检测牛奶中硝基咪唑类抗菌药残留量的方法技术

本发明专利技术公开了检测牛奶中硝基咪唑类抗菌药残留量的方法，该方法包括：利用乙酸乙酯对牛奶进行提取处理，以便得到提取液；将所述提取液进行净化处理，以便得到净化液；以及将所述净化液进行液相色谱检测，以便确定所述牛奶中硝基咪唑类抗菌药残留量。利用本发明专利技术的方法能够快速、准确且稳定地检测牛奶中硝基咪唑类抗菌药残留量。

Detection of Nitroimidazole Residues in Milk

【技术实现步骤摘要】
检测牛奶中硝基咪唑类抗菌药残留量的方法
本专利技术涉及食品领域。具体地，本专利技术涉及检测牛奶中硝基咪唑类抗菌药残留量的方法。
技术介绍
硝基咪唑类抗菌药主要用于预防和治疗家禽的组织滴虫和寄生虫、牛的滴虫、猪的出血性肠炎、鱼的寄生虫感染、蜂的微孢子虫病等。由于硝基咪唑类药物具有致畸、致突变和致癌作用，因此准确地检测产品中硝基咪唑类十分必要。然而，目前针对硝基咪唑类抗菌药的检测方法仍有待研究。
技术实现思路
本专利技术旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。为此，本专利技术提出了检测牛奶中硝基咪唑类抗菌药残留量的方法。利用本专利技术的方法能够快速、准确且稳定地检测牛奶中硝基咪唑类抗菌药残留量，尤其是甲硝唑、替硝唑和奥硝唑。需要说明的是，本专利技术是基于专利技术人的下列发现而完成的：目前，针对硝基咪唑类抗菌药的检测方法主要涉及饲料和禽类。专利技术人发现，由于牛奶与饲料及禽类基质的性质显著不同，导致用于检测饲料和禽类中硝基咪唑类抗菌药的方法并不适用于牛奶，存在准确性低、稳定性差、操作复杂以及用时长等问题。有鉴于此，专利技术人经过大量实验得到了检测牛奶中硝基咪唑类抗菌药残留量的方法，利用本专利技术的方法能够快速、准确且稳定地检测牛奶中硝基咪唑类抗菌药残留量，尤其是甲硝唑、替硝唑和奥硝唑。为此，在本专利技术的一个方面，本专利技术提出了一种检测牛奶中硝基咪唑类抗菌药残留量的方法。根据本专利技术的实施例，所述方法包括：利用乙酸乙酯对牛奶进行提取处理，以便得到提取液；将所述提取液进行净化处理，以便得到净化液；以及将所述净化液进行液相色谱检测，以便确定所述牛奶中硝基咪唑类抗菌药残留量。专利技术人基于牛奶的特殊性质，发现仅利用乙酸乙酯即可充分提取出牛奶中的硝基咪唑类抗菌药，而现有的提取方法大多采用多种试剂(例如氯化钠、磷酸氢二钾、无水硫酸钠等)同时进行提取，多种试剂对于后续的净化及色谱检测会存在干扰，从而影响检测结果的准确性和稳定性，且增加工作量、提高成本。由此，根据本专利技术实施例的检测牛奶中硝基咪唑类抗菌药残留量的方法准确性高以及稳定性强，且操作简便。根据本专利技术的实施例，基于1克所述牛奶，所述乙酸乙酯的用量为5～10毫升。专利技术人经过大量实验获得上述最优配比，在此条件下能够充分提取出牛奶中的硝基咪唑类抗菌药，其他配比的效果不佳。例如，若乙酸乙酯用量过少，无法完全提取出硝基咪唑类抗菌药，导致检测结果偏低；若乙酸乙酯用量过多，后续色谱检测所得到的峰面积过小，导致检测结果的准确性较低。由此，根据本专利技术实施例的检测牛奶中硝基咪唑类抗菌药残留量的方法进一步具有较高的准确性或者较强的稳定性，且操作简便。根据本专利技术的实施例，所述提取处理包括：将所述牛奶与部分所述乙酸乙酯进行混合处理，并将所得到的混合液进行离心处理，收集第一上清液；将所述上清液与剩余部分所述乙酸乙酯进行混合处理，并将所得到的混合液进行离心处理，收集第二上清液；以及将所述第一上清液和第二上清液合并，以便得到所述提取液。由此，根据本专利技术实施例的检测牛奶中硝基咪唑类抗菌药残留量的方法进一步具有较高的准确性或者较强的稳定性，且操作简便。需要说明的是，前面描述的“乙酸乙酯的用量为5～10毫升”是指上述两步混合处理所需的乙酸乙酯的总量为5～10毫升。根据本专利技术的实施例，所述混合处理时间为8～10分钟，所述离心处理是在6000～10000r/min下进行8～10分钟。专利技术人发现，仅利用乙酸乙酯提取牛奶中的硝基咪唑类抗菌药，无需混合过长时间，8～10分钟即可使硝基咪唑类抗菌药充分溶解于乙酸乙酯中，再通过离心处理即可获得溶解有硝基咪唑类抗菌药的提取液。由此，根据本专利技术实施例的检测牛奶中硝基咪唑类抗菌药残留量的方法进一步具有较高的准确性或者较强的稳定性，且操作简便。根据本专利技术的实施例，所述净化处理包括：将所述提取液进行浓缩，并用盐酸溶液将所得到的浓缩物进行溶解，以便得到溶解液；利用正己烷对所述溶解液进行混合及离心处理，收集下层液；以及将所述下层液进行固相萃取处理，以便得到所述净化液。由此，能够有效地避免提取液中的杂质影响后续色谱检测的准确性和稳定性，且能够延长色谱仪器的使用寿命。