PD-1 抑制剂与 PP2A 磷酸酶抑制剂在膀胱癌治疗药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开PD‑1抑制剂PD‑1抗体和PP2A磷酸酶抑制剂LB100联合作用能够有效地抑制小鼠膀胱癌肿瘤的生长。具体采用的方法是将小鼠膀胱癌细胞种植到小鼠皮下使其成瘤，而后对小鼠进行给药处理，发现PD‑1抗体和LB100协同作用，能够增强免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤活性，有效地抑制小鼠肿瘤的生长，从而达到治疗膀胱癌的作用。

Application of PD-1 Inhibitor and PP2A Phosphatase Inhibitor in the Treatment of Bladder Cancer

The invention discloses that the combined action of the anti-PD 1 inhibitor antibody and the PPAA phosphatase inhibitor LB100 can effectively inhibit the growth of bladder cancer tumors in mice. The specific method is to implant mouse bladder cancer cells into mice subcutaneously to make them tumorigenic, and then administer drugs to mice. It is found that the synergistic effect of anti-PD_1 antibody and LB100 can enhance the killing activity of immune cells to tumor cells, effectively inhibit the growth of mouse bladder cancer, so as to achieve the effect of treating bladder cancer.

【技术实现步骤摘要】
PD-1抑制剂与PP2A磷酸酶抑制剂在膀胱癌治疗药物中的应用
本专利技术仅涉及用PD-1抗体与PP2A磷酸酶抑制剂LB100的联合作用来抑制小鼠肿瘤的生长，从而达到治疗膀胱癌的目的，属于医疗

