一种布喹那在制备预防口蹄疫病毒感染的药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及布喹那在制备预防口蹄疫病毒感染的药物中的应用，属于兽用药物技术领域。本发明专利技术所述应用能够为进一步控制口蹄疫的传播提供一类高效、安全且质量可控的抗口蹄疫病毒药物。

Application of Buquetina in the Preparation of Drugs for Preventing Foot and Mouth Disease Virus Infection

The invention relates to the application of Buquina in the preparation of drugs for preventing foot-and-mouth disease virus infection, and belongs to the technical field of veterinary medicine. The application of the invention can provide a kind of highly effective, safe and controllable anti-foot-and-mouth disease virus drug for further controlling the spread of foot-and-mouth disease.

【技术实现步骤摘要】
一种布喹那在制备预防口蹄疫病毒感染的药物中的应用
本专利技术涉及兽用药物
，具体涉及一种布喹那在制备预防口蹄疫病毒感染的药物中的应用。
技术介绍
口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一种急性、热性、高度接触性传染的动物疫病，发病动物的特征症状是口、鼻、蹄和母畜乳头等部位发生水泡，或水泡破损后形成的溃疡或斑痴，表现流涎、跤行和卧地，由此导致生产力大幅下降，造成了巨大的经济损失，我国将口蹄疫列为优先防治病种之一，充分显示了因该病危害引起的各国重视程度。该病具有可快速远距离传播，易感者繁多，口蹄疫传染性强等特点，给口蹄疫的防控带了一定的困难。因此，开发安全有效的控制口蹄疫的策略显得很有必要。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供布喹那在制备预防口蹄疫病毒感染的药物中的应用。所述应用能够为进一步控制口蹄疫的传播提供一类高效、安全且质量可控的抗口蹄疫病毒药物。本专利技术提供了布喹那在制备预防口蹄疫病毒感染的药物中的应用。优选的是，所述口蹄疫病毒包括A型口蹄疫病毒和O型口蹄疫病毒。优选的是，所述布喹那在应用时其浓度范围＞25μmol/L。本专利技术还提供了一种口蹄疫病毒抑制剂，所述抑制剂包括布喹那和药学上可接受的辅料。优选的是，所述抑制剂中布喹那的浓度范围＞50μg/g。优选的是，所述辅料包括淀粉、糖粉、糊精、聚乙二醇和甘油中的一种或多种。本专利技术提供了布喹那在制备预防口蹄疫病毒感染的药物中的应用。布喹那对A型口蹄疫病毒和O型口蹄疫病毒诱导的细胞病变均有抑制作用，抑制病毒的复制，延长感染动物的生存时间，本专利技术将布喹那作为有效组分制备得到的药物能够抑制口蹄疫病毒(FMDV)，防控口蹄疫。细胞试验显示，布喹那毒性低，对A型口蹄疫病毒和O型口蹄疫病毒均具有抑制作用；进一步的实验证实，布喹那只是在FMDV复制早期起作用，而进入病毒复制后期时则不能阻止病毒的复制；体内实验表明布喹那能够显著延缓口蹄疫病毒对乳鼠的致死效应。布喹那能够作为抗FMDV感染的候选药物。附图说明图1为本专利技术实施列1提供的不同浓度的BQR对IBRS-2细胞的细胞毒性图；图2为本专利技术实施列1提供的不同浓度的BQR对O型FMDV感染IBRS-2细胞的抑制作用图；图3为本专利技术实施列1提供的不同浓度的BQR对A型FMDV感染IBRS-2细胞的抑制作用图；图4为本专利技术实施列1提供的不同浓度的BQR对O型FMDV感染IBRS-2细胞中的FMDVmRNA抑制作用图；图5为本专利技术实施列1提供的IFA检测不同浓度的BQR对O型FMDV感染细胞的FMDV蛋白表达抑制作用图；图6为本专利技术实施列1提供的BQR在不同时间段对病毒感染细胞的FMDVmRNA抑制作用图；图7为本专利技术实施列1提供的BQR在不同时间段对病毒感染细胞的VP1蛋白表达抑制作用图；图8为本专利技术实施列1提供的BQR对FMDV感染乳鼠死亡时间的影响。具体实施方式本专利技术提供了布喹那(BQR)在制备预防口蹄疫病毒感染的药物中的应用。在本专利技术中，所述口蹄疫病毒包括A型口蹄疫病毒和O型口蹄疫病毒。布喹那对A型口蹄疫病毒和O型口蹄疫病毒诱导的细胞病变均有抑制作用，抑制病毒的复制，延长感染动物的生存时间，布喹那只是在FMDV复制早期起作用，而进入病毒复制后期时则不能阻止病毒的复制。