The invention discloses a specific method for detecting circulating tumor cells of breast cancer by HER2 gene amplification method. The method comprises the following steps: S1: collecting peripheral blood of breast cancer patients and separating circulating tumor cells of breast cancer from peripheral blood to obtain circulating tumor cells of breast cancer; S2: examining circulating tumor cells of breast cancer separated and testing them. Whether it exists or not; S3: culture and amplification of circulating breast cancer cells; S4: make detection sections of circulating breast cancer cells after culture and amplification; S5: detect the expression of HER2 in circulating breast cancer cells. The method has the advantages of simple operation, high detection accuracy, avoidance of false negative and other conditions, and improvement of the accuracy of breast cancer screening.
【技术实现步骤摘要】
采用HER2基因扩增法检测乳腺癌循环肿瘤细胞的特异性方法
本专利技术涉及分子生物学检验
,具体是涉及一种采用HER2基因扩增法检测乳腺癌循环肿瘤细胞的特异性方法。
技术介绍
恶性肿瘤都会通过血液传播转移到身体的其他器官,而肿瘤转移是导致肿瘤患者死亡的主要原因。肿瘤细胞侵入到原发肿瘤细胞的周围组织中,进入血液和淋巴管系统,形成循环肿瘤细胞CTC,并转运到远端组织,再渗出,适应新的微环境,最终“播种”、“增殖”、“定植”、形成转移灶。因此早期发现血液中的CTC,对于患者预后判断、疗效评价和个体化治疗都有着重要的指导作用。HER2是重要的乳腺癌预后判断因子,HER2也称c-erbB-2基因。原癌基因人类表皮生长因子受体2基因,即c-erbB-2基因,定位于染色体17q12-21.32上,编码相对分子质量为185000的跨膜受体样蛋白,具有酪氨酸激酶活性。检测方法有免疫组化、FISH等。随着女性乳腺癌死亡率的逐年上升,乳腺癌已成为女性死亡的重要原因,但是现有技术中对乳腺癌的检测、预后判断等仍有一定的不足。因此,为了提高对乳腺癌的检测,通过更精准有效的检测排查乳腺癌,进而降低乳腺癌的死亡率,减少乳腺癌对女性的伤害,现需要一种采用HER2基因扩增法检测乳腺癌循环肿瘤细胞的方法来解决改善这一问题。
技术实现思路
为解决上述技术问题,本专利技术提供了一种采用HER2基因扩增法检测乳腺癌循环肿瘤细胞的特异性方法。本专利技术的技术方案是:一种采用HER2基因扩增法检测乳腺癌循环肿瘤细胞的特异性方法,所述方法包括以下步骤:S1:采集乳腺癌患者的外周血,并将外周血中的乳腺癌循环 ...
【技术保护点】
1.一种采用HER2基因扩增法检测乳腺癌循环肿瘤细胞的特异性方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:S1:采集乳腺癌患者的外周血,并将外周血中的乳腺癌循环肿瘤细胞进行分离,得到乳腺癌循环肿瘤细胞;S2:对分离得到的乳腺癌循环肿瘤细胞进行检验,检验其是否存在;S3:若存在,对乳腺癌循环肿瘤细胞进行培养扩增;若不存在,重复步骤S1~S2;S4:将培养扩增后的乳腺癌循环肿瘤细胞制成检测切片;S5:检测乳腺癌循环肿瘤细胞的HER2表达情况。
【技术特征摘要】
1.一种采用HER2基因扩增法检测乳腺癌循环肿瘤细胞的特异性方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:S1:采集乳腺癌患者的外周血,并将外周血中的乳腺癌循环肿瘤细胞进行分离,得到乳腺癌循环肿瘤细胞;S2:对分离得到的乳腺癌循环肿瘤细胞进行检验,检验其是否存在;S3:若存在,对乳腺癌循环肿瘤细胞进行培养扩增;若不存在,重复步骤S1~S2;S4:将培养扩增后的乳腺癌循环肿瘤细胞制成检测切片;S5:检测乳腺癌循环肿瘤细胞的HER2表达情况。2.根据权利要求1所述的一种采用HER2基因扩增法检测乳腺癌循环肿瘤细胞的特异性方法,其特征在于,所述步骤S1中具体为:采集乳腺癌症患者外周血8~10ml,并将采集的血样与裂解液按照1:(5~8)混合,混合均匀后升温至23~28℃并加入占其体积百分比为2.5%的戊二醛,保温1~2分钟后,以2~3℃的速度降温至15~17℃,降温期间滴加占其体积百分比为1.5%的谷氨酸钠,并静置2~3min,用PBS液洗涤离心得到乳腺癌循环肿瘤细胞。3.根据权利要求2所述的一种采用HER2基因扩增法检测乳腺癌循环肿瘤细胞的特异性方法,其特征在于,所述裂解液为红细胞裂解液,且内含有占其体积百分比为0.5%的甘草酸二甲。4.根据权利要求2所述的一种采用HER2基因扩增法检测乳腺癌循环肿瘤细胞的特异性方法,其特征在于,所述采集乳腺癌症患者外周血与红细胞裂解液按照1:(5~8)混合。5.根据权利要求1所述的一种采用HER2基因扩增法检测乳腺癌循环肿瘤细胞的特异性方法,其特征在于,所述步骤S2中具体为:(1)将乳腺癌循环肿瘤细胞的样本进行离心去上清,然后加入温度为38.5℃的0.09mol/LKCl溶液12~15mL,振荡混匀后以0.5℃/min降温至36.5℃静置15~20min;(2)加入3ml的戊二醛和0.7ml的羟甲基纤维素钠,离心吸去上清液,加入适量丙烯醛,制成浓度适中的悬浊细胞液;(3)吸取4~6μL悬浊细胞液滴至防脱载玻片上,老化处理后,依次向玻片加入封闭液和穿孔剂,多次漂洗直至干净,将玻片脱水后自然干燥;(4)将CEA抗原和C-MET探针混合液在24℃±0.5℃下自然混合,待混合均匀后进行离心,取8μL滴在杂交区域,并迅速盖上盖玻片,将玻片置于杂交仪上进行杂交孵育;(5)取出孵育后的玻片,将玻片置于56~61℃的PBS液中振荡5~8s...
【专利技术属性】
技术研发人员:侯净,魏娜,朱海振,戴民,陈欢,陆婧,
申请(专利权)人:贵州省人民医院,
类型:发明
国别省市:贵州,52
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。