技术介绍
近几年，免疫疗法已经成为治疗癌症的有效疗法。PD-1/PD-L1免疫疗法是当前备受瞩目的新一类抗癌免疫疗法，旨在利用人体自身的免疫系统抵御癌症，通过阻断PD-1/PD-L1信号通路使癌细胞死亡，具有治疗多种类型肿瘤的潜力。PD1全称是程序性死亡因子-1，是重要的免疫抑制受体，主要表达于活化的T细胞、B细胞、自然杀伤细胞、单核细胞以及间充质干细胞。PD-L1(程序性死亡配体-1)和PD-L2(程序性死亡配体-2)是PD1的配体，是免疫反应中重要的负性调控因子。PD-L1蛋白主要表达于抗原提呈细胞、活化的T细胞、B细胞、巨噬细胞、胎盘滋养层细胞、心脏内皮细胞和胸腺皮质上皮细胞。PD-L1、PD-1是膀胱癌治疗的重要靶点。位于肿瘤细胞表面的PD-L1能够与活化的B细胞、T细胞和巨噬细胞表面的PD-1相互结合，导致免疫逃避，从而使得肿瘤细胞得以生存。目前，针对PD-1/PD-L1的抑制药物在不同的肿瘤治疗中取得了很好的结果。PP2A(蛋白磷酸酶2A)是一种普遍存在的丝氨酸/苏氨酸磷酸酶，可以通过ATM/ATR依赖的和非依赖的方式调控多种蛋白的磷酸化。之前的报道表明PP2A的抑制可使癌细胞对DNA损伤应答敏感，从而导致细胞周期异常，DNA修复抑制和细胞凋亡。另外，有研究表明，PP2A的表达对Treg细胞的功能有重要调节作用，抑制PP2A活性能抑制Treg细胞作用，引起自身免疫增强。LB100是PP2A的抑制剂，在黑色素瘤，转移性嗜铬细胞瘤和胰腺癌治疗中，LB100能够分别增强替莫唑胺，多柔比星和放射治疗的细胞毒性。
技术实现思路
本专利技术涉及PD-1单克隆抗体和PP2A磷酸酶抑制剂LB100的联合用药治疗膀胱癌的新方法。实验结果表明，PD-1单克隆抗体协同PP2A磷酸酶抑制剂LB100，能够增强免疫细胞对膀胱癌肿瘤细胞的杀伤活性，有效抑制肿瘤生长。所述药物混合物，包括PD-1单克隆抗体和蛋白磷酸酶PP2A抑制剂LB100。所述PD-1单克隆抗体和蛋白磷酸酶PP2A抑制剂LB100的质量比为60：1～65：1，优选为62.5：1。所述药物混合物应用在制备治疗膀胱癌药物中。所述药物为注射药物，PD-1单克隆抗体注射药物浓度为0.15～0.25mg/匹，优选为0.2mg/匹；LB100注射药物浓度0.15～0.18mg/kg，优选为0.16mg/kg。附图说明图1为细胞PD-L1蛋白western检测图。收取NIH3T3、MBT-2、MB49细胞蛋白。利用westernblot实验检测各个细胞PD-L1蛋白表达水平。图2为肿瘤的体积生长曲线。MB49(A)和MBT-2(B)细胞进行扩大培养，用基质胶固定，进行小鼠背部两侧种瘤。细胞接种后第三天，随机将小鼠分为四组，每组分5只，一组作为对照，另外三组分别用PD-1单克隆抗体和LB100单独处理以及两个药物联合处理。具体实施方式现结合实例，对本专利技术做进一步说明。实例仅限于说明本专利技术，而非对本专利技术的限定。实施例1PP2A蛋白磷酸酶抑制剂LB100和PD-1单克隆抗体的溶液制备。LB100用ddH2O溶解制备成储存液浓度为5mg/ml。将上述LB100储存液加5％葡萄糖稀释至0.16mg/kg作为动物实验注射浓度。PD-1单克隆抗体加5％葡萄糖稀释至0.2mg/匹作为动物实验注射浓度。实施例2小鼠膀胱癌细胞MBT-2、MB49细胞PD-L1蛋白表达水平检测。选取MBT-2、MB49细胞作为研究对象，NIH3T3细胞为对照，按照文献“TargetingKDM1AattenuatesWnt/β-cateninsignalingpathwaytoeliminatesorafenib-resistantstem-likecellsinhepatocellularcarcinoma”的条件检测细胞PD-L1蛋白表达水平。将MBT-2、MB49细胞铺到10cm皿中，于CO2(5％)培养箱中培养24小时后，按照文献“TargetingKDM1AattenuatesWnt/β-cateninsignalingpathwaytoeliminatesorafenib-resistantstem-likecellsinhepatocellularcarcinoma”条件收取细胞蛋白。利用westernblot实验检测PD-L1蛋白表达水平。最终结果如图1所示。实施例3PD-1单克隆抗体和PP2A磷酸酶抑制剂LB100的联合用药治疗膀胱癌。将小鼠膀胱癌细胞MBT-2和MB49进行扩大培养，用基质胶固定，选取C57BL6老鼠建立小鼠膀胱癌移植瘤模型。每一个瘤种植5x105个细胞，接种小鼠背部两侧。小鼠接种后第三天，把小鼠随机分为四组，每组分5只，一组作为对照，另外三组分别用PD-1单克隆抗体和LB100单独处理以及两个药物联合处理。注射药物浓度：PD-1单克隆抗体--0.2mg/匹，LB100--0.16mg/kg，分别用5％葡萄糖水溶解。每隔一天通过腹腔将药物注射到小鼠体内，每次测量肿瘤的体积。最终结果如图2所示。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种药物混合物，包括PD‑1单克隆抗体和蛋白磷酸酶PP2A抑制剂LB100。

【技术特征摘要】
1.一种药物混合物，包括PD-1单克隆抗体和蛋白磷酸酶PP2A抑制剂LB100。2.根据权利要求1所述药物混合物，其特征在于：PD-1单克隆抗体和蛋白磷酸酶PP2A抑制剂LB100的质量比为60：1～65：1，优选为62.5：1。3.根据权利要求1或2任一所述所...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘扬，尹雅蕾，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁,21