一种独一味药材及其制剂的UPLC指纹图谱检测方法技术

本发明专利技术公开了一种独一味药材及其制剂的UPLC指纹图谱检测方法，方法包括：(a)对照品溶液的制备；(b)供试品溶液的制备；(c)UPLC检测条件；(d)以胡麻属苷、咖啡酸、绿原酸、山栀苷甲酯、马钱苷、8‑O‑乙酰山栀苷甲酯、连翘酯苷B、木犀草苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷等为参照峰的标准指纹图谱的制定；(e)指纹图谱的质量控制。该方法供试液制备提取溶剂环保，方法简单，不仅较传统HPLC方法更为简便迅速、节能减耗，且所得的独一味药材及制剂指纹图谱中各特征峰分离效果较好，特征性成分及药效成分保留完整，重复性、稳定性良好，精密度高，专属性强。本法能够准确、快速控制独一味药材及其制剂。

A UPLC Fingerprint Method for the Detection of Unique Herbs and Their Preparations

【技术实现步骤摘要】
一种独一味药材及其制剂的UPLC指纹图谱检测方法
本专利技术涉及一种中药材及其制剂的UPLC指纹图谱
，尤其是独一味药材及其制剂的UPLC指纹图谱检测方法。
技术介绍
UPLC技术是完全基于HPLC基本原理的技术，是以亚二微米小颗粒、超高柱效的填料为核心的技术。目前在中药及中成药领域，UPLC的使用正在走向成熟。其与HPLC相比，既保留了高效液相色谱的所有优点，且具有省时、节能、环保的独特优势。独一味药材为唇形科植物独一味LamiophlomisRotata(Benth.)Kudo的干燥地上部分，是藏族、蒙古族、纳西族等民族用于止血、镇痛等的常用药。目前独一味广泛分布在甘肃、四川、云南、西藏、青海、内蒙古等地。其性甘、苦，平；归肝经。具有活血止血，祛风止痛的功效；常用于跌打损伤，外伤出血，风湿痹痛，黄水病。目前市面上以独一味药材入药的单味药制剂多数为止血镇痛抗炎的良药：如成都九芝堂金鼎药业有限公司止血镇痛胶囊；甘肃康县独一味生物制药有限责任公司的独一味片、独一味胶囊、独一味软胶囊。目前已有相关报道以UPLC技术对独一味药材及其制剂进行含量测定、以HPLC技术对独一味药材及其制剂进行指纹图谱质量控制，然而，未有采用UPLC法对独一味药材及其制剂进行指纹图谱质量控制的方法，且现有技术中最多同时检测独一味药材中的8种成分，本法应用UPLC技术以尽快的速度保留独一味药材及其制剂尽可能多的有效成分，并测定了独一味药材中10个指标性成分、独一味制剂中9个指标性成分，分别建立其标准图谱，对独一味药材及其制剂的快速鉴别有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术提供一种高效准确、简单迅速检测独一味药材及其制剂的UPLC指纹图谱检测方法及其指纹图谱，利用该图谱可快速简便地监控独一味药材及其制剂的质量。本专利技术技术方案如下：一种独一味药材及其制剂的UPLC指纹图谱检测方法及其指纹图谱，包括如下步骤：(1)对照品溶液的制备：分别称取胡麻属苷、咖啡酸、绿原酸、山栀苷甲酯、马钱苷、8-O-乙酰山栀苷甲酯、连翘酯苷B、木犀草苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷对照品，置于容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制成对照品溶液；(2)供试品溶液的制备：分别称取独一味药材、独一味制剂粉末(过四号筛)，置具塞三角锥形瓶中，加乙醇或10～50％甲醇或水，称重，回流提取45～75min，放冷，再称定重量，用同种溶剂补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即分别得到独一味药材及其制剂供试品溶液；(3)UPLC检测：色谱条件为：色谱柱为C18反相色谱柱(2.1×150mm,1.7μm)；柱温为30～40℃；检测波长为235nm；流动相A为乙腈，流动相B为0.1％～0.5％甲酸溶液，梯度洗脱，总流速为0.3～0.6ml/min，分析时间62分钟；所述梯度洗脱顺序表如下：表