与CD3结合的抗体制造技术

本发明专利技术一般地涉及与CD3结合的抗体，包括例如用于活化T细胞的多特异性抗体。此外，本发明专利技术涉及编码此类抗体的多核苷酸，以及包含此类多核苷酸的载体和宿主细胞。本发明专利技术进一步涉及用于生产所述抗体的方法，以及涉及在疾病的治疗中使用所述抗体的方法。疗中使用所述抗体的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】与CD3结合的抗体


[0001]本专利技术一般地涉及与CD3结合的抗体，包括例如用于活化T细胞的多特异性抗体。此外，本专利技术涉及编码此类抗体的多核苷酸，以及包含此类多核苷酸的载体和宿主细胞。本专利技术进一步涉及用于生产所述抗体的方法，以及涉及在疾病的治疗中使用该抗体的方法。

技术介绍

[0002]CD3(分化簇3)是由四个亚基(CD3γ链、CD3δ链和两个CD3ε链)组成的蛋白质复合物。CD3与T细胞受体和ζ链缔合，以在T淋巴细胞中产生活化信号。
[0003]CD3作为药物靶点已被广泛探索。靶向CD3的单克隆抗体已被用作自身免疫性疾病(诸如I型糖尿病)的免疫抑制剂疗法，或用于移植排斥的治疗中。1985年，CD3抗体莫罗单抗
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CD3(OKT3)是第一种获准在临床上用于人类的单克隆抗体。
[0004]CD3抗体最近的应用是以双特异性抗体形式，其一方面结合CD3，另一方面结合肿瘤细胞抗原。这种抗体与其两个靶标的同时结合将迫使靶细胞与T细胞之间发生暂时的相互作用，从而活化任何细胞毒性T细胞并随后裂解靶细胞。
[0005]出于治疗目的，抗体必须满足的一个重要要求是在体外(用于储存药物)和体内(对患者施用之后)有足够的稳定性。
[0006]如天冬酰胺脱酰胺化等修饰是重组抗体的典型降解，并且可影响体外稳定性和体内生物学功能两者。
[0007]鉴于抗体，特别是用于活化T细胞的双特异性抗体的巨大治疗潜力，需要具有优化的特性的CD3抗体。

