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【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医学检验,具体是一种医学检验用痰液处理方法。
技术介绍
1、痰液是气管、支气管、肺泡所产生的分泌物,正常情况下此种分泌物甚少,受到病菌感染等病理情况下,如肺部炎症、肺结核、肿瘤时痰量增加,并有性状、成份的改变,痰液标本是临床微生物学检验最常见的标本,常规获取痰液标本的方法有两种,自然咳痰法或者吸痰法,采用这两种方法获取的痰液标本均质性差,其中细菌等的分布也很不均匀,直接进行检验自然无法得到客观准确的检验结果,因此在医学检验前应当对痰液标本进行预处理。
技术实现思路
1、本专利技术要解决的技术问题就是克服以上的技术缺陷,提供一种医学检验用痰液处理方法可以提高痰液的均质化。
2、为了解决上述问题,本专利技术的技术方案为:包括以下步骤;
3、步骤1、将收集的痰液洗涤,向痰液内加入等量的消化液;
4、步骤2、分解蛋白将痰液均质化后接种;
5、步骤3、将上述痰液进行热处理和酸处理。
6、进一步,所述步骤1中吸取5m l痰液加入带有螺旋帽的离心管中,离心管量程为50m l,加入与痰液标本等量的naoh-nalc前处理液,盖紧离心管盖子,漩涡震荡20s-1min,根据痰液浓稠度可以适当多加入前处理液,并重复震荡。
7、进一步,所述步骤1中的消化液可以为胰酶溶液、糜蛋白酶溶液、二硫苏糖醇溶液中的一种。
8、进一步,所述步骤1中加入消化液后的痰液室温静止15-18min,加入pbs至40ml,离心15m
9、进一步,所述步骤2中将步骤1中的痰液加入1mlpbs,制备成1-1.5ml悬浊液,处理后标本接种至mgit培养管进行液体培养。
10、进一步,所述步骤3中酸处理液有0.2mol/l的kcl和0.2mol/hcl以18:1混合而成,混合后溶液置于玻璃管中加盖高压灭菌代用,取经过消化液处理的痰液,在50摄氏度下水浴30min,加入等量的酸处理液,放置10-15min,离心取出上层清液,加入1ml双蒸水洗涤,再离心去除上层清液,再加入双蒸水混匀后接种培养基。
11、进一步,所述胰酶溶液制备如下取1:250胰酶干粉1g加入100ml灭菌pbs或生理盐水中,调ph值为7.6即为1%的胰酶应用液,使用时向痰液内加入等量的胰酶应用液,37℃恒温90min即可使痰液均质化,所述糜蛋白酶溶液工作原理同胰酶溶液相似,所述二硫苏糖醇溶液和n-乙酰-l-半胱氨酸溶液两者均是强还原剂,作用于粘蛋白的二硫键使痰液均质化。
12、进一步,所述naoh-nalc前处理液制备如下:取4gnaoh,溶于80ml蒸馏水,待全部溶解后加蒸馏水定容至100ml,取2.9g枸阳酸钠加入100ml蒸馏水配置备用,将上述溶液混合后高压蒸气灭菌,保存于2℃-8℃。
13、进一步,所述pbs磷酸盐缓冲液,ph 6.8(0.067mol/l)制备如下:称取8gnacl,0.2gkci,1.44gnazhpo和0.24gkhzpo4,溶于980ml蒸馏水中,用盐酸调节溶液p阳值至6.8,加蒸馏水定容至11,高温高压蒸气灭菌。
14、本专利技术与现有的技术相比的优点在于:
15、1、本专利技术采用的消化液价廉效果好,对细菌生长无影响,糜蛋白酶溶液消化能力更强,消化所需时间更短,二硫苏糖醇溶液和n-乙酰-l-半胱氨酸溶液方便保存,效期较长。
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1.一种医学检验用痰液处理方法,其特征在于:包括以下步骤;