1梯度洗脱顺序表(4)以8-O-乙酰山栀苷甲酯为参照峰的标准指纹图谱的制定吸取步骤(1)(2)所得的对照品溶液、独一味药材供试品溶液、独一味制剂供试品溶液各4μl，分别注入超高效液相色谱仪中，照高效液相色谱法测定，记录色谱图；依据所得的10批独一味药材、10批独一味制剂的指纹图谱，制定标准指纹图谱；所述独一味药材的标准指纹图谱具有23个特征峰，其中16号峰为8-O-乙酰山栀苷甲酯，所述独一味制剂的标准指纹图谱具有21个特征峰，其中15号峰为8-O-乙酰山栀苷甲酯；(5)指纹图谱的质量控制将独一味药材及其制剂指纹图谱与步骤(4)制定的标准指纹图谱进行比较，计算相似度，识别所具有的共有色谱峰的数量，确定相似度。为了更好的实现本专利技术，本专利技术独一味药材及其制剂的UPLC指纹图谱检测方法，可进一步优化为：所述步骤(1)对照品溶液的制备优化为：分别称取胡麻属苷、咖啡酸、绿原酸、山栀苷甲酯、马钱苷、8-O-乙酰山栀苷甲酯、连翘酯苷B、木犀草苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷对照品各5mg，置于容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制成含对照品0.05mg/ml的对照品溶液；所述步骤(2)供试品溶液的制备优化为：分别称取独一味药材、独一味制剂粉末(过四号筛)0.8～1.2g，置具塞三角锥形瓶中，加乙醇或10～50％甲醇或水25ml，称重，回流提取60min，放冷，再称定重量，用同种溶剂补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即分别得到独一味药材及其制剂供试品溶液；所述步骤(3)中流动相B为0.1％甲酸溶液。所述步骤(3)中总流速为0.5ml/min。所述步骤(2)中微孔滤膜的孔径为0.22μm。所述独一味药材的指纹图谱，由23个共有指纹峰构成，以16号峰即8-O-乙酰山栀苷甲酯特征峰为参照峰，计算所得各共有峰的相对保留时间及相对峰面积见表1：表1独一味药材指纹图谱23个共有指纹峰的相对保留时间及相对峰面积所述独一味制剂指纹图谱是由21个共有指纹峰构成，以15号峰即8-O-乙酰山栀苷甲酯特征峰为参照峰，计算所得各共有峰的相对保留时间及相对峰面积见表2：表2独一味制剂指纹图谱21个共有指纹峰的相对保留时间及相对峰面积本专利技术所述独一味制剂以止血镇痛胶囊为代表。本专利技术与现有技术相比，具有如下有益效果：(1)本专利技术独一味药材及其制剂UPLC指纹图谱检测方法对各供试品的前处理方法简单，用于制备供试品的溶剂经济环保，特征性成分、药效性成分保留完整，且供试品溶液在24小时内稳定；(2)本专利技术中的超高效液相色谱方法精密度较高、重现性良好，且较高效液相色谱减少一半时间，节约大量时间，提高了检测效率；(3)本专利技术所建立的独一味药材标准指纹图谱有23个共有峰，标定了其中10个特征峰，独一味制剂(止血镇痛胶囊)标准指纹图谱有21个共有峰，标定了其中9个特征峰，较完整的保留了样品中的化学成分，能更全面更准确地用于独一味药材及其制剂的质量控制；(4)采用乙腈-0.1％～0.5％甲酸溶液尤其是乙腈-0.1％甲酸为流动相对独一味药材及其制剂进行分析，解决了以乙腈-不同浓度的磷酸为流动相在超高效色谱仪上对独一味药材及其制剂分离度欠佳的问题；(5)首次用起始浓度低于5％的有机相溶剂对独一味药材及其制剂进行分析，得到更多大极性成分的色谱峰，且在本法梯度条件下，供试品分离度更佳，基线更为平稳。(6)本专利技术确立了独一味药材及其制剂的UPLC指纹图谱的方法，通过该方法可获得独一味药材及其制剂的标准指纹图谱，比较指纹图谱中共有峰的有无，能有效地监控独一味药材及其制剂的质量，完善了独一味药材及其制剂质量评价体系，为全面、有效控制其质量提供了理论和实践基础。附图图110批独一味药材UPLC指纹图谱图2独一味药材UPLC标准指纹图谱图310批止血镇痛胶囊UPLC指纹图谱图4止血镇痛胶囊UPLC标准指纹图谱图5流动相为乙腈-0.4％磷酸梯度洗脱的色谱图图6流动相为乙腈-0.1％甲酸与乙腈-0.4％磷酸色谱图对比图7提取方式的选择对比图图8提取溶剂的考察(水、70％甲醇提取效果对比图)具体实施方式下面通过具体实施例对本专利技术作进一步说明，这些实施例仅用于说明本专利技术，并不限制本专利技术的范围。