温，归肝肾经；具有补益肝肾，收敛固涩的功效。医圣张仲景以山茱萸为君药组制了“金匮肾气丸”；宋朝太医钱乙所著《小儿药证直诀》对肾气丸进行删减组方“地黄丸”中也包含了“山茱萸”，用以滋补肾阴，治疗小儿尿床等症。后逐渐用于肾虚、头晕耳鸣、腰膝酸软、消渴、遗精等症。山茱萸目前为止已知的化学成分主要有：环烯醚萜苷类成分(如马钱苷、莫诺苷、山茱萸苷等)、黄酮类(槲皮素、异鼠李素、山奈酚等)、有机酸(没食子酸、熊果酸、齐墩果酸、原儿茶酸等)及鞣质类等成分。有文献报道环烯醚萜苷类成分是山茱萸含量最高的成分群，同时也是山茱萸的特征性成分，故而在山茱萸及酒萸肉的质量控制中具有指导作用；而在诸多文献报道中，5-羟甲基糠醛对人体横纹肌及内脏有损害,同时具有神经毒性,还能与人体蛋白结合产生积累中毒,常被作为葡萄糖输液中的有害物质加以含量控制；德国更是将其列为刺激性危险品。山茱萸作为补益类药，尽量减少其毒副反应是传统炮制工艺的目的，因此，5-羟甲基糠醛成分的控制非常有必要。虽然山茱萸是按照药典规定的炮制通则0213进行酒蒸，但是具体参数却不确定，黄酒闷润的时间、酒蒸的时间对其有效成分(原儿茶酸、没食子酸、莫诺苷、马钱苷)及毒性成分(5-羟甲基糠醛)含量是否有影响，目前为止都没有明确的研究。目前通过山茱萸指纹图谱的建立，利用五个指标性成分炮制前后指纹图谱峰面积的变化规律对其炮制工艺及其参数进行优选，有效控制山茱萸炮制中有效成分及控制性成分(5-羟甲基糠醛)领域尚无较好的研究。
技术实现思路
针对现有技术状况，本专利技术利用五个指标性成分炮制前后指纹图谱峰面积的变化规律对其炮制工艺参数进行优选，提供一种控制其炮制工艺参数的指纹图谱建立方法，实现有效控制山茱萸炮制中有效成分及控制性成分(5-羟甲基糠醛)。本专利技术的技术方案如下：一种控制酒萸肉饮片炮制工艺参数的指纹图谱建立方法，包括如下步骤：1)对照品溶液的制备：取没食子酸、原儿茶酸、5-羟甲基糠醛、马钱苷、莫诺苷适量置于容量瓶中，以乙醇或50～100％的甲醇溶解定容；2)供试品溶液的制备：分别取炮制前的山茱萸药材和炮制过程中山茱萸饮片打粉(过三号筛)，精密称取适量，精密量取乙醇或50％～65％甲醇，称定重量，回流或超声，冷却后以同种溶剂补足重量，摇匀，过0.45μm膜备用即可；3)HPLC指纹图谱的建立：分别吸取步骤1)和2)所得的对照品和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪进行含量检测：其中，色谱条件为：色谱柱为反相色谱柱C18，紫外检测器，检测波长为230～250nm，柱温为30～40℃，流动相为乙睛-0.05～0.2％磷酸溶液，梯度洗脱；流速为1.0ml/min，分析时间为100min；所述梯度洗脱顺序表如下：表1梯度洗脱顺序表4)以马钱苷为参照峰的标准指纹图谱的制定吸取步骤2)所得的山茱萸对照品溶液和山茱萸供试品溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪中，照高效液相色谱法测定，记录色谱图；依据所得的10～15批山茱萸药材的指纹图谱、10～15批山茱萸饮片的指纹图谱，制定山茱萸药材标准指纹图谱和饮片标准指纹图谱；其中所述标准指纹图谱具有14个特征峰，其中8号峰为马钱苷；5)指纹图谱的质量控制将山茱萸原药材与其分别对应的山茱萸饮片的指纹图谱与步骤4)制定的标准指纹图谱进行比较，计算相似度，识别所具有的共同吸收峰的数量，确定相似度。其中所述步骤1)对照品溶液的制备优选为下述方法进行：没食子酸对照品15.03mg、原儿茶酸对照品10.31mg、5-羟甲基糠醛对照品10.12mg、马钱苷对照品5.78mg、莫诺苷对照品6.32mg，置于100ml容量瓶中，加乙醇或50％～65％甲醇，超声溶解并定容至刻度，摇匀，制成对照品溶液。所述步骤2)供试品溶液的制备优选为下述方法进行：分别取炮制前的山茱萸药材和炮制过程中山茱萸饮片(过三号筛)0.1～0.5g，精密量取乙醇或50％～65％甲醇20～50ml，称定重量，超声或回流45～90min，冷却后以甲醇补足重量，摇匀，过0.45μm膜备用即可。所述步骤3)中的色谱柱优选柱长为250mm的C18反相色谱柱，检测波长优选为240nm，流动相优选为乙睛-0.1％磷酸溶液。所述步骤1)和2)中甲醇浓度优选为50％。所述步骤2)中超声处理时间优选为45分钟。