根据本专利技术的实施例，所述盐酸溶液的浓度为0.1～0.2mol/L，用量为5～8毫升。专利技术人经过大量实验得到上述较优条件，由此，能够充分溶解浓缩后的残渣。根据本专利技术的实施例，所述固相萃取处理包括：预先依次用3毫升甲醇和2毫升0.1mol/L盐酸溶液活化固相萃取小柱，将所述下层液上柱；再依次用1.0毫升0.1mol/L盐酸溶液、1毫升甲醇、1毫升体积比为1:9的甲醇-水溶液淋洗固相萃取小柱，抽干；最后用6.0毫升5体积％氨化甲醇溶液洗脱所述固相萃取小柱，收集洗脱液，于40℃氮气吹干，用流动相定容至1.0毫升，经0.22μm微孔有机滤膜过滤，以便得到所述净化液。专利技术人经过大量实验得到上述较优的固相萃取条件，由此，能够充分净化杂质，避免其影响后续色谱检测的准确性和稳定性，且能够延长色谱仪器的使用寿命。由此，根据本专利技术实施例的检测牛奶中硝基咪唑类抗菌药残留量的方法进一步具有较高的准确性或者较强的稳定性，且操作简便。根据本专利技术的实施例，所述液相色谱检测条件包括：色谱柱：VenusilXBPC18，250×4.6mm，5μm；柱温：32℃；流动相：乙酸缓冲液和乙腈，体积比为86：14；流速：1.0mL/min；进样量：30μL；波长：320nm。专利技术人经过大量实验得到上述较优检测条件，由此，根据本专利技术实施例的检测牛奶中硝基咪唑类抗菌药残留量的方法进一步具有较高的准确性或者较强的稳定性，且操作简便。根据本专利技术的实施例，所述硝基咪唑类抗菌药为甲硝唑、替硝唑和奥硝唑。专利技术人发现，利用本专利技术的方法能够同时检测上述三种硝基咪唑类抗菌药，且相比于其他类硝基咪唑类抗菌药，针对上述三种抗菌药的检测结果准确性高、稳定性强。在本专利技术的另一方面，本专利技术提出了另一种检测牛奶中硝基咪唑类抗菌药残留量的方法。根据本专利技术的实施例，所述方法包括：(1)提取：称取样品4～6克，置于50毫升离心管中，加入20毫升乙酸乙酯，振荡提取10分钟，8000r/min离心10分钟，上清液倒入蒸发瓶中，在残渣中加入20毫升乙酸乙酯，重复提取一次，离心，合并两次提取液。(2)净化：(2-1)将提取液于40℃以下旋转浓缩至近干，用6毫升0.1mol/L盐酸溶液溶解残渣后转移至15毫升离心管中，加入5.0毫升正己烷，漩涡振荡萃取脱脂，弃去上层正己烷层，重复萃取一次，取下层液备用。(2-2)预先依次用3毫升甲醇和2毫升0.1mol/L盐酸溶液活化固相萃取小柱，将所述下层液上柱；再用1.0毫升0.1mol/L盐酸溶液、1毫升甲醇、1毫升甲醇-水溶液(1:9，v/v)淋洗所述固相萃取小柱，抽干；最后用6.0毫升5％氨化甲醇溶液洗脱所述固相萃取小柱，收集洗脱液，于40℃氮气吹干，用流动相定容至1.0毫升，经0.22μm微孔有机滤膜过滤，得到待测液。(3)测定：分别对所述待测液以及等体积的标准品溶液进行液相色谱检测，并基于检测结果确定所述硝基咪唑类抗菌药残留量，其中，所述液相色谱检测条件如下：1)色谱柱：VenusilXBPC18,250×4.6mm,5μm；2)柱温：32℃；3)流动相：乙酸缓冲液和乙腈，体积比为86：本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测牛奶中硝基咪唑类抗菌药残留量的方法，其特征在于，包括：(1)提取：称取样品4～6克，置于50毫升离心管中，加入20毫升乙酸乙酯，振荡提取10分钟，8000r/min离心10分钟，分离得到上清液和残渣，将所述上清液倒入蒸发瓶中，在所述残渣中加入20毫升乙酸乙酯，重复提取一次，离心，合并两次提取液。(2)净化：(2‑1)将所述提取液于40℃以下旋转浓缩至近干，用6毫升0.1mol/L盐酸溶液溶解残渣后转移至15毫升离心管中，加入5.0毫升正己烷，漩涡振荡萃取脱脂，弃去上层正己烷层，重复萃取一次，取下层液备用。(2‑2)预先依次用3毫升甲醇和2毫升0.1mol/L盐酸溶液活化固相萃取小柱，将所述下层液上柱；再用1.0毫升0.1mol/L盐酸溶液、1毫升甲醇、1毫升甲醇‑水溶液(1:9，v/v)淋洗所述固相萃取小柱，抽干；最后用6.0毫升5％氨化甲醇溶液洗脱所述固相萃取小柱，收集洗脱液，于40℃氮气吹干，用流动相定容至1.0毫升，经0.22μm微孔有机滤膜过滤，得到待测液。(3)测定：分别对所述待测液以及等体积的标准品溶液进行液相色谱检测，并基于检测结果确定所述硝基咪唑类抗菌药残留量，其中，所述液相色谱检测条件如下：1)色谱柱：Venusil XBP C18，250×4.6mm，5μm；2)柱温：32℃；3)流动相：乙酸缓冲液和乙腈，体积比为86：14；4)流速：1.0mL/min；5)进样量：30μL；6)波长：320nm。...

