一种CYBB慢病毒载体、慢病毒载体转染的干细胞及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种CYBB慢病毒载体、慢病毒载体转染的干细胞及其制备方法和应用，所述慢病毒载体包括hEF1α启动子和CYBB串联共表达。本发明专利技术的慢病毒载体携带CYBB基因，在hEF1α启动子的启动下，实现了携带的CYBB基因在已分化或未分化的干细胞中的安全高效表达，同时，干细胞作为潜在的传送载体，提高了CYBB基因在转基因细胞中的表达量。

Stem cells transfected with CYBB lentivirus vector and lentivirus vector and their preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
一种CYBB慢病毒载体、慢病毒载体转染的干细胞及其制备方法和应用
本专利技术属于基因工程
，涉及一种慢病毒载体、慢病毒载体转染的干细胞及其制备方法和应用，具体涉及一种CYBB慢病毒载体、慢病毒载体转染的干细胞及其制备方法和应用。
技术介绍
慢性肉芽肿病(CGD)是一种NADPH氧化酶在中性粒细胞(neutrophilicgranulocytes)和单核细胞(monocytes)中功能缺失而引起的遗传性原发免疫缺陷病，其特点是病人会发生反复感染、炎症及自身免疫。NADPH氧化酶由p47phox、p40phox、p67phox和qp91-phox组成，其中任何一部分功能缺失均会引发CGD。该病多数为性联隐性遗传，少数为常染色体隐性遗传，常有家族史，多见于儿童。其中较常见的是细胞色素b的qp91-phox亚单位基因突变，病人数约占总病人的65％。突变的基因被命名为CYBB(MIM306400)，含有13个外显子，位于X染色体xp21.1，约占30kb。NADPH氧化酶复合物由膜结合蛋白和细胞质蛋白组成，它们在吞噬细胞活化时具有协同作用，协助产生活性氧(ROS)杀灭细菌和真菌。通常情况本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种慢病毒载体，其特征在于，所述慢病毒载体包括hEF1α启动子和CYBB串联共表达。

【技术特征摘要】
1.一种慢病毒载体，其特征在于，所述慢病毒载体包括hEF1α启动子和CYBB串联共表达。2.根据权利要求1所述的慢病毒载体，其特征在于，所述hEF1α启动子的核酸序列如SEQIDNO.1所示；优选地，所述CYBB的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示；优选地，所述CYBB的核酸序列如SEQIDNO.3所示。3.一种慢病毒，其特征在于，所述慢病毒导入有如权利要求1或2所述的慢病毒载体。4.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞转染有如权利要求3所述的慢病毒；优选地，所述宿主细胞包括干细胞；优选地，所述干细胞包括造血干细胞。5.一种如权利要求4所述宿主细胞的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)构建如权利要求1或2所述的慢病毒载体；(2)将步骤(1)所述的慢病毒载体与包装质粒共转染哺乳细胞，进行慢病毒包装；(3)将步骤(2)包装的慢病毒转化入宿主细胞基因组，得到所述宿主细胞。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述构建的方法为将hEF1α启动子和CYBB经限制性酶切接入TYF慢病毒载体；优选地，步骤(2)所述包装质粒包括pNHP和pHEF-VSVG；优选地，步骤(2)所述哺乳细胞包括293T细胞。...

【专利技术属性】
技术研发人员：王硕，
申请(专利权)人：北京美康基免生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11