一种抗PSMA单链抗体及与其相关的嵌合抗原受体和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抗PSMA单链抗体及与其相关的嵌合抗原受体和应用。所述抗PSMA单链抗体的重链的氨基酸序列包括SEQ ID NO.1所示的序列，轻链的氨基酸序列包括SEQ IDNO.2所示的序列。本发明专利技术的抗PSMA单链抗体为人源化的PSMA的scFv抗体，在人体内功能更强，相合度更好，且不易被免疫系统排斥，本发明专利技术的嵌合抗原受体专一性地与PSMA结合后有更好的反应效果，使得CAR

【技术实现步骤摘要】
一种抗PSMA单链抗体及与其相关的嵌合抗原受体和应用


[0001]本专利技术属于肿瘤免疫治疗
，涉及一种抗PSMA单链抗体及与其相关的嵌合抗原受体和应用。

技术介绍

[0002]随着肿瘤免疫学理论和临床技术的发展，嵌合抗原受体T细胞疗法(Chimeric antigen receptor T
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cell immunotherapy，CAR
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T)成为目前最有发展前景的肿瘤免疫疗法之一。一般情况下，嵌合抗原受体CAR由一个肿瘤相关抗原结合区、胞外铰链区、跨膜区域以及胞内信号转导区组成。通常，CAR包含抗体的单链片段可变(Single chain fragment variable，scFv)区或对肿瘤相关抗原(tumor associated antigen，TAA)具有特异性的结合结构域，其通过铰链和跨膜区与T细胞信号传导分子的胞质结构域偶联。最常见的淋巴细胞活化部分包括与T细胞效应物功能触发(例如CD3ζ)部分串联的T细胞共刺激结构域。
[0003]CAR介导的过继性免疫疗法允许CAR移植的T细胞以非HLA限制性的方式直接识别靶肿瘤细胞上的TAA。目前，CAR
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T的治疗在血液肿瘤上取得了一定的效果，二代CD19CAR
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T在复发难治的B系急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴白血病以及淋巴瘤上都被证实有抗肿瘤的功效，整体反应率根据肿瘤的不同约在50％～90％之间。
[0004]PSMA(prostate specific membrane antigen，前列腺特异膜抗原)广泛地表现在前列腺癌、肾癌、膀胱癌、胶质母细胞、脑瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤等肿瘤与肿瘤微环境微血管中，在正常组织中低量且局限性地表达，是一种免疫治疗理想的肿瘤相关抗原。目前此癌症抗原多应用于前列腺癌的治疗当中，此为发生在前列腺的上皮恶性肿瘤，是男性泌尿生殖系统常见的恶性肿瘤。但是不仅在前列腺肿瘤，PSMA也在大多肿瘤的基质组织微血管中高表达。
[0005]目前在胶质母细胞瘤、脑瘤的免疫治疗中，发展较为成熟的有针对PSMA的抗体治疗，这一方式在临床上取得了初步的成功。抗体施打后存在于外周血中，较难精准地进入肿瘤组织或肿瘤微小残留的部位，且无法长期存在体内。因此，制备一种嵌合抗原受体PSMA CAR
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T细胞，除了具有抗体治疗的优点，且由于T细胞本身的特性，可精准地进入肿瘤组织，并长期记忆性的存在于体内，能为复发难治的前列腺癌患者提供一个更有效的治疗选择。目前通过PSMA CAR
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T治疗胶质母细胞瘤的临床报导皆初步显示了CAR
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T的有效性，但仍缺乏长期观察的数据。
[0006]目前，CAR
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T技术治疗实体肿瘤的效果并不十分理想，许多CAR
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T的scFv区域多从鼠源的抗体衍生而来，鼠源scFv容易遭到人类免疫系统的排斥，造成CAR
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T于体内无法长期存在，从而使治疗效果受限。有报导指出，这也是许多急性淋巴细胞白血病的病人，在使用CD19CAR
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T完全缓解后又复发的原因之一，且也造成了再治疗的困难性。
[0007]因此，如何提供治疗效果好、持续时间长的人源化的PSMA CAR
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T，已成为肿瘤免疫治疗
亟待解决的问题之一。

