抗TROP2单域抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及抗体药物技术领域，提供了一组针对TROP2的特异性单域抗体编码序列及其应用。本发明专利技术提供的抗TROP2单域抗体能有效与TROP2抗原结合，为靶向TROP2的药物包括核素偶联药物，抗体偶联药物及多特异性抗体药物等研发提供了基础。发提供了基础。

【技术实现步骤摘要】
抗TROP2单域抗体及其应用


[0001]本专利技术涉及抗体领域，具体地涉及针对TROP2的特异性单域抗体及其编码序列和其在疾病诊断和治疗中的应用。

技术介绍

[0002]滋养层细胞表面抗原2(TROP2)，又名表皮糖蛋白1(EGP
‑
1)、胃肠肿瘤相关抗原(GA733
‑
1)、表面标志物1(M1S1)、肿瘤相关钙离子信号转导子2(TACSTD2)。TROP2是一个35kDa的单程跨膜糖蛋白，该结构域包括一个富含半胱氨酸的结构域(CRD)、一个酪氨酸球蛋白1型结构域(TY
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1)和一个缺乏半胱氨酸的结构域(CPD)。TROP2主要通过调节钙离子信号通路、Wnt信号通路、细胞周期蛋白表达及降低纤黏蛋白黏附作用促进肿瘤细胞生长、增殖和转移。
[0003]研究表明，TROP2在多种上皮癌，包括乳腺癌、肺癌、胃癌、胰腺癌、宫颈癌、前列腺癌、结肠癌等肿瘤中都有大量表达，其过度表达与预后不良和转移风险增加有关。TROP2在正常组织中表达有限，能够有效降低潜在治疗毒性，成为靶向治疗的一个天然候选靶点。以TROP2为靶点的抗体、抗体偶联物以及联合用药等多种形式的药物正处于临床研发中(Zaman,2019)。其中，新型抗体偶联药物(ADC)，利用人源化抗体hRS7作为靶向载体与伊立替康活性代谢产物SN38偶联而成的Trodelvy(Sacituzumab govitecan)，已获得FDA上市批准应用于转移性三阴性乳癌和和转移性尿路上皮细胞癌。其中3期ASCENT研究数据证明，Trodelvy有效降低了疾病恶化或死亡的风险(无进展生存期(PFS))57％，将中位PFS从化疗后的1.7个月延长至4.8个月(HR:0.43；95％可信区间：0.35
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0.54；p<0.0001)。另外，还将死亡风险降低了49％，将中位总生存期(OS)从6.9个月延长到11.8个月(HR:0.51；95％可信区间：0.41
‑
0.62；p<0.0001)(Bardia,2021)。此外，利用RS7抗体或抗体片段作为靶向TROP2载体标记放射性同位素Lu177的放射免疫疗法，在多种肿瘤细胞系(Calu
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3和BxPC
‑
3)的异种移植模型中具有显著的特异性抗癌作用(Van Rij,2014)。
[0004]截至目前，市场上尚未有针对TROP2靶点的单域抗体药物，单域抗体即骆驼重链单域抗体VHH(variable domain of heavy
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chain antibody)，是目前可以得到的具有完整功能的稳定的可结合抗原的最小单位。单域抗体其分子量是传统抗体的1/10，具有稳定性高、水溶性好、人源化简单、靶向性高、穿透性强等特点。单域抗体作为放射性同位素靶向载体，能够快速、特异性地穿透肿瘤组织结合靶标，而无结合抗体能很快从血液清除，降低身体放射性剂量，对比传统抗体用于开发放射免疫成像及放射免疫疗法具有众多明显优势(D
’
Huyvetter,2014)。
[0005]因此，本领域需要开发一种抗TROP2单域抗体，尤其是能够单一有效地结合TROP2的特异性单域抗体，开发新一代放射免疫成像及放射免疫疗法。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种具备良好的TROP2抗原结合性的抗TROP2单域抗体。
[0007]本专利技术的第一方面，提供了一种抗TROP2单域抗体VHH链的互补决定区CDR，所述VHH链的互补决定区CDR包含：
[0008]SEQ ID NO:17
‑
23所示的CDR1；
[0009]SEQ ID NO:24
‑
29所示的CDR2；和
[0010]SEQ ID NO:30
‑
35所示的CDR3。