【技术特征摘要】
1.一种检测牛奶中硝基咪唑类抗菌药残留量的方法，其特征在于，包括：(1)提取：称取样品4～6克，置于50毫升离心管中，加入20毫升乙酸乙酯，振荡提取10分钟，8000r/min离心10分钟，分离得到上清液和残渣，将所述上清液倒入蒸发瓶中，在所述残渣中加入20毫升乙酸乙酯，重复提取一次，离心，合并两次提取液。(2)净化：(2-1)将所述提取液于40℃以下旋转浓缩至近干，用6毫升0.1mol/L盐酸溶液溶解残渣后转移至15毫升离心管中，加入5.0毫升正己烷，漩涡振荡萃取脱脂，弃去上层正己烷层，重复萃取一次，取下层液备用。(2-2)预先依次用3毫升甲醇和2毫升0.1mol/L盐酸溶液活化固相萃取小柱，将所述下层液上柱；再用1.0毫升0.1mol/L盐酸溶液、1毫升甲醇、1毫升甲醇-水溶液(1:9，v/v)淋洗所述固相萃取小柱，抽干；最后用6.0毫升5％氨化甲醇溶液洗脱所述固相萃取小柱，收集洗脱液，于40℃氮气吹干，用流动相定容至1.0毫升，经0.22μm微孔有机滤膜过滤，得到待测液。(3)测定：分别对所述待测液以及等体积的标准品溶液进行液相色谱检测，并基于检测结果确定所述硝基咪唑类抗菌药残留量，其中，所述液相色谱检测条件如下：1)色谱柱：VenusilXBPC18，250×4.6mm，5μm；2)柱温：32℃；3)流动相：乙酸缓冲液和乙腈，体积比为86：14；4)流速：1.0mL/min；5)进样量：30μL；6)波长：320nm。2.一种检测牛奶中硝基咪唑类抗菌药残留量的方法，其特征在于，包括：利用乙酸乙酯对牛奶进行提取处理，以便得到提取液；将所述提取液进行净化处理，以便得到净化液；以及将所述净化液进行液相色谱检测，以便确定所述牛奶中硝基咪唑类抗菌药残留量。3.根据权利要求2所述方法，其特征在于，基于1克所述牛奶，所述乙酸乙酯的用量为5～10毫升。4...

【专利技术属性】
技术研发人员：于敏，张美娟，张河霞，王丹慧，武慧明，乌恩其木格，秦培林，
申请(专利权)人：内蒙古蒙牛乳业集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：内蒙古,15