本发明专利技术高稳定性的PD‑L1抗体试剂，包括有鼠抗人PD‑L1单克隆抗体和抗体稳定剂，抗体稳定剂选自：Peroxidase Stabilizing Buffer，Sigma:P9209(货号P 9209)；鼠抗人PD‑L1单克隆抗体选自：PD‑L1Monoclonal Antibody，Thermo Fisher：14‑5983‑80。本发明专利技术提供的高稳定性PD‑L1抗体试剂，通过抗体稳定剂和PD‑L1单克隆抗体的合理配合，得到了可于4℃稳定保存的抗体，储存方便，避免反复冻融导致的抗体效价降低，同时提供的试剂盒对免疫组化检测PD‑L1时所需试剂进行了整合，使PD‑L1的免疫组化检测更直观、更方便快捷。
High Stability PD-L1 Antibody Reagent and Its Application
The high stability PD L1 antibody reagent of the invention includes mouse anti-human PD L1 monoclonal antibody and antibody stabilizer. The antibody stabilizer is selected from: Peroxidase Stabilizing Buffer, Sigma: P9209 (No. P 9209); mouse anti-human PD L1 monoclonal antibody is selected from: PD_L1 Monoclonal Antibody, Thermo Fisher: 14_83 80. The high stability PD_L1 antibody reagent provided by the invention can obtain the stable preservable antibody at 4 ~C through the reasonable cooperation of the antibody stabilizer and the PD_L1 monoclonal antibody, which is convenient for storage and avoids the reduction of antibody titer caused by repeated freezing and thawing. At the same time, the provided reagent kit integrates the reagents needed for the immunohistochemical detection of PD_L1, so that the immunohistochemical detection of PD_L1 is more intuitive. More convenient and fast.
【技术实现步骤摘要】
高稳定性的PD-L1抗体试剂及其应用
本专利技术涉及分子生物学领域，具体涉及了一种PD-L1免疫组化试剂盒。
技术介绍
肺癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率居肿瘤收尾，且有逐年上升的趋势。非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer，NSCLC)占肺癌总数80-85％左右，约75％的患者发现时已处于中晚期，平均生存期12.9个月，3年、5年生存率较低，分别为19％及11％。目前非小细胞肺癌的治疗方式主要包括手术治疗、化疗、放疗及分子靶向治疗。手术治疗仍然是可能治愈患者的唯一治疗方式，然而许多非小细胞肺癌患者发现时往往已经丧失了手术机会。近年来，NSCLC的治疗特别是药物治疗(如分子靶向治疗)取得了一定进展，但治愈患者的5年生存率并未有显著改善，寻找有效的治疗手段迫在眉睫。近年来，肿瘤的免疫治疗成为继分子靶向治疗之后的新热点，随着肿瘤免疫学机制研究的深入，一些免疫治疗方法引入临床，但大多还处于探索阶段，对治疗肿瘤仍有限。因此对肿瘤免疫机制的深入研究，了解肿瘤发生和发展规律，为寻找更有效的治疗方法具有重要意义。通过对肿瘤免疫耐受和逃逸机制的广泛而深入的研究发现，参与机体免疫调节的协同刺激分子的表达异常在肿瘤的免疫逃逸中扮演着重要角色。其中，程序性死亡因子1(programmeddeath-1，PD-1)及其配体程序性死亡因子1配体1(programmeddeathligand-1，PD-L1)作为CD28/B7协同刺激分子超家族的成员，可以介导负性协同刺激信号，能有效抑制T、B细胞的功能和增殖，同时减少细胞因子IL-2、IL-10和IFN-γ的分泌，该抑制途径参与的免疫调节在肿瘤免疫逃逸、肿瘤微环境形成中起到了重要的作用，与肿瘤的发生和发展密切相关。阻断PD-1/PD-L1通路能够抑制肿瘤微环境的形成并且增强内源性的抗肿瘤免疫应答。目前处于临床试验阶段的PD-1/PD-L1抑制剂有很多，2015年3月，PD-1抑制剂nivolumab已经率先被FDA批准并用于治疗在经铂为基础化疗期间或化疗后发生疾病进展的转移性鳞性非小细胞肺癌。有研究显示，肿瘤组织中PD-L1的表达与NSCLC患者接受免疫治疗的有效性相关，也与NSCLC患者的不良预后和高侵袭性密切相关。因此检测NSCLC组织中PD-L1的表达可辅助NSCLC患者用PD-1/PD-L1抑制剂疗效预测。如何准确、快速的检测出非小细胞肺癌组织中PD-L1蛋白的表达情况是辅助预测PD-1/PD-L1抑制剂疗效的关键因素。目前，检测PD-L1的表达情况主要采用的方法有测序法、实时定量PCR法及组织免疫组化法等方法。这些方法各有优劣，但测序法、实时定量PCR法存在操作复杂、耗时长、成本相对较大、等不足之处，而免疫组化法操作简单、耗时短、成本相对较少有利于检测非小细胞肺癌组织中PD-L1的表达情况。组织免疫组化的方法，使用到的试剂主要包括与组织中需检测的蛋白特异性结合的一抗、二抗和显色剂。传统试剂中的一抗需在较高浓度时、于-20℃甚至更低温度储存，才能维持较高的稳定性。因此，一般免疫组化实验中使用到的一抗试剂或试剂盒，应在孵育一抗前，将一抗从-20℃取出，待溶解并混合均匀后，使用PBS或类似抗体稀释液将一抗稀释至工作浓度，立即使用。因此，传统的用于免疫组化或其他免疫学实验的一抗试剂存在需于-20℃低温储存，且使用前还需稀释步骤，储存和取用较不方便的问题。同时，于-20℃储存用时需溶解，反复冻融会使抗体稳定性变差，易导致效价下降的问题。因此，有必要提供一种已稀释至工作浓度并可以于0℃以上储存、且稳定性好，可以即取即用的PD-L1单克隆抗体试剂。