技术实现思路

[0008]本专利技术提供了抗体，包括多特异性(例如双特异性)抗体，其以良好的亲和力与CD3结合并且抵抗由例如天冬酰胺脱酰胺化引起的降解，因此特别稳定(如治疗目的所需)。所提供的(多特异性)抗体结合了良好的功效(例如杀伤靶细胞)和可生产性与低毒性(例如在不存在靶细胞的情况下不活化T细胞)以及良好的药代动力学特性。
[0009]如本文所示，本专利技术提供的与CD3结合的抗体(包括多特异性抗体)，相对于在pH 6、
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80℃2周后与CD3的结合活性，在pH 7.4、37℃2周后保留超过约95％的结合活性，如通过表面等离子体共振(SPR)所测定。
[0010]在一个方面，本专利技术提供了一种与CD3结合的抗体，其中该抗体包含第一抗原结合结构域，该第一抗原结合结构域包含
[0011](i)重链可变区(VH)，其选自由以下项组成的组：
[0012](a)VH，其包含SEQ ID NO:2的重链互补决定区(HCDR)1、SEQ ID NO:4的HCDR 2和SEQ ID NO:10的HCDR 3；
[0013](b)VH，其包含SEQ ID NO:2的HCDR 1、SEQ ID NO:4的HCDR 2和SEQ ID NO:12的HCDR 3；
[0014](c)VH，其包含SEQ ID NO:2的HCDR 1、SEQ ID NO:5的HCDR 2和SEQ ID NO:9的HCDR 3；
[0015](d)VH，其包含SEQ ID NO:3的HCDR 1、SEQ ID NO:6的HCDR 2和SEQ ID NO:11的HCDR 3；或
[0016](e)VH，其包含SEQ ID NO:3的HCDR 1、SEQ ID NO:7的HCDR 2和SEQ ID NO:13的HCDR 3；
[0017]以及
[0018](ii)轻链可变区(VL)，其包含SEQ ID NO:20的轻链互补决定区(LCDR)
[0019]1、SEQ ID NO:21的LCDR 2和SEQ ID NO:22的LCDR 3。
[0020]在一个方面，该VH包含与选自由SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:19组成的组的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列；和/或该VL包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。
[0021]在又一方面，本专利技术提供了一种与CD3结合的抗体，其中该抗体包含第一抗原结合结构域，该第一抗原结合结构域包含选自由SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:19组成的组的VH序列以及SEQ ID NO:23的VL序列。
[0022]在一个方面，第一抗原结合结构域是Fab分子。
[0023]在一个方面，抗体包含由第一亚基和第二亚基构成的Fc结构域。
[0024]在一个方面，抗体包含与第二抗原结合的第二抗原结合结构域和任选地第三抗原结合结构域。
[0025]在一个方面，第二抗原结合结构域和/或在存在时的第三抗原结合结构域为Fab分子。
[0026]在一个方面，第一抗原结合结构域为Fab分子，其中Fab轻链和Fab重链的可变结构域VL和VH彼此替换或恒定结构域CL和CH1彼此替换，特别是可变结构域VL和VH彼此替换。
[0027]在一个方面，第二抗原结合结构域和在存在时的第三抗原结合结构域为常规Fab分子。
[0028]在一个方面，第二抗原结合结构域以及在存在时的第三抗原结合结构域为Fab分子，其中在恒定结构域CL中，第124位的氨基酸被赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)独立地取代(根据Kabat编号)，并且第123位的氨基酸被赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)独立地取代(根据Kabat编号)；而在恒定结构域CH1中，第147位的氨基酸被谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)独立地取代(根据Kabat EU索引编号)，并且第213位的氨基酸被谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)独立地取代(根据Kabat EU索引编号)。
[0029]在一个方面，第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域彼此融合，任选地经由肽接头融合。
[0030]在一个方面，第一抗原结合结构域和第二抗原结合结构域各自为Fab分子，并且(i)第二抗原结合结构域在Fab重链的C末端与第一抗原结合结构域的Fab重链的N末端融合，或者(ii)第一抗原结合结构域在Fab重链的C末端与第二抗原结合结构域的Fab重链的N末端融合。
[0031]在一个方面，第一抗原结合结构域、第二抗原结合结构域和在存在时的第三抗原
结合结构域各自为Fab分子，并且抗体包含由第一亚基和第二亚基构成的Fc结构域；并且其中(i)第二抗原结合结构域在Fab重链的C末端与第一抗原结合结构域的Fab重链的N末端融合，并且第一抗原结合结构域在Fab重链的C末端与Fc结构域的第一亚基的N末端融合，或者(ii)第一抗原结合结构域在Fab重链的C末端与第二抗原结合结构域的Fab重链的N末端融合，并且第二抗原结合结构域在Fab重链的C末端与Fc结构域的第一亚基的N末端融合；并且第三抗原结合结构域在存在时在Fab重本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种与CD3结合的抗体，其中所述抗体包含第一抗原结合结构域，所述第一抗原结合结构域包含(i)重链可变区(VH)，其选自由以下项组成的组：(a)VH，其包含SEQ ID NO:2的重链互补决定区(HCDR)1、SEQID NO:4的HCDR 2和SEQ ID NO:10的HCDR 3；(b)VH，其包含SEQ ID NO:2的HCDR 1、SEQ ID NO:4的HCDR2和SEQ ID NO:12的HCDR 3；(c)VH，其包含SEQ ID NO:2的HCDR 1、SEQ ID NO:5的HCDR2和SEQ ID NO:9的HCDR 3；(d)VH，其包含SEQ ID NO:3的HCDR 1、SEQ ID NO:6的HCDR2和SEQ ID NO:11的HCDR 3；或(e)VH，其包含SEQ ID NO:3的HCDR 1、SEQ ID NO:7的HCDR2和SEQ ID NO:13的HCDR 3；以及(ii)轻链可变区(VL)，其包含SEQ ID NO:20的轻链互补决定区(LCDR)1、SEQ ID NO:21的LCDR 2和SEQ ID NO:22的LCDR 3。