技术实现思路

[0008]为达上述目的，本专利技术提供一种抗PSMA单链抗体及与其相关的嵌合抗原受体和应用，所述抗PSMA单链抗体具备高特异性和亲和力，能够高效结合PSMA，利用其PSMA嵌合抗原受体以及相应的CAR
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T，可以清除PSMA阳性的实体肿瘤，有效靶向肿瘤微环境清除微小残留，且不会发生严重不良反应，提高了CAR
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T的安全性、有效性、记忆性以及长期维持性。
[0009]为达上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0010]第一方面，本专利技术中，所述抗PSMA单链抗体为人源化的PSMA的scFv抗体，针对肿瘤表面抗原PSMA进行了人源化密码与人源化抗体结构(framework)的特异性改造，改造后的scFv抗体在人体内功能更强，相合度更好，且不易被免疫系统排斥。
[0011]本专利技术中，所述抗PSMA单链抗体的重链的氨基酸序列包括与SEQ ID NO.1具有80％以上的同一性的序列，所述抗PSMA单链抗体的轻链的氨基酸序列包括与SEQ ID NO.2具有80％以上的同一性的序列。
[0012]SEQ ID NO.1：
[0013]EVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKISGYTFTEYTIHWVKQASGKGLEWIGNINPNNGGTTYNQKFEDRATLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAAGWNFDYWGQGTTVTVSSGSTSGSGKPGSSEGSTKG。
[0014]SEQ ID NO.2：
[0015]DIVMTQSPSSLSASVGDRVTIICKASQDVGTAVDWYQQKPGKAPKLLIYWASTRHTGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSLQPEDFADYFCQQYNSYPLTFGGGTKLEIK。
[0016]第二方面，本专利技术提供一种核酸分子，所述核酸分子包括编码第一方面所述的抗PSMA单链抗体的核酸序列。
[0017]优选地，所述核酸分子的核苷酸序列与SEQ ID NO.3具有80％以上的同一性。
[0018]SEQ ID NO.3：
[0019]gaggtccaactggtgcagtctggtgctgaagtgaagaagcctggtgccagcgtgaagattagctgcaagattagcggctacaccttcaccgagtataccattcactgggtcaaacaagcctctggaaaagggctggaatggataggcaatatcaaccccaacaatggcggaacaacctacaaccaaaagtttgaggatcgtgccactctgacggttgacaagtccacgagcacagcctacatggagctgtcaagtctgaggtccgaggatactgcggtctactattgtgctgctgggtggaacttcgactattggggacagggtacgacagttactgtgtcctcaggctcaacatccggctctggaaagcctgggtccagtgaagggagcacaaaaggggacatcgtgatgacccagtctccaagcagccttagcgctagtgtaggggatcgagtgaccatcatctgcaaagcatctcaggacgtaggcactgcagtggattggtatcagcagaaaccaggaaaagcgccgaaactgttgatctactgggcaagtacacgccacactggagtcccagatcggtttacc本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗PSMA单链抗体，其特征在于，所述抗PSMA单链抗体的重链的氨基酸序列包括与SEQ ID NO.1具有80％以上的同一性的序列，所述抗PSMA单链抗体的轻链的氨基酸序列包括与SEQ ID NO.2具有80％以上的同一性的序列。2.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包括编码权利要求1所述的抗PSMA单链抗体的核酸序列。3.一种PSMA嵌合抗原受体，其特征在于，所述PSMA嵌合抗原受体包括抗原结合结构域、跨膜结构域、共刺激信号传导区和CD3ζ信号传导结构域；所述抗原结合结构域包括权利要求1所述抗PSMA单链抗体。4.根据权利要求3所述的PSMA嵌合抗原受体，其特征在于，所述跨膜结构域包括CD28跨膜结构域和/或CD8α跨膜结构域；优选地，所述共刺激信号传导区包括CD28和CD27信号结构传导区或CD28和IL
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15Ra信号结构传导区；优选地，所述CD28和CD27信号结构传导区的氨基酸序列与SEQ ID NO.3具有90％以上的同一性；优选地，所述CD28和IL
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15Ra信号结构传导区的氨基酸序列与SEQ ID NO.4具有90％以上的同一性；优选地，所述PSMA嵌合抗原受体还包括诱导自杀融合结构域；优选地，所述诱导自杀融合结构域包括胱天蛋白酶9结构域；优选地，所述胱天蛋白酶9结构域的氨基酸序列与SEQ ID NO.5具有90％以上的同一性；优选地，所述PSMA嵌合抗原受体还包括信号肽和/或2A序列；优选地，所述信号肽包括Secretory信号肽；优选地，所述PSMA嵌合抗原受体包括Secretory信号肽、抗原结合结构域、跨膜结构域、共刺激信号传导区、CD3ζ信号传导结构域、2A序列和诱导自杀融合结构域。5.一种病毒载体，其特征在于，所述病毒载体含有编码权...

【专利技术属性】
技术研发人员：张隆基，刘昱辰，
申请(专利权)人：北京美康基免生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：