实施例1独一味药材指纹图谱的建立1.药材的来源为使药材具有足够的代表性，收集不同产地的药材或不同采收季节的药材作为供试品。见表3。表3独一味样品来源2.仪器与试剂、试药2.1仪器：W本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种独一味药材及其制剂的UPLC指纹图谱检测方法，其特征在于包括如下步骤：(1)对照品溶液的制备：分别称取胡麻属苷、咖啡酸、绿原酸、山栀苷甲酯、马钱苷、8‑O‑乙酰山栀苷甲酯、连翘酯苷B、木犀草苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷对照品，置于容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制成对照品溶液；(2)供试品溶液的制备：分别称取独一味药材、独一味制剂粉末(过四号筛)，置具塞三角锥形瓶中，加乙醇或10～50％甲醇或水，称重，回流提取45～75min，放冷，再称定重量，用同种溶剂补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即分别得到独一味药材及其制剂供试品溶液；(3)UPLC检测：色谱条件为：色谱柱为C18反相色谱柱(2.1×150mm,1.7μm)；柱温为30～40℃；检测波长为235nm；流动相A为乙腈，流动相B为0.1％～0.5％甲酸溶液，梯度洗脱，总流速为0.3～0.6ml/min，分析时间62分钟；所述梯度洗脱顺序表如下：表1梯度洗脱顺序表

【技术特征摘要】
1.一种独一味药材及其制剂的UPLC指纹图谱检测方法，其特征在于包括如下步骤：(1)对照品溶液的制备：分别称取胡麻属苷、咖啡酸、绿原酸、山栀苷甲酯、马钱苷、8-O-乙酰山栀苷甲酯、连翘酯苷B、木犀草苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷对照品，置于容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制成对照品溶液；(2)供试品溶液的制备：分别称取独一味药材、独一味制剂粉末(过四号筛)，置具塞三角锥形瓶中，加乙醇或10～50％甲醇或水，称重，回流提取45～75min，放冷，再称定重量，用同种溶剂补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即分别得到独一味药材及其制剂供试品溶液；(3)UPLC检测：色谱条件为：色谱柱为C18反相色谱柱(2.1×150mm,1.7μm)；柱温为30～40℃；检测波长为235nm；流动相A为乙腈，流动相B为0.1％～0.5％甲酸溶液，梯度洗脱，总流速为0.3～0.6ml/min，分析时间62分钟；所述梯度洗脱顺序表如下：表1梯度洗脱顺序表(4)以8-O-乙酰山栀苷甲酯为参照峰的标准指纹图谱的制定吸取步骤(1)(2)所得的对照品溶液、独一味药材供试品溶液、独一味制剂供试品溶液各4μl，分别注入超高效液相色谱仪中，照高效液相色谱法测定，记录色谱图；依据所得的10批独一味药材、10批独一味制剂的指纹图谱，制定标准指纹图谱；所述独一味药材的标准指纹图谱具有23个特征峰，其中16号峰为8-O-乙酰山栀苷甲酯，所述独一味制剂的标准指纹图谱具有21个特征峰，其中15号峰为8-O-乙酰山栀苷甲酯；(5)指纹图谱的质量控制将独一味药材及其制剂指纹图谱与步骤(4)制定的标准指纹图谱进行比较，计算相似度，识别所具有的共有色谱峰的数量，确定相似度。2.根据权利要求1所述的独一味药材及其制剂的UPHC指纹图谱检测方法，其特征在于其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓芸，黄胜，叶惠煊，周良，袁利群，
申请(专利权)人：九芝堂股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南,43