[0011]在另一优选例中，所述的CDR1、CDR2和CDR3由VHH链的框架区FR1、FR2、FR3和FR4所隔开。
[0012]在另一优选例中，所述VHH链的互补决定区CDR包含：
[0013]SEQ ID NO:17所示的CDR1；
[0014]SEQ ID NO:24所示的CDR2；和
[0015]SEQ ID NO:30所示的CDR3。
[0016]在另一优选例中，所述VHH链的互补决定区CDR包含：
[0017]SEQ ID NO:20所示的CDR1；
[0018]SEQ ID NO:27所示的CDR2；和
[0019]SEQ ID NO:33所示的CDR3。
[0020]在另一优选例中，所述VHH链的互补决定区CDR包含：
[0021]SEQ ID NO:23所示的CDR1；
[0022]SEQ ID NO:29所示的CDR2；和
[0023]SEQ ID NO:35所示的CDR3。
[0024]在另一优选例中，所述VHH链的互补决定区CDR包含选自下组的CDR1、CDR2和CDR3：
[0025]组CDR1序列编号CDR2序列编号CDR3序列编号11724302182531319263242027335212834620273372227338232935。
[0026]本专利技术的第二方面，提供了一种抗TROP2单域抗体的VHH链，所述VHH链包括框架区FR和本专利技术第一方面所述的互补决定区CDR。
[0027]在另一优选例中，所述的框架区由
[0028](Z1)SEQ ID NO:36所示的FR1，SEQ ID NO:43所示的FR2，SEQ ID NO:48所示的FR3，和SEQ ID NO:54所示的FR4组成。
[0029]在另一优选例中，所述的框架区由
[0030](Z2)SEQ ID NO:39所示的FR1，SEQ ID NO:45所示的FR2，SEQ ID NO:51所示的FR3，和SEQ ID NO:54所示的FR4组成。
[0031]在另一优选例中，所述的框架区由
[0032](Z3)SEQ ID NO:40所示的FR1，SEQ ID NO:44所示的FR2，SEQ ID NO:53所示的FR3，和SEQ ID NO:54所示的FR4组成。
[0033]在另一优选例中，所述框架区由选自下组的FR1、FR2、FR3和FR4组成：
[0034][0035][0036]在另一优选例中，所述的抗TROP2单域抗体的VHH链具有如SEQ ID NO:1
‑
8任一所示的氨基酸序列。
[0037]在另一优选例中，所述的抗TROP2单域抗体的VHH链具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
[0038]在另一优选例中，所述的抗TROP2单域抗体的VHH链具有如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。
[0039]在另一优选例本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗TROP2单域抗体VHH链的互补决定区CDR，其特征在于，所述VHH链的互补决定区CDR包含：SEQ ID NO:17
‑
23所示的CDR1；SEQ ID NO:24
‑
29所示的CDR2；和SEQ ID NO:30
‑
35所示的CDR3。2.一种抗TROP2单域抗体的VHH链，所述VHH链包括框架区FR和权利要求1所述的互补决定区CDR。3.一种抗TROP2单域抗体，其特征在于，所述单域抗体是针对TROP2蛋白的单域抗体，并且具有如SEQ ID NO:1
‑
8任一所示的氨基酸序列的VHH链。4.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码选自下组的蛋白质：权利要求1所述的CDR区、权利要求2所述的抗TROP2单域抗体的VHH链、或权利要求3所述的抗TROP2单域抗体。5.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有权利要求4所述的多核苷酸。6.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有权利要求5所述的表达载体，或其基因组中整合有权利要求4所述的多核苷酸。7.一种产生抗TROP2单域抗体的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄仲廉，丁航海，
申请(专利权)人：和迈生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：