技术实现思路
基于此，本专利技术的目的在于提供一种已稀释至工作浓度并可以于0℃以上储存、且稳定性好，可以即取即用的PD-L1单克隆抗体试剂。为了实现上述目的，提供具体技术方案如下：一种高稳定性的PD-L1抗体试剂，包括有鼠抗人PD-L1单克隆抗体和抗体稳定剂，所述抗体稳定剂选自：PeroxidaseStabilizingBuffer,Sigma-P9209；所述鼠抗人PD-L1单克隆抗体选自：PD-L1MonoclonalAntibody，ThermoFisher：14-5983-80。在其中一些实施例中，所述鼠抗人PD-L1单克隆抗体在所述抗体稳定剂中的浓度为0.4-0.8μg/ml。在其中一些实施例中，所述鼠抗人PD-L1单克隆抗体在所述抗体稳定剂中的浓度为0.4μg/ml。本专利技术的目的还在于提供一种上述高稳定性的PD-L1抗体试剂的应用。为实现上述目的，具体技术方案如下：上述高稳定性PD-L1抗体试剂在制备PD-L1免疫组化试剂盒中的应用。本专利技术的目的还在于提供一种PD-L1免疫组化试剂盒。为实现上述目的，具体技术方案如下：一种PD-L1免疫组化试剂盒，包括有上述高稳定性PD-L1抗体试剂。在其中一些实施例中，该试剂盒还包括有HRP-羊抗小鼠IgG，可与鼠抗人PD-L1单克隆抗体结合。在其中一些实施例中，该试剂盒还包括有内源性过氧化物酶阻断剂和封闭液。本专利技术还提供一种上述免疫组化试剂盒的应用。具体方案如下：上述试剂盒在制备预测PD-L1抑制剂疗效的检测试剂中的应用。上述试剂盒在制备预测非小细胞肺癌治疗效果的产品中的应用。相对于现有技术，本专利技术具有如下优点和效果：本专利技术通过专利技术人的创造性劳动，在众多抗体及抗体稳定剂中筛选并使用了PeroxidaseStabilizingBuffer,Sigma-P9209；作为抗体稳定剂，用于稀释PD-L1MonoclonalAntibody，ThermoFisher：14-5983-80单克隆抗体，通过抗体稳定剂和PD-L1单克隆抗体的两者的合理选择与搭配，抗体经PeroxidaseStabilizingBuffer,Sigma-P9209稀释至相应的工作浓度后，可于4℃保存且稳定性高，从而实现即取即用，达到了储存及取用方便的目的，同时，避免了于-20℃储存时需反复冻融导致的抗体效价降低。本专利技术另一方面发现，将抗体稀释至不同浓度时，其储存稳定性也具有差异，选择得到0.4-0.8μg/ml的浓度作为工作浓度，该浓度下抗体稳定性高，且免疫组化试验染色效果佳。同时，特定浓度且即取即用的抗体试剂，无需每次使用前临时配制，不但能解决免疫组化实验时抗体的现配现用方法中取用不方便的问题，同时还能避免每次配制时浓度的差异带来的误差。另外，本专利技术提供的试剂盒，使用上述高稳定性抗体，一方面其包含的单克隆抗体能够特异性识别PD-L1，试剂盒储存方便，另一方面对免疫组化检测PD-L1时所需试剂进行了整合，使PD-L1的免疫组化检测更直观、更方便快捷。附图说明图1为实施例1中NSCLC患病肺部组织的染色结果；图2为实施例1中正常肺组织的染色结果；图3为使用Sigma的PeroxidaseStabilizingBuffer(P9209)稀释的抗体进行免疫组化实验染色结果；图4为使用CANDORBioscience的AntibodyStabilizerPBS(131500)稀释的抗体进行免疫组化实验染色结果；图5为使用HRP-Stab(270500)稀释的抗体进行免疫组化实验染色结果；图6本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种高稳定性的PD‑L1抗体试剂，其特征在于，包括有鼠抗人PD‑L1单克隆抗体和抗体稳定剂，所述抗体稳定剂选自：Peroxidase Stabilizing Buffer,Sigma‑P 9209；所述鼠抗人PD‑L1单克隆抗体选自：PD‑L1Monoclonal Antibody，Thermo Fisher：14‑5983‑80。
【技术特征摘要】
1.一种高稳定性的PD-L1抗体试剂，其特征在于，包括有鼠抗人PD-L1单克隆抗体和抗体稳定剂，所述抗体稳定剂选自：PeroxidaseStabilizingBuffer,Sigma-P9209；所述鼠抗人PD-L1单克隆抗体选自：PD-L1MonoclonalAntibody，ThermoFisher：14-5983-80。2.根据权利要求1所述的高稳定性的PD-L1抗体试剂，其特征在于，所述鼠抗人PD-L1单克隆抗体在所述抗体稳定剂中的浓度为0.4-0.8μg/ml。3.根据权利要求2所述的高稳定性的PD-L1抗体试剂，其特征在于，所述鼠抗人PD-L1单克隆...
【专利技术属性】
技术研发人员：董艳，许嘉森，吴诗扬，刘苏燕，
申请(专利权)人：益善生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44
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