所述步骤5)中所述的指纹图谱确定相似度是指将山茱萸原药材与其分别对应的山茱萸饮片的指纹图谱与步骤4)制定的标准指纹图谱进行比对，其相似度为0.9～1.00，共有峰有14个，共有峰峰面积总和占总峰面积的90％以上，以8号峰马钱苷为参照峰，计算相对保留时间和相对峰面积；其中山茱萸药材包括14个共有峰：各峰的相对保留时间分别为：(1)0.113～0.139、(2)0.167～0.171、(3)0.212～235、(4)0.302～0.328、(5)0.413～0.455、(6)0.461～0.502、(7)0.892～0.915、(S)1.000、(9)1.631～1.650、(10)1.756～1.783、(11)2.042～2.193、(12)2.472～2.513、(13)2.897～2.965、(14)3.087～3.134；各峰的相对峰面积分别为：(1)0.032～0.095、(2)0.023～0.093、(3)0.247～0.745、(4)0.109～0.825、(5)0.077～0.325、(6)0.029～0.314、(7)0.123～0.445、(S)1.000、(9)0.095～0.356、(10)0.558～0.723、(11)0.113～0.236、(12)0.029～0.142、(13)0.753～1.130、(14)0.103～0.752；本专利技术所述的酒萸肉为：将洗净的生药山茱萸沥干水，经燀制4～6分钟后，放凉，用黄酒闷润1～1.5小时后，常压蒸1.5～2小时，干燥得到的一种山茱萸饮片。附图说明图1马钱苷全波长扫描图图2莫诺苷全波长扫描图图3马钱苷HPLC图谱图4莫诺苷HPLC图谱图55-羟甲基糠醛HPLC图谱图6没食子酸HPLC图谱图7原儿茶酸HPLC图谱图8混合对照品图9山茱萸药材标准指纹图谱图10燀制与未燀制炮制样品对比图谱具体实施方式实施例11、试剂与试药没食子酸(批号：110831-200302，含量测定用，中国药品生物制品检定所)；原儿茶酸(批号：110809-200604，含量测定用，中国药品生物制品鉴定所)；莫诺苷(批号：0424121，天津一方生物科技有限公司)；马钱苷(批号：11640-200502，含量测定用，中国药品生物制品鉴定所)；5-羟甲基糠醛(批号：070102，含量测定用，上海有思生物技术有限公司)；山茱萸(河南产，九芝堂股份有限公司，FM161005)；乙腈为色谱纯(美国TEDIA公司)，水为超纯水，甲醇(国药集团，AR)。2、仪器ShimadzuLC-20A；LCSolu本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种控制酒萸肉饮片炮制工艺参数的指纹图谱建立方法，包括如下步骤：1)对照品溶液的制备：取没食子酸、原儿茶酸、5‑羟甲基糠醛、马钱苷、莫诺苷适量置于容量瓶中，以乙醇或50～100％的甲醇溶解定容；2)供试品溶液的制备：分别取炮制前的山茱萸药材和炮制过程中山茱萸饮片打粉(过三号筛)，精密称取适量，精密量取乙醇或50％～65％甲醇，称定重量，回流或超声，冷却后以同种溶剂补足重量，摇匀，过0.45μm膜备用即可；3)HPLC指纹图谱的建立：分别吸取步骤1)和2)所得的对照品和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪进行含量检测：其中，色谱条件为：色谱柱为反相色谱柱C18，紫外检测器，检测波长为230nm～250nm，柱温为30℃～40℃，流动相为乙腈‑0.05％～0.2％磷酸溶液，梯度洗脱；流速为1.0ml/min，分析时间为100min；所述梯度洗脱顺序表如下：表1 梯度洗脱顺序表

【技术特征摘要】
1.一种控制酒萸肉饮片炮制工艺参数的指纹图谱建立方法，包括如下步骤：1)对照品溶液的制备：取没食子酸、原儿茶酸、5-羟甲基糠醛、马钱苷、莫诺苷适量置于容量瓶中，以乙醇或50～100％的甲醇溶解定容；2)供试品溶液的制备：分别取炮制前的山茱萸药材和炮制过程中山茱萸饮片打粉(过三号筛)，精密称取适量，精密量取乙醇或50％～65％甲醇，称定重量，回流或超声，冷却后以同种溶剂补足重量，摇匀，过0.45μm膜备用即可；3)HPLC指纹图谱的建立：分别吸取步骤1)和2)所得的对照品和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪进行含量检测：其中，色谱条件为：色谱柱为反相色谱柱C18，紫外检测器，检测波长为230nm～250nm，柱温为30℃～40℃，流动相为乙腈-0.05％～0.2％磷酸溶液，梯度洗脱；流速为1.0ml/min，分析时间为100min；所述梯度洗脱顺序表如下：表1梯度洗脱顺序表4)以马钱苷为参照峰的标准指纹图谱的制定吸取步骤2)所得的山茱萸对照品溶液和山茱萸供试品溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪中，照高效液相色谱法测定，记录色谱图；依据所得的10～15批山茱萸药材的指纹图谱、10～15批山茱萸饮片的指纹图谱，制定山茱萸药材标准指纹图谱和饮片标准指纹图谱；其中所述标准指纹图谱具有14个特征峰，其中8号峰为马钱苷；5)指纹图谱的质量控制将山茱萸原药材与其分别对应的山茱萸饮片的指纹图...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓芸，黄胜，叶惠煊，周良，袁莉，袁利群，
申请(专利权)人：九芝堂股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南,43