2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述VH包含与选自由SEQ IDNO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17和SEQID NO:19组成的组的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列；和/或所述VL包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。3.一种与CD3结合的抗体，其中所述抗体包含第一抗原结合结构域，所述第一抗原结合结构域包含选自由SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:19组成的组的VH序列以及SEQ ID NO:23的VL序列。4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗体，其中所述第一抗原结合结构域为Fab分子。5.根据权利要求1至4中任一项所述的抗体，其包含由第一亚基和第二亚基构成的Fc结构域。6.根据权利要求1至5中任一项所述的抗体，其包含与第二抗原结合的第二抗原结合结构域和任选地第三抗原结合结构域。7.根据权利要求6所述的抗体，其中所述第二抗原结合结构域和/或在存在时的所述第三抗原结合结构域为Fab分子。8.根据权利要求1至7中任一项所述的抗体，其中所述第一抗原结合结构域为Fab分子，其中Fab轻链和Fab重链的可变结构域VL和VH彼此替换或恒定结构域CL和CH1彼此替换，特别是可变结构域VL和VH彼此替换。9.根据权利要求6至8中任一项所述的抗体，其中所述第二抗原结合结构域和在存在时的所述第三抗原结合结构域为常规Fab分子。10.根据权利要求6至9中任一项所述的抗体，其中所述第二抗原结合结构域和在存在时的所述第三抗原结合结构域为Fab分子，其中在恒定结构域CL中，第124位的氨基酸被赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)独立地取代(根据Kabat编号)，并且第123位的氨基酸被赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)独立地取代(根据Kabat编号)；并且在恒定结构域CH1中，第147位的氨基酸被谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)独立地取代(根据Kabat EU索引编号)，并且第213位的氨基酸被谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)独立地取代(根据Kabat EU索引编号)。11.根据权利要求6至10中任一项所述的抗体，其中所述第一抗原结合结构域与所述第
二抗原结合结构域彼此融合，任选地经由肽接头融合。12.根据权利要求6至11中任一项所述的抗体，其中所述第一抗原结合结构域和所述第二抗原结合结构域各自为Fab分子，并且(i)所述第二抗原结合结构域在Fab重链的C末端与所述第一抗原结合结构域的Fab重链的N末端融合，或者(ii)所述第一抗原结合结构域在Fab重链的C末端与所述第二抗原结合结构域的Fab重链的N末端融合。13.根据权利要求6至12中任一项所述的抗体，其中所述第一抗原结合结构域、所述第二抗原结合结构域和在存在时的所述第三抗原结合结构域各自为Fab分子，并且所述抗体包含由第一亚基和第二亚基构成的Fc结构域；并且其中(i)所述第二抗原结合结构域在Fab重链的C末端与所述第一抗原结合结构域的Fab重链的N末端融合，并且所述第一抗原结合结构域在Fab重链的C末端与所述Fc结构域的第一亚基的N末端融合，或者(ii)所述第一抗原结合结构域在Fab重链的C末端与所述第二抗原结合结构域的Fab重链的N末端融合，并且所述第二抗原结合结构域在Fab重链的C末端与所述Fc结构域的第一亚基的N末端融合；并且所述第三抗原结合结构域在存在时在Fab重链的C末端与所述Fc结构域的第二亚基的N末端融合。14.根据权利要求5至13中任一项所述的抗体，其中所述Fc结构域为IgG Fc结构域，特别是IgG
1 Fc结构域。15.根据权利要求5至14中任一项所述的抗体，其中所述Fc结构域为人Fc结构域。16.根据权利要求5至15中任一项所述的抗体，其中Fc包含促进所述Fc结构域的所述第一亚基和所述第二亚基的缔合的修饰。17.根据权利要求5至16中任一项所述的抗体，其中所述Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代减少与Fc受体的结合和/或降低效应子功能。18.根据权利要求6至17中任一项所述的抗体，其中所述第二抗原为靶细胞抗原，特别是肿瘤细胞抗原。19.根据权利要求6至18中任一项所述的抗体，其中所述第二抗原为TYRP
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1。20.根据权利要求19所述的抗体，其中所述第二抗原结合结构域和在存在时的所述第三抗原结合结构域包含VH和VL，所述VH包含SEQID NO:24的HCDR 1、SEQ ID NO:25的HCDR 2和SEQ ID NO:26的HCDR 3；所述VL包含SEQ ID NO:28的LCDR 1、SEQ ID NO:29的LCDR 2和SEQ ID NO:30的LCDR 3。21.根据权利要求19或20所述的抗体，其中所述第二抗原结合结构域和在存在时的所述第三抗原结合结构域包含VH和/或VL，所述VH包含与SEQ ID NO:27的氨基酸序列至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列；所述VL包含与SEQ ID NO:31的氨基酸序...

【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：豪夫迈，
类型：发明
国别省市：