本专利技术将布喹那作为有效组分制备得到的药物毒性低，对A型口蹄疫病毒和O型口蹄疫病毒均具有抑制作用，能够抑制口蹄疫病毒(FMDV)，防控口蹄疫。在本专利技术中，所述布喹那在应用时其浓度范围＞25μmol/L。本专利技术还提供了一种口蹄疫病毒抑制剂，所述抑制剂包括布喹那和药学上可接受的辅料。在本专利技术中，所述抑制剂中布喹那的浓度范围＞50μg/g。在本专利技术中，所述辅料包括淀粉、糖粉、糊精、聚乙二醇和甘油中的一种或多种。在本专利技术中，所述甘油优选为注射用甘油。本专利技术对所述辅料的来源没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的常规淀粉、糖粉、糊精、聚乙二醇和甘油的市售产品即可。下面结合具体实施例对本专利技术所述的一种布喹那在制备预防口蹄疫病毒感染的药物中的应用做进一步详细的介绍，本专利技术的技术方案包括但不限于以下实施例。实施例11.实验材料1.1细胞、动物、病毒和药物IBRS-2细胞由本课题组保存；3日龄乳鼠购自中国农业科学院兰州兽医研究所实验动物场。FMDV(O/MY98/BY/2010和A/GDMM/CHA/2013)由国家口蹄疫参考实验室保存并提供；BQR购自MCE公司，以DMSO进行配制。1.2试剂DMEM、胎牛血清FBS、胰蛋白酶培养基购自Gibco公司；MTS检测试剂盒购自Abcam公司；TRIzol购自Invitrogen公司；SYBRPremixExTaqⅡ试剂盒均购自宝生物工程(大连)有限公司；RIPA裂解液、BCA法蛋白定量试剂盒、SDS-PAGE凝胶配制试剂盒、ECL购自碧云天公司；BSA、PVDF膜购自BioRad公司；Tween-20、Tween-80购自上海生工生物工程公司；TritonX-100、DMSO购自Sigma公司；小鼠抗β-actin多克隆抗体、HRP标记抗兔或抗鼠IgG抗体均购自Abcam公司；兔抗O型FMDVVP1多克隆抗体由国家口蹄疫参考实验室郑海学博士惠赠；兔抗O型FMDV高免血清由国家口蹄疫参考实验室周广青惠赠。2.实验方法和结果2.1BQR在IBRS-2细胞上的毒性实验：采用MTS法测定BQR对IBRS-2细胞的细胞毒性。待铺到96孔板IBRS-2细胞生长满单层后，弃掉细胞上层培养液，用新鲜的DMEM洗3次，最后加入用含2％FBS的DMEM培养液梯度稀释好的BQR100μL，以BQR的配制溶液相应DMSO浓度作为阴性对照孔，以不作任何处理作细胞对照孔。放入37℃持续培养72h，弃掉上层细胞培养液，用新鲜的DMEM洗三次，再加入100μL新鲜的DMEM，每孔加入20μLMTS溶液。37℃孵育4h后在酶标仪上测490nm处的吸光度值，根据公式“细胞活性率＝(OD药物-OD空白)/(OD阴性-OD空白)×100％”计算出不同浓度的BQR对IBRS-2细胞的毒性。实验独立重复三次。本实验结果如图1所示：MTS结果显示，随着药物浓度的不断增加，细胞的活性率仍在80％以上，说明BQR对IBRS-2细胞毒性极低。2.2BQR在IBRS-2细胞上抗口蹄疫病毒活性的评价：将含10％FBS的DMEM完全培养基上生长良好的IBRS-2细胞铺到96孔板，待IBRS-2细胞生长满单层后，弃掉细胞上层培养液，用新鲜的DMEM洗3次，接种100TCID50O/MY98/BY/2010。1h后，去掉病毒液，用新鲜的DMEM洗3次，加入用含2％FBS的DMEM培养液梯度稀释好的BQR100μL，以BQR的配制溶液相应DMSO浓度作为病毒对照孔，以无BQR、无病毒的作细胞对照孔。放入37℃持续培养48h，弃掉上层细胞培养液，用新鲜的DMEM洗三次，再加入100μL新鲜的DMEM，每孔加入20μLMTS溶液。37℃孵育4h后在酶标仪上测490nm处的吸光度值，根据公式“细胞活性率＝(OD药物-OD空白)/(OD阴性-OD空白)×100％”计算出不同浓度BQR的抗病毒作用。同时收集不同组上清液，q-PCR检测FMDV2B基因的mRNA水平。按照TRIZOL说明书提取细胞的RNA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.布喹那在制备预防口蹄疫病毒感染的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.布喹那在制备预防口蹄疫病毒感染的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述口蹄疫病毒包括A型口蹄疫病毒和O型口蹄疫病毒。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述布喹那在应用时其浓度范围＞25μmol/L。4.一种口蹄疫病毒抑...

【专利技术属性】
技术研发人员：常惠芸，李世芳，龚美娇，邵军军，赵付荣，常艳燕，张永光，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃,62