2.根据权利要求1所述的一种医学检验用痰液处理方法,其特征在于:所述步骤1中吸取5ml痰液加入带有螺旋帽的离心管中,离心管量程为50ml,加入与痰液标本等量的NaOH-NALC前处理液,盖紧离心管盖子,漩涡震荡20s-1min,根据痰液浓稠度可以适当多加入前处理液,并重复震荡。
3.根据权利要求1所述的一种医学检验用痰液处理方法,其特征在于:所述步骤1中的消化液可以为胰酶溶液、糜蛋白酶溶液、二硫苏糖醇溶液中的一种。
4.根据权利要求1所述的一种医学检验用痰液处理方法,其特征在于:所述步骤1中加入消化液后的痰液室温静止15-18min,加入PBS至40ml,离心15min,除去上层清液。
5.根据权利要求1所述的一种医学检验用痰液处理方法,其特征在于:所述步骤2中将步骤1中的痰液加入1mlPBS,制备成1-1.5ml悬浊液,处理后标本接种至MGIT培养管进行液体培养。
6.根据权利要求1所述的一种医学检验用痰液处理方法,其特征在于:所述步骤3中酸处理液有0.2mo
7.根据权利要求3所述的一种医学检验用痰液处理方法,其特征在于:所述胰酶溶液制备如下取1:250胰酶干粉1g加入100mL灭菌PBS或生理盐水中,调pH值为7.6即为1%的胰酶应用液,使用时向痰液内加入等量的胰酶应用液,37℃恒温90min即可使痰液均质化,所述糜蛋白酶溶液工作原理同胰酶溶液相似,所述二硫苏糖醇溶液和N-乙酰-L-半胱氨酸溶液两者均是强还原剂,作用于粘蛋白的二硫键使痰液均质化。
8.根据权利要求2所述的一种医学检验用痰液处理方法,其特征在于:所述NaOH-NALC前处理液制备如下:取4gNaOH,溶于80ml蒸馏水,待全部溶解后加蒸馏水定容至100ml,取2.9g枸阳酸钠加入100mL蒸馏水配置备用,将上述溶液混合后高压蒸气灭菌,保存于2℃-8℃。
9.根据权利要求5所述的一种医学检验用痰液处理方法,其特征在于:所述PBS磷酸盐缓冲液,PH 6.8(0.067mol/L)制备如下:称取8g NaCl,0.2gKCI,1.44gNazHPO和0.24gKHzPO4,溶于80mL蒸馏水中,用盐酸调节溶液P阳值至6.8,加蒸馏水定容至11,高温高压蒸气灭菌。
...【技术特征摘要】
1.一种医学检验用痰液处理方法,其特征在于:包括以下步骤;
2.根据权利要求1所述的一种医学检验用痰液处理方法,其特征在于:所述步骤1中吸取5ml痰液加入带有螺旋帽的离心管中,离心管量程为50ml,加入与痰液标本等量的naoh-nalc前处理液,盖紧离心管盖子,漩涡震荡20s-1min,根据痰液浓稠度可以适当多加入前处理液,并重复震荡。
3.根据权利要求1所述的一种医学检验用痰液处理方法,其特征在于:所述步骤1中的消化液可以为胰酶溶液、糜蛋白酶溶液、二硫苏糖醇溶液中的一种。
4.根据权利要求1所述的一种医学检验用痰液处理方法,其特征在于:所述步骤1中加入消化液后的痰液室温静止15-18min,加入pbs至40ml,离心15min,除去上层清液。
5.根据权利要求1所述的一种医学检验用痰液处理方法,其特征在于:所述步骤2中将步骤1中的痰液加入1mlpbs,制备成1-1.5ml悬浊液,处理后标本接种至mgit培养管进行液体培养。
6.根据权利要求1所述的一种医学检验用痰液处理方法,其特征在于:所述步骤3中酸处理液有0.2mol/l的kcl和0.2mol/hcl以18:1混合而成,混合后溶液置于玻璃管中加盖高压灭菌代用,取经过消化液处理的痰液,在50摄氏度下水